缺失21个编码胞外多糖合成基因的基因工程菌及其应用

    公开(公告)号:CN110387346B

    公开(公告)日:2021-01-29

    申请号:CN201910701830.X

    申请日:2019-07-31

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了缺失21个编码胞外多糖合成基因的基因工程菌及其应用,属于基因工程和发酵工程领域。本发明采用CRISPR/Cas9敲除系统敲除大肠杆菌W3110基因组上负责胞外多糖合成和转运的21个基因得到突变菌WJW09,采用WJW09菌株为宿主菌,利用pBHR68异源表达PHB合成基因簇phaCAB,WJW09/pBHR68合成PHB可以达到细胞干重的57.2%,而W3110/pBHR68合成的PHB仅占细胞干重的1.5%。重组菌WJW09/pBHR68的PHB体积产量高达对照菌W3110/pBHR68(1.5%)的38倍。

    一株大肠杆菌膜壁精简底盘菌株及其高产PHB的应用

    公开(公告)号:CN110387347A

    公开(公告)日:2019-10-29

    申请号:CN201910703084.8

    申请日:2019-07-31

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一株大肠杆菌膜壁精简底盘菌株及其高产PHB的应用,属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除野生型大肠杆菌W3110基因组上脂多糖的核心糖基因簇gmhD-waaQ和O-抗原基因簇wbbL-rmlB,胞外多糖基因簇galF-wza,4型荚膜多糖合成基因簇yccC-ymcD,三个鞭毛基因簇flhE-motA、fliY-fliR、flgN-flgL,和一个菌毛基因簇fimB-fimH得到菌株WJW08,然后将PHB合成相关的基因转化到菌株中得到重组菌WJW08/pBHR68,在正常的发酵条件下该重组菌可以合成细胞干重81.9%的PHB,是野生对照菌W3110/pBHR68(1.5%)的54.6倍。

    一种通过敲除rfaD基因高效合成PHB的方法

    公开(公告)号:CN110373435A

    公开(公告)日:2019-10-25

    申请号:CN201910701822.5

    申请日:2019-07-31

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种通过敲除rfaD基因高效合成PHB的方法,属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上rfaD基因后将合成PHB的酶的编码基因转化到菌株中发酵生产PHB。发现rfaD基因的敲除可以显著改善大肠杆菌W3110、DH5α和JM109合成PHB的能力,WJW00/pDXW-8-phaCAB的PHB体积产量较对照菌W3110/pDXW-8-phaCAB提高3.95和3.66倍;WJD00/pDXW-8-phaCAB细胞合成PHB占细胞干重比例较对照菌提高约80%,转化率提高约1.9倍;WJJ00/pDXW-8-phaCAB细胞合成PHB占细胞干重比例较对照菌提高约75%,转化率提高约1.8倍。

    一种低毒的Kdo2-单磷酸类脂A的制备及其应用

    公开(公告)号:CN105001276B

    公开(公告)日:2018-03-16

    申请号:CN201510284792.4

    申请日:2015-05-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种新型低毒的Kdo2‑类脂A的制备及其应用,属于生物工程领域。本发明改造大肠杆菌,合成了一种具有特殊结构、低毒的Kdo2‑单磷酸类脂A,这种Kdo2‑类脂A不含外核心多糖长链、仅由两个2‑酮‑3‑脱氧辛酸、六条脂肪酸链和C4位单磷酸构成。该Kdo2‑类脂A,便于分离提取和检测,且保持了类脂A部分的生物免疫活性,较野生型W3110的LPS也有明显的减毒作用,是极具发展潜力的疫苗佐剂。同时,本发明提供的提取和纯化该Kdo2‑类脂A的方法,标准且步骤简单明了,易于操作。

    一种低毒含五条脂肪酸链的Kdo2-单磷酸类脂A的制备与应用

    公开(公告)号:CN104844665B

    公开(公告)日:2018-03-16

    申请号:CN201510282822.8

    申请日:2015-05-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种低毒含五条脂肪酸链的Kdo2‑单磷酸类脂A的制备与应用,属于生物工程领域。本发明改造大肠杆菌,合成了一种具有特殊结构、低毒的、五链Kdo2‑单磷酸类脂A,这种Kdo2‑类脂A分子不连有核心多糖长链、仅由两个2‑酮‑3‑脱氧辛酸、五条脂肪酸链和C4’位单个磷酸构成。该Kdo2‑类脂A具有双亲性质,便于分离提取和纯化,能够被实施检测和直接鉴定,且保持了类脂A部分的生物免疫活性,较野生型W3110的LPS也有明显的减毒作用,是极具发展潜力的疫苗佐剂。同时,本发明提供的提取和纯化该Kdo2‑类脂A的方法,步骤简单明了,易于操作。

