公开(公告)号：CN108642166B

公开(公告)日：2022-07-19

申请号：CN201810483192.4

申请日：2018-05-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  施冬青 ,  吴俊 ,  唐海宝 ,  吴巨友 ,  谷超 ,  殷豪 ,  钱铭

IPC: C12Q1/6881 ,  C12Q1/6869 ,  G16B20/30 ,  G16B30/10 ,  G16B30/20

Abstract: 本发明公开了利用梨花粉单细胞进行基因组单倍型组装的方法，利用体外花粉生长的特性结合酶法去除细胞壁制备单个无细胞壁的花粉原生质体，利用动物单细胞扩增技术对单倍型的单个花粉细胞进行全基因组扩增并测序。利用测序所获得的单倍型花粉基因组信息，采用‘12位二进制码’对38,304条人工染色体进行编号的方式建立每条人工染色体与‘砀山酥梨’两个亲本之间的联系。最后结合大部分BAC在锚定参考基因组中的定位情况，分别对砀山酥梨34条单倍型的染色体进行了独立的单倍型组装。这种方法有助于后续果树植物基因组的研究，为后续的分子育种提供新的基因资源，为实施绿色农业提供新的遗传资源。

公开(公告)号：CN108642166A

公开(公告)日：2018-10-12

申请号：CN201810483192.4

申请日：2018-05-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  施冬青 ,  吴俊 ,  唐海宝 ,  吴巨友 ,  谷超 ,  殷豪 ,  钱铭

IPC: C12Q1/6881 ,  C12Q1/6869 ,  G06F19/22

Abstract: 本发明公开了利用梨花粉单细胞进行基因组单倍型组装的方法，利用体外花粉生长的特性结合酶法去除细胞壁制备单个无细胞壁的花粉原生质体，利用动物单细胞扩增技术对单倍型的单个花粉细胞进行全基因组扩增并测序。利用测序所获得的单倍型花粉基因组信息，采用‘12位二进制码’对38,304条人工染色体进行编号的方式建立每条人工染色体与‘砀山酥梨’两个亲本之间的联系。最后结合大部分BAC在锚定参考基因组中的定位情况，分别对砀山酥梨34条单倍型的染色体进行了独立的单倍型组装。这种方法有助于后续果树植物基因组的研究，为后续的分子育种提供新的基因资源，为实施绿色农业提供新的遗传资源。

公开(公告)号：CN108165539A

公开(公告)日：2018-06-15

申请号：CN201711323194.9

申请日：2017-12-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  汤超 ,  吴巨友 ,  王鹏 ,  施冬青

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/70 ,  C07K16/40

Abstract: 本发明公布了一种梨S7‑RNase蛋白的体外表达及其多克隆抗体的制备方法。通过设计引物克隆梨S7‑RNase基因；构建大肠杆菌重组表达载体S7‑cutSignalP‑pCold‑TF；将构建的重组表达载体S7‑cutSignalP‑pCold‑TF转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建表达梨S7‑RNase蛋白的重组菌株；对重组菌株进行表达，并用镍柱亲和层析发纯化重组梨S7‑RNase蛋白；以纯化的重组梨S7‑RNase蛋白为抗原，采用常规多克隆抗体制备方法制备梨S7‑RNase多克隆抗体。通过本发明的方法，实现了梨S7‑RNase蛋白的体外表达并制备出了效价高、特异性好的梨S7‑RNase多克隆抗体，完全可以满足相关实验的需求。