公开(公告)号：CN111704665B

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN202010105415.0

申请日：2020-02-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  赵丹 ,  韩德敏 ,  董雨豪 ,  赵艳兵

IPC: C07K16/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11 ,  A61K39/395 ,  A61P31/16

Abstract: 本发明公开了一种针对H3N2犬流感病毒的重组犬源化抗体scFv‑Fc，其包括，提取感染细胞的总RNA、反转录得cDNA；扩增VH、VL和Fc基因；然后进行PCR融合，提取重组质粒T‑scFv和/或T‑CE‑Fc；以所述T‑scFv和/或T‑CE‑Fc扩增出scFv和/或Fc，将所述scFv和/或所述Fc目的片段连接至克隆载体中，挑选阳性菌株；以所述scFv为模板，用CE‑scFv‑F和/或CE‑scFv‑R为引物，扩增，将产物与载体进行同源重组连接，完成后转化Rosetta感受态细胞，抗性平板筛选后，挑选阳性菌株命名ET‑32a‑scFv‑Fc。本发明可用于类似生物制剂的制备。本发明针对H3N2亚型CIV的重组犬源化抗体，为防控该病毒引起的犬群感染，以及应对其对人类健康和公共卫生构成的潜在威胁奠定物质基础。

公开(公告)号：CN111704665A

公开(公告)日：2020-09-25

申请号：CN202010105415.0

申请日：2020-02-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  赵丹 ,  韩德敏 ,  董雨豪 ,  赵艳兵

IPC: C07K16/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11 ,  A61K39/395 ,  A61P31/16

Abstract: 本发明公开了一种针对H3N2犬流感病毒的重组犬源化抗体scFv-Fc，其包括，提取感染细胞的总RNA、反转录得cDNA；扩增VH、VL和Fc基因；然后进行PCR融合，提取重组质粒T-scFv和/或T-CE-Fc；以所述T-scFv和/或T-CE-Fc扩增出scFv和/或Fc，将所述scFv和/或所述Fc目的片段连接至克隆载体中，挑选阳性菌株；以所述scFv为模板，用CE-scFv-F和/或CE-scFv-R为引物，扩增，将产物与载体进行同源重组连接，完成后转化Rosetta感受态细胞，抗性平板筛选后，挑选阳性菌株命名ET-32a-scFv-Fc。本发明可用于类似生物制剂的制备。本发明针对H3N2亚型CIV的重组犬源化抗体，为防控该病毒引起的犬群感染，以及应对其对人类健康和公共卫生构成的潜在威胁奠定物质基础。

公开(公告)号：CN103734497B

公开(公告)日：2015-12-09

申请号：CN201310632843.9

申请日：2013-11-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 黄克和 ,  刘瑾 ,  叶耿坪 ,  陈兴祥 ,  刘永杰 ,  刘云欢 ,  甘芳

IPC: A23K1/18 ,  A23K1/16 ,  C12N1/18 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开一种抗奶牛热应激的饲料添加剂。酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,Sc)NAU‐ZH‐GY1可在制备抗奶牛热应激的饲料添加剂中的应用。本发明在高渗条件下通过连续补料方式发酵生产出富含甘油、酵母活菌，以及丰富的氨基酸、维生素等微生物代谢产物的抗奶牛热应激的饲料添加剂，能协同发挥甘油和酵母菌的双重功效，可显著提高热应激条件下奶牛的泌乳量、4%乳脂校正乳产量和乳脂率，提高血糖浓度，降低乳中体细胞数、非酯化脂肪酸和尿素氮的浓度，为奶牛补充能量，减缓体重的降低，增强抗氧化能力，降低HSP70mRNA水平，有效缓解了奶牛的热应激。

公开(公告)号：CN104531607A

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201410836765.9

申请日：2014-12-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  郁磊 ,  林焱 ,  赵艳兵 ,  梁姗 ,  马可

IPC: C12N5/071 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所获细胞进一步通过间接免疫荧光试验检测角蛋白18表达，证实成功获得犬原代细支气管上皮细胞。构建含端粒酶基因（hTERT）的真核表达载体pEGFP-hTERT，转染犬原代细支气管上皮细胞后，hTERT基因高表达，细支气管上皮细胞能够稳定传代培养至少20代。本发明制备的犬永生化细支气管上皮细胞，为研究犬流感病毒等犬类病原的感染机制提供了重要的生物材料。

公开(公告)号：CN101955530A

公开(公告)日：2011-01-26

申请号：CN201010529394.1

申请日：2010-11-02

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  陆承平 ,  焦大为

IPC: C07K16/06 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16

Abstract: 本发明涉及鲫鱼IgM提取纯化工艺，一种将鲫鱼IgM从鲫鱼血清中与其它化合物相分离，从而获得高纯度鲫鱼IgM的方法。包括制备鲫鱼血清；通过33%到50%饱和硫酸铵分级沉淀法对鲫鱼血清进行粗提；通过Macro-prephighQ强阴离子交换柱从鲫鱼血清饱和硫酸铵分离沉淀提取物中进一步提取鲫鱼IgM；经离子交换层析获得的样品进一步通过SephacrylTMS-300葡聚糖凝胶层析柱进行精细分离纯化。从5mL鲫鱼血清（蛋白浓度60mg/mL)中纯化得到4.4mgIgM，得率为1.4%，经SDS-PAGE检测、蛋白扫描仪分析，纯度达96%以上。