    一株具有内毒素吸附特性的耶氏酵母及其吸附特性研究方法

    公开(公告)号:CN104498375B

    公开(公告)日:2017-05-10

    申请号:CN201410713700.5

    申请日:2014-12-02

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一株具有内毒素吸附特性的耶氏酵母及其吸附特性研究方法,属于酵母菌属的内毒素吸附潜能探究技术领域。本发明公开了一株具有强内毒素吸附特性的食品来源菌株,耶氏酵母菌(Yarrowia lipolytica) SCPW20,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2014528。其鉴定结果为耶氏酵母菌属,且与解脂耶氏酵母标准菌株Yarrowia lipolytica CLIB122的表型相似,拓展了酵母菌属在内毒素去除或治疗领域中的应用潜能。而且,相较于益生菌而言,作为简单真核生物的酵母菌,具有接近高等真核生物研究的优势,该内毒素吸附菌株在吸附特性研究方面具有更广泛的研究价值,拓展了内毒素吸附菌剂的开发应用,更有益于促进内毒素引发的相关疾病研究。

    一种谷氨酸棒杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN105950517A

    公开(公告)日:2016-09-21

    申请号:CN201610515320.X

    申请日:2016-06-30

    Applicant: 江南大学

    CPC classification number: C12R1/15 C12P7/625 C12P19/32

    Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌及其应用,属于微生物领域。所述谷氨酸棒杆菌于2016年6月1日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2016303。该谷氨酸棒杆菌可在细胞内积累较多的丙酰辅酶A,较ATCC13869提高了15.8倍,可用于以丙酰辅酶A为底物的相关代谢产物的生产。当引入聚羟基脂肪酸酯合成基因后,该谷氨酸棒杆菌可以合成PHBV,但在ATCC13869中合成产物为PHB。该发明解决了外源添加丙酸盐或丙酸来生产PHBV的现状,实现了在谷氨酸棒杆菌中无外源添加丙酸或丙酸盐直接生产PHBV,降低了生产成本。

    一种金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用

    公开(公告)号:CN102417896B

    公开(公告)日:2013-04-17

    申请号:CN201110380587.X

    申请日:2011-11-25

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种金黄色葡萄球菌的噬菌体,保藏号为:CCTCCM2011409,该噬菌体对金黄色葡萄球菌具有有效的裂解作用;该噬菌体保存条件为:噬菌体培养液过滤除菌后于4℃下可以保存2个月以上,于-70℃下保存于甘油管中可以保存2年以上;所述噬菌体培养液储液浓度为1011pfu/mL;金黄色葡萄球菌的噬菌体的应用:将噬菌体培养液直接喷涂于固体食品的表面,或混合于含菌食品中,用于抑制食品中的金黄色葡萄球菌。噬菌体在含菌料中的添加量为0.0001~100pfu/cfu。本发明可以有效控制食品体系中的金黄色葡萄球菌污染,相对于抗生素和化学防腐剂而言,具有特异性高、无残留和安全的特点。

    谷氨酸脱羧酶基因及其应用

    公开(公告)号:CN102154345B

    公开(公告)日:2012-10-10

    申请号:CN201110020575.6

    申请日:2011-01-18

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶基因及其应用,属于基因工程技术领域。是将来源于短乳杆菌的谷氨酸脱羧酶基因gadB2、以及与gadB2相连的转运蛋白基因gadC和调控蛋白基因gadR通过棒状杆菌表达载体pDXW8导入到谷氨酸棒杆菌ATCC13032中,重组谷氨酸棒杆菌能够将其自身积累的谷氨酸直接转化成γ-氨基丁酸。

    一种大肠杆菌-棒状杆菌穿梭型诱导表达载体pDXW-8及其构建方法

    公开(公告)号:CN101693901B

    公开(公告)日:2011-10-05

    申请号:CN200910233618.1

    申请日:2009-10-26

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种大肠杆菌-棒状杆菌穿梭型诱导表达载体pDXW-8及其构建方法,属于基因工程技术领域。本发明的表达载体pDXW-8,能在大肠杆菌和棒状杆菌中复制并稳定存在,含有一个在大肠杆菌和棒状杆菌中皆具有转录启动功能的tac启动子,及转录终止功能的终止子rrnBT1T2;含有一个用于棒状杆菌转化子选择的抗性标记卡那霉素标记抗性基因;含有一个用于严谨控制tac启动子表达的负调控基因lacIPF104;含有一个包含11个单一的限制性内切酶切点的多克隆位点MCS。在棒状杆菌中,该载体表达外源蛋白的水平适中,尤其适用于棒状杆菌代谢工程的研究。

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