公开(公告)号：CN115428730A

公开(公告)日：2022-12-06

申请号：CN202211207419.5

申请日：2022-09-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  刘雪莹 ,  张皓 ,  王鹏 ,  谷超 ,  齐开杰 ,  谢智华 ,  张绍铃

IPC: A01H1/02

Abstract: 本发明公开了一种利用山奈酚提高果树自花结实率的方法，该方法为在进行梨属等蔷薇科植物果树自交授粉前先采用含有山奈酚的花粉培养基溶液处理花蕾的柱头。果树自交不亲和植株花蕾进入始花期，在柱头上喷洒山奈酚溶液，能不同程度地提高自交亲和性。田间实验结果表明，喷施山奈酚之后，梨自交不亲和系的坐果率由原来的4％提高到18％，花粉管的长度是原来的2倍。本发明的方法适用于梨属等蔷薇科植物自交不亲和系，能有效地提高梨属等蔷薇科植物自交亲和性。

公开(公告)号：CN111850022A

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN202010628191.1

申请日：2020-07-02

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  刘雪莹 ,  张皓 ,  王鹏 ,  齐开杰 ,  谢智华 ,  张绍铃

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，公开了一种快速添加或替换目的基因的蛋白标签的方法，包括引物设计、目的基因和蛋白标签片段的扩增、表达载体双酶切及重组酶处理、转化、阳性转化子检测及测序比对。本发明在目的基因和蛋白标签的序列片段上，分别设计两对引物F1、R1和F2、R2，其中F1与R2要分别和表达载体插入位置要有至少15bp的同源臂，R1与F2之间也要有至少15bp的同源臂。目的基因片段、蛋白标签和载体片段在重组酶反应后，利用大肠杆菌转化体系就可以得到同时含有目的基因和添加蛋白标签的环状质粒，该方法适用于构建各种多标签表达载体，具有简单、快速和高效等特点。

公开(公告)号：CN117625695A

公开(公告)日：2024-03-01

申请号：CN202311607594.8

申请日：2023-11-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  张皓 ,  刘雪莹 ,  齐开杰 ,  谢竹 ,  兰驰 ,  汤超 ,  王鹏 ,  张绍铃

IPC: C12N15/87 ,  A01H1/02 ,  A01G17/00 ,  A01N57/16 ,  A01P21/00 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了一种利用AS‑S‑RNase提高梨自花结实率的方法，本发明使用反义寡核苷酸技术，并用S‑RNase反义寡核苷酸(AS‑S‑RNase)试剂滴加在柱头上，能够提高不同梨品种的自花结实率。本发明提供AS‑S‑RNase试剂可以促进梨花粉在花柱生长，提高梨柱头的花粉可授性，为梨的生产工作提供了理论依据，有利于减少农业生产成本，提高经济效益。同时，本发明对植物伤害性小，克服自交不亲和的效果显著，应用范围广，适用于梨属植物自交不亲和系；而且该试剂也适用于克服苹果等其他蔷薇科植物的自交不亲和性，对蔷薇科植物的育种和生产应用具有重要的价值。

公开(公告)号：CN113789343A

公开(公告)日：2021-12-14

申请号：CN202110904455.6

申请日：2021-08-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  张皓 ,  刘雪莹 ,  曹鹏 ,  张明亮 ,  王鹏 ,  张绍铃 ,  谢智华 ,  齐开杰

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/66 ,  C12N15/56 ,  C12N15/29 ,  A01H5/12 ,  A01H6/82 ,  C12Q1/34 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种体内检测ROP蛋白活性的方法，包括(1)构建融合蛋白表达载体并转化农杆菌感受态细胞；(2)植物叶片注射；(3)植物活体成像仪定性检测荧光强度；(4)酶标仪定量检测荧光素酶活性：使用酶标仪进行荧光扫描，以显示荧火素酶分解底物后产生荧光的强度来判断荧光素酶活性的强弱，从而检测目标蛋白AtROP1的活性强弱的程度。该方法基于RIC1作为ROP蛋白的下游效应子能特异地与活性形式的ROP结合这一特点，通过荧火素酶互补实验，借助烟草瞬时表达系统，利用植物活体成像仪和酶标仪进行定性定量检测荧光强度，从而实现体内检测ROP蛋白的活性。同时该方法还具有高灵敏度、可视化、可定量化和操作简单高效等特点。

公开(公告)号：CN115428730B

公开(公告)日：2023-12-19

申请号：CN202211207419.5

申请日：2022-09-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  刘雪莹 ,  张皓 ,  王鹏 ,  谷超 ,  齐开杰 ,  谢智华 ,  张绍铃

IPC: A01H1/02

Abstract: 本发明公开了一种利用山奈酚提高果树自花结实率的方法，该方法为在进行梨属等蔷薇科植物果树自交授粉前先采用含有山奈酚的花粉培养基溶液处理花蕾的柱头。果树自交不亲和植株花蕾进入始花期，在柱头上喷洒山奈酚溶液，能不同程度地提高自交亲和性。田间实验结果表明，喷施山奈酚之后，梨自交不亲和系的坐果率由原来的4％提高到18％，花粉管的长度是原来的2倍。本发明的方法适用于梨属等蔷薇科植物自交不亲和系，能有效地提高梨属等蔷薇科植物自交亲和性。

公开(公告)号：CN113789343B

公开(公告)日：2024-07-09

申请号：CN202110904455.6

申请日：2021-08-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  张皓 ,  刘雪莹 ,  曹鹏 ,  张明亮 ,  王鹏 ,  张绍铃 ,  谢智华 ,  齐开杰

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/66 ,  C12N15/56 ,  C12N15/29 ,  A01H5/12 ,  A01H6/82 ,  C12Q1/34 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种体内检测ROP蛋白活性的方法，包括(1)构建融合蛋白表达载体并转化农杆菌感受态细胞；(2)植物叶片注射；(3)植物活体成像仪定性检测荧光强度；(4)酶标仪定量检测荧光素酶活性：使用酶标仪进行荧光扫描，以显示荧火素酶分解底物后产生荧光的强度来判断荧光素酶活性的强弱，从而检测目标蛋白AtROP1的活性强弱的程度。该方法基于RIC1作为ROP蛋白的下游效应子能特异地与活性形式的ROP结合这一特点，通过荧火素酶互补实验，借助烟草瞬时表达系统，利用植物活体成像仪和酶标仪进行定性定量检测荧光强度，从而实现体内检测ROP蛋白的活性。同时该方法还具有高灵敏度、可视化、可定量化和操作简单高效等特点。