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公开(公告)号：CN113528554B
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202111017414.1
申请日：2021-08-31
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种梨类纤维素合成酶基因PbrCSLD5及其应用，该基因具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。通过农杆菌介导遗传转化方法在拟南芥中过表达PbrCSLD5基因，获得转基因植株，经生物学功能验证，表明本发明克隆的PbrCSLD5基因具有调控梨花粉管细胞壁纤维素合成的作用。
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公开(公告)号：CN108642166B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN201810483192.4
申请日：2018-05-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6881 , C12Q1/6869 , G16B20/30 , G16B30/10 , G16B30/20
Abstract: 本发明公开了利用梨花粉单细胞进行基因组单倍型组装的方法，利用体外花粉生长的特性结合酶法去除细胞壁制备单个无细胞壁的花粉原生质体，利用动物单细胞扩增技术对单倍型的单个花粉细胞进行全基因组扩增并测序。利用测序所获得的单倍型花粉基因组信息，采用‘12位二进制码’对38,304条人工染色体进行编号的方式建立每条人工染色体与‘砀山酥梨’两个亲本之间的联系。最后结合大部分BAC在锚定参考基因组中的定位情况，分别对砀山酥梨34条单倍型的染色体进行了独立的单倍型组装。这种方法有助于后续果树植物基因组的研究，为后续的分子育种提供新的基因资源，为实施绿色农业提供新的遗传资源。
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公开(公告)号：CN113789343A
公开(公告)日：2021-12-14
申请号：CN202110904455.6
申请日：2021-08-06
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种体内检测ROP蛋白活性的方法，包括(1)构建融合蛋白表达载体并转化农杆菌感受态细胞；(2)植物叶片注射；(3)植物活体成像仪定性检测荧光强度；(4)酶标仪定量检测荧光素酶活性：使用酶标仪进行荧光扫描，以显示荧火素酶分解底物后产生荧光的强度来判断荧光素酶活性的强弱，从而检测目标蛋白AtROP1的活性强弱的程度。该方法基于RIC1作为ROP蛋白的下游效应子能特异地与活性形式的ROP结合这一特点，通过荧火素酶互补实验，借助烟草瞬时表达系统，利用植物活体成像仪和酶标仪进行定性定量检测荧光强度，从而实现体内检测ROP蛋白的活性。同时该方法还具有高灵敏度、可视化、可定量化和操作简单高效等特点。
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公开(公告)号：CN112461632A
公开(公告)日：2021-03-09
申请号：CN202011370534.5
申请日：2020-11-30
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种从梨花粉管中提取纤维素的方法。该方法通过体外培养花粉，对花粉管纤维素的粗提取、有机试剂对纤维素的纯化、蒽酮比色法测定纤维素含量定。通过本发明的方法，对于研究花粉管的生长、花粉管细胞壁组成成分含量、细胞骨架、纤维素合成酶的翻译后修饰、转录因子调控、外界环境因素及激素等方面的因素影响下花粉管细胞壁纤维素对应含量变化具有重要意义。同时本发明中所涉及到的花粉管提取纤维素的方法可用于其他蔷薇科植物，其他不同品种可以借鉴使用。
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公开(公告)号：CN109880755B
公开(公告)日：2021-01-12
申请号：CN201910130757.5
申请日：2019-02-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种促进杜梨生长和矿质元素吸收的组合菌剂及其应用，所述的微生物菌剂为Rhizobium sp.W33和Funneliformis caledonium的组合，Rhizobium sp.W33的接种浓度为1.14×108 cfu/g土壤，Funneliformis caledonium的菌剂为菌丝、孢子和侵染的根段以及土壤混合物，其孢子密度约为380个/g土壤，接种量都为5%。该组合菌剂对杜梨幼苗生长促进效果显著，能提高植物对矿质营养的吸收和利用，并能够提高土壤多种酶活性，为杜梨土壤养分的高效利用和杜梨专用肥料的研制提供了新的途径，为植物对土壤肥力的高效利用和农业“减肥”具有重要的指导和借鉴意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111411113A
公开(公告)日：2020-07-14
申请号：CN201811559176.5
申请日：2018-12-19
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/84 , C07K14/415 , A01H5/00 , A01H6/74
