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公开(公告)号：CN115615785A
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202211079148.X
申请日：2022-09-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用预换液技术提高梨花粉管细胞壁甲酯化果胶染色效果的方法，该方法包括采集花粉、花粉的体外培养、使用预换液技术对花粉进行固定和封闭、抗体孵育、观察及测定等步骤。该方法不涉及传统的染料与多糖共价结合的技术，而是使用预换液技术及抗体——抗原特异结合的原理对梨花粉管细胞壁甲酯化果胶进行染色，具有安全高效、特异性强、破损率低、易于观察等优点。该方法对梨花粉管的甲酯化果胶的检测，有助于梨花粉生活力的测定以及对花粉管生长代谢等生殖生理过程的研究，同时也为其他植物组织或花粉管甲酯化果胶染色提供方法参考。
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公开(公告)号：CN112461632B
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202011370534.5
申请日：2020-11-30
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种从梨花粉管中提取纤维素的方法。该方法通过体外培养花粉，对花粉管纤维素的粗提取、有机试剂对纤维素的纯化、蒽酮比色法测定纤维素含量定。通过本发明的方法，对于研究花粉管的生长、花粉管细胞壁组成成分含量、细胞骨架、纤维素合成酶的翻译后修饰、转录因子调控、外界环境因素及激素等方面的因素影响下花粉管细胞壁纤维素对应含量变化具有重要意义。同时本发明中所涉及到的花粉管提取纤维素的方法可用于其他蔷薇科植物，其他不同品种可以借鉴使用。
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公开(公告)号：CN113528554A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202111017414.1
申请日：2021-08-31
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种梨类纤维素合成酶基因PbrCSLD5及其应用，该基因具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。通过农杆菌介导遗传转化方法在拟南芥中过表达PbrCSLD5基因，获得转基因植株，经生物学功能验证，表明本发明克隆的PbrCSLD5基因具有调控梨花粉管细胞壁纤维素合成的作用。
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公开(公告)号：CN110819649A
公开(公告)日：2020-02-21
申请号：CN201910951450.1
申请日：2019-10-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组果胶甲酯酶PbrPME的体外表达方法及其编码基因与应用。通过设计引物克隆梨PbrPME基因；构建大肠杆菌重组表达载体PbrPME-pCold-TF；将构建的重组表达载体PbrPME-pCold-TF转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建表达梨PbrPME蛋白的重组菌株；对重组菌株进行表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PbrPME蛋白；利用重组梨PbrPME蛋白处理梨花粉管，统计处理后花粉管长度，验证重组梨PbrPME蛋白活性。通过本发明的方法，实现了梨PbrPME蛋白的体外表达及其应用，完全可以满足相关实验的需求。
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公开(公告)号：CN117625695A
公开(公告)日：2024-03-01
申请号：CN202311607594.8
申请日：2023-11-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用AS‑S‑RNase提高梨自花结实率的方法，本发明使用反义寡核苷酸技术，并用S‑RNase反义寡核苷酸(AS‑S‑RNase)试剂滴加在柱头上，能够提高不同梨品种的自花结实率。本发明提供AS‑S‑RNase试剂可以促进梨花粉在花柱生长，提高梨柱头的花粉可授性，为梨的生产工作提供了理论依据，有利于减少农业生产成本，提高经济效益。同时，本发明对植物伤害性小，克服自交不亲和的效果显著，应用范围广，适用于梨属植物自交不亲和系；而且该试剂也适用于克服苹果等其他蔷薇科植物的自交不亲和性，对蔷薇科植物的育种和生产应用具有重要的价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113528554B
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202111017414.1
申请日：2021-08-31
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种梨类纤维素合成酶基因PbrCSLD5及其应用，该基因具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。通过农杆菌介导遗传转化方法在拟南芥中过表达PbrCSLD5基因，获得转基因植株，经生物学功能验证，表明本发明克隆的PbrCSLD5基因具有调控梨花粉管细胞壁纤维素合成的作用。
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公开(公告)号：CN112461632A
公开(公告)日：2021-03-09
申请号：CN202011370534.5
申请日：2020-11-30
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种从梨花粉管中提取纤维素的方法。该方法通过体外培养花粉，对花粉管纤维素的粗提取、有机试剂对纤维素的纯化、蒽酮比色法测定纤维素含量定。通过本发明的方法，对于研究花粉管的生长、花粉管细胞壁组成成分含量、细胞骨架、纤维素合成酶的翻译后修饰、转录因子调控、外界环境因素及激素等方面的因素影响下花粉管细胞壁纤维素对应含量变化具有重要意义。同时本发明中所涉及到的花粉管提取纤维素的方法可用于其他蔷薇科植物，其他不同品种可以借鉴使用。
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公开(公告)号：CN111139257A
公开(公告)日：2020-05-12
申请号：CN202010041241.6
申请日：2020-01-15
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/29 , C12P21/02 , C07K14/415 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/22 , C12N5/04 , A01N47/44 , A01P21/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种梨PMEI蛋白的体外表达纯化方法及其应用。通过设计引物克隆梨PMEI基因；构建大肠杆菌重组表达质粒PMEI-pCold-TF；将构建的重组表达质粒PMEI-pCold-TF转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建梨PMEI蛋白重组表达菌株；对重组菌株进行蛋白诱导表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PMEI蛋白；之后，用获得的重组梨PMEI蛋白处理梨花粉管及拟南芥根部。通过本发明的方法，实现了梨PMEI蛋白的首次体外表达及纯化，表达效率高，纯化蛋白稳定存在且纯度完全可以满足相关实验的需要；通过重组梨PMEI蛋白对梨花粉管和拟南芥根部的处理，促进了梨花粉管和拟南芥根部的生长。
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公开(公告)号：CN114908068B
公开(公告)日：2023-05-16
申请号：CN202210492980.6
申请日：2022-05-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及梨胼胝质合成酶PbrCalS5及其编码基因和应用；所述胼胝质合成酶PbrCalS5，其为如下a）或b)中的任一种：a）其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；b）将SEQ ID NO.2 的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物合成胼胝质相关的蛋白质。本发明提供的梨胼胝质合成酶PbrCalS5基因，经生物学功能验证具有促进花粉管生长的作用；敲低表达所述的PbrCalS5能够显著降低花粉管细胞壁中胼胝质的含量，抑制花粉管生长；本发明提供的PbrCalS5促进植物花粉管生长，为梨的生产指导工作提供理论依据，有利于降低农业生产成本，提高经济效益。
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公开(公告)号：CN111139257B
公开(公告)日：2022-10-14
申请号：CN202010041241.6
申请日：2020-01-15
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/29 , C12P21/02 , C07K14/415 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/22 , C12N5/04 , A01N47/44 , A01P21/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种梨PMEI蛋白的体外表达纯化方法及其应用。通过设计引物克隆梨PMEI基因；构建大肠杆菌重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF；将构建的重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建梨PMEI蛋白重组表达菌株；对重组菌株进行蛋白诱导表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PMEI蛋白；之后，用获得的重组梨PMEI蛋白处理梨花粉管及拟南芥根部。通过本发明的方法，实现了梨PMEI蛋白的首次体外表达及纯化，表达效率高，纯化蛋白稳定存在且纯度完全可以满足相关实验的需要；通过重组梨PMEI蛋白对梨花粉管和拟南芥根部的处理，促进了梨花粉管和拟南芥根部的生长。
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