公开(公告)号：CN104531607B

公开(公告)日：2017-11-07

申请号：CN201410836765.9

申请日：2014-12-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  郁磊 ,  林焱 ,  赵艳兵 ,  梁姗 ,  马可

IPC: C12N5/071 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所获细胞进一步通过间接免疫荧光试验检测角蛋白18表达，证实成功获得犬原代细支气管上皮细胞。构建含端粒酶基因（hTERT）的真核表达载体pEGFP‑hTERT，转染犬原代细支气管上皮细胞后，hTERT基因高表达，细支气管上皮细胞能够稳定传代培养至少20代。本发明制备的犬永生化细支气管上皮细胞，为研究犬流感病毒等犬类病原的感染机制提供了重要的生物材料。

公开(公告)号：CN104531607A

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201410836765.9

申请日：2014-12-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  郁磊 ,  林焱 ,  赵艳兵 ,  梁姗 ,  马可

IPC: C12N5/071 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所获细胞进一步通过间接免疫荧光试验检测角蛋白18表达，证实成功获得犬原代细支气管上皮细胞。构建含端粒酶基因（hTERT）的真核表达载体pEGFP-hTERT，转染犬原代细支气管上皮细胞后，hTERT基因高表达，细支气管上皮细胞能够稳定传代培养至少20代。本发明制备的犬永生化细支气管上皮细胞，为研究犬流感病毒等犬类病原的感染机制提供了重要的生物材料。