Abstract: 本发明公开了梨保卫细胞钾离子吸收通道基因PbrKAT1及其应用，该基因为具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的DNA分子，或与SEQ ID No.1具有85％以上同源性，且编码调节植物保卫细胞中钾离子吸收转运及抗盐相关蛋白的DNA分子。本发明提供的梨保卫细胞钾离子吸收通道基因PbrKAT1，经电生理学功能验证具有吸收转运钾离子及受到胞外钠离子抑制的特性。本发明提供的PbrKAT1基因为调控植物钾离子的吸收转运，调控气孔保卫细胞的运动，提高植物耐盐性，有利于植物抗盐机制的研究，从而降低农业生产成本，提高农业经济效益。
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公开(公告)号：CN111139257A
公开(公告)日：2020-05-12
申请号：CN202010041241.6
申请日：2020-01-15
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/29 , C12P21/02 , C07K14/415 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/22 , C12N5/04 , A01N47/44 , A01P21/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种梨PMEI蛋白的体外表达纯化方法及其应用。通过设计引物克隆梨PMEI基因；构建大肠杆菌重组表达质粒PMEI-pCold-TF；将构建的重组表达质粒PMEI-pCold-TF转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建梨PMEI蛋白重组表达菌株；对重组菌株进行蛋白诱导表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PMEI蛋白；之后，用获得的重组梨PMEI蛋白处理梨花粉管及拟南芥根部。通过本发明的方法，实现了梨PMEI蛋白的首次体外表达及纯化，表达效率高，纯化蛋白稳定存在且纯度完全可以满足相关实验的需要；通过重组梨PMEI蛋白对梨花粉管和拟南芥根部的处理，促进了梨花粉管和拟南芥根部的生长。
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公开(公告)号：CN110616226A
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201911039068.X
申请日：2019-10-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了梨PbELF3b基因的特异性分子标记及其应用，本发明分别从砂梨和新疆梨中分离克隆的PbELF3b等位基因N型和D型及改造后的N-d型和D+d型。D型相对N型缺失一段大小为58bp的d片段。这一片段的缺失可以导致PbELF3b基因具有更强的延迟开花活性。根据内含子缺失片段设计的InDel序列特异性标记引物SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5，可以作为鉴别梨花芽分化发育状况的分子标记，从而提高育种效率，也可使用基因工程方法将PbELF3b的不同类型用于其他植物物种开花时间调控。
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公开(公告)号：CN109880755A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201910130757.5
申请日：2019-02-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种促进杜梨生长和矿质元素吸收的组合菌剂及其应用，所述的微生物菌剂为Rhizobium sp.W33和Funneliformis caledonium的组合，Rhizobium sp.W33的接种浓度为1.14×108 cfu/g土壤，Funneliformis caledonium的菌剂为菌丝、孢子和侵染的根段以及土壤混合物，其孢子密度约为380个/g土壤，接种量都为5%。该组合菌剂对杜梨幼苗生长促进效果显著，能提高植物对矿质营养的吸收和利用，并能够提高土壤多种酶活性，为杜梨土壤养分的高效利用和杜梨专用肥料的研制提供了新的途径，为植物对土壤肥力的高效利用和农业“减肥”具有重要的指导和借鉴意义。
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公开(公告)号：CN103382484B
公开(公告)日：2015-09-16
申请号：CN201310331340.8
申请日：2013-08-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了利用花粉介导反义表达S‐RNase创制梨自交亲和新种质的方法，属于分子遗传学领域。利用双酶切方法构建反义表达载体pGSA1285‐S3，以‘黄花梨’花粉为载体，通过超声波处理花粉介导法将反义表达载体pGSA1285‐S3转入‘丰水’梨，对后代株系的分子鉴定共筛选出含反义表达载体的植株3株，获得自交亲和性梨新种质，弥补了目前自交亲和性梨品种资源稀少的现状，为培育和创新梨自交亲和性品种提供了新的途径，同时也为S‐RNase基因蛋白产物功能验证提供了很好的试材，具有良好的育种实践意义和理论研究价值。
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