梨胼胝质合成酶PbrCalS5及其编码基因和应用

    公开(公告)号:CN114908068B

    公开(公告)日:2023-05-16

    申请号:CN202210492980.6

    申请日:2022-05-07

    Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及梨胼胝质合成酶PbrCalS5及其编码基因和应用;所述胼胝质合成酶PbrCalS5,其为如下a)或b)中的任一种:a)其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示;b)将SEQ ID NO.2 的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物合成胼胝质相关的蛋白质。本发明提供的梨胼胝质合成酶PbrCalS5基因,经生物学功能验证具有促进花粉管生长的作用;敲低表达所述的PbrCalS5能够显著降低花粉管细胞壁中胼胝质的含量,抑制花粉管生长;本发明提供的PbrCalS5促进植物花粉管生长,为梨的生产指导工作提供理论依据,有利于降低农业生产成本,提高经济效益。

    一种梨PMEI蛋白体外表达的方法及其应用

    公开(公告)号:CN111139257B

    公开(公告)日:2022-10-14

    申请号:CN202010041241.6

    申请日:2020-01-15

    Abstract: 本发明公开了一种梨PMEI蛋白的体外表达纯化方法及其应用。通过设计引物克隆梨PMEI基因;构建大肠杆菌重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF;将构建的重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,构建梨PMEI蛋白重组表达菌株;对重组菌株进行蛋白诱导表达,并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PMEI蛋白;之后,用获得的重组梨PMEI蛋白处理梨花粉管及拟南芥根部。通过本发明的方法,实现了梨PMEI蛋白的首次体外表达及纯化,表达效率高,纯化蛋白稳定存在且纯度完全可以满足相关实验的需要;通过重组梨PMEI蛋白对梨花粉管和拟南芥根部的处理,促进了梨花粉管和拟南芥根部的生长。

    一种梨幼胚培养方法
    6.
    发明公开

    公开(公告)号:CN111699970A

    公开(公告)日:2020-09-25

    申请号:CN202010410106.4

    申请日:2020-05-15

    Abstract: 本发明公开一种梨幼胚培养方法,涉及梨(Pyrus bretschneideri)通过植物细胞培养技术培养离体胚,以破除梨种子休眠,实现较高的种子萌发率。该方法以梨未成熟幼胚或成熟幼胚为外植体,经过外植体消毒、幼胚培养、生根培养、炼苗移栽建立了梨离体幼胚的培养技术体系,以期为建立梨再生体系、利用基因工程和细胞工程改良梨品种奠定基础,该方法可以显著缩短育种进程,提高育种效率,开辟了一种新的育种途径。

    一种体内检测ROP蛋白活性的方法

    公开(公告)号:CN113789343B

    公开(公告)日:2024-07-09

    申请号:CN202110904455.6

    申请日:2021-08-06

    Abstract: 本发明公开了一种体内检测ROP蛋白活性的方法,包括(1)构建融合蛋白表达载体并转化农杆菌感受态细胞;(2)植物叶片注射;(3)植物活体成像仪定性检测荧光强度;(4)酶标仪定量检测荧光素酶活性:使用酶标仪进行荧光扫描,以显示荧火素酶分解底物后产生荧光的强度来判断荧光素酶活性的强弱,从而检测目标蛋白AtROP1的活性强弱的程度。该方法基于RIC1作为ROP蛋白的下游效应子能特异地与活性形式的ROP结合这一特点,通过荧火素酶互补实验,借助烟草瞬时表达系统,利用植物活体成像仪和酶标仪进行定性定量检测荧光强度,从而实现体内检测ROP蛋白的活性。同时该方法还具有高灵敏度、可视化、可定量化和操作简单高效等特点。

    一种利用预换液技术提高梨花粉管细胞壁甲酯化果胶染色效果的方法

    公开(公告)号:CN115615785B

    公开(公告)日:2024-06-14

    申请号:CN202211079148.X

    申请日:2022-09-05

    Abstract: 本发明公开了一种利用预换液技术提高梨花粉管细胞壁甲酯化果胶染色效果的方法,该方法包括采集花粉、花粉的体外培养、使用预换液技术对花粉进行固定和封闭、抗体孵育、观察及测定等步骤。该方法不涉及传统的染料与多糖共价结合的技术,而是使用预换液技术及抗体——抗原特异结合的原理对梨花粉管细胞壁甲酯化果胶进行染色,具有安全高效、特异性强、破损率低、易于观察等优点。该方法对梨花粉管的甲酯化果胶的检测,有助于梨花粉生活力的测定以及对花粉管生长代谢等生殖生理过程的研究,同时也为其他植物组织或花粉管甲酯化果胶染色提供方法参考。

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