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公开(公告)号：CN104894218B
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201510254026.3
申请日：2015-05-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/10
Abstract: 本发明公开了利用单菌落琼脂块筛选产反式‑4‑羟脯氨酸重组大肠杆菌的方法。该方法采用重组大肠杆菌为出发菌株，经诱变后，涂布到所设计的平板上，培养至有大小合适的菌落长出；用不锈钢打孔器将菌落依次打成圆形的琼脂块，用镊子夹取琼脂块放置于可吸附性材料上，待其干燥；加试剂①不同氨基酸显示不同颜色；点加试剂②后只有L‑羟脯氨酸颜色变为玫红色，其他氨基酸褪色。据显色圈与菌落直径之比，以及显色圈深浅，筛选产反式‑4‑羟脯氨酸的菌株。本发明的优点是提供了一种以固体培养方式，利用单菌落琼脂块法方便快速的筛选出高产菌株，使筛选具有一定的定向性，大大减少了筛选菌株工作量。
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公开(公告)号：CN104232232B
公开(公告)日：2017-05-24
申请号：CN201410499839.4
申请日：2014-09-25
Applicant: 江南大学
IPC: C10L5/44
Abstract: 本发明公开了一种利用太湖蓝藻的新方法，属于废弃物资源化利用和生物质能源领域。包括如下步骤：太湖蓝藻脱水干燥至8‑25％；其它生物质废弃物脱水干燥至含水量8‑25％，粉碎至5‑10mm。按干重计将20‑100％太湖蓝藻干料与其它的80‑0％生物质原料混匀，经成型机在成型压力为100‑300MPa和成型温度为70‑170℃成型温度时挤压成型，获得固体燃料。本发明之混合型生物质燃料的成型方法：1)本发明具有简便易行、绿色环保、处理效率高、原料成本低、便于大规模工业化生产的特点；2)在固体燃料中添加太湖蓝藻，便于成型，提高了燃料的燃烧特性；3)在实现太湖蓝藻资源化的同时，丰富了固体燃料的原料来源。
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公开(公告)号：CN105675756A
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201610049902.3
申请日：2016-01-25
Applicant: 江南大学
CPC classification number: G01N30/02 , G01N30/74 , G01N2030/027
Abstract: 公开了一种可以同时测定微生物酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系中五种物质(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，L-谷氨酰胺，L-丙氨酸甲酯，L-谷氨酸，L-丙氨酰-L-丙氨酸)的高效液相检测方法。利用邻苯二甲醛对五种物质进行柱前自动化衍生处理，使其具有强荧光基团，用荧光检测器检测。其色谱条件如下：高效液相色谱仪：Agilent 1260 Infinity；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq，5μm，4.6×250mm C18柱；检测器：Agilent 1260 Infinity荧光检测器；流动相组成：乙腈与磷酸盐缓冲液的体积比为12：88，磷酸调节流动相pH至7.4；流动相流速：1.0ml/min；柱室温度：40℃；检测波长：激发波长Ex 338nm，发射波长Em 450nm。该方法实现了寡肽、氨基酸与氨基酸衍生物的同时测定，操作简单，灵敏度高，具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN105567720A
公开(公告)日：2016-05-11
申请号：CN201610034465.8
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N15/70 , C12N9/0071 , C12N9/1217 , C12N2800/101 , C12N2800/22 , C12P13/24 , C12Y114/11002
Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌直接从葡萄糖发酵生产反式-4-羟脯氨酸的方法，该方法是先将突变后的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)与连有色氨酸串联启动子的反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(hyp)重组到合适的载体上，构建proB2A与hyp的共表达体系，然后将此共表达体系导入到大肠杆菌中，得到的重组菌能够实现在无外源L-脯氨酸的条件下，能够高效的利用葡萄糖直接发酵生产反式-4-羟脯氨酸，从而降低了发酵生产反式-4-羟脯氨酸的成本，提高了经济效益。本发明还公开了所述大肠杆菌在羟脯氨酸生产中的应用。
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公开(公告)号：CN104894218A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510254026.3
申请日：2015-05-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/10
Abstract: 本发明公开了利用单菌落琼脂块筛选产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的方法。该方法采用重组大肠杆菌为出发菌株，经诱变后，涂布到所设计的平板上，培养至有大小合适的菌落长出；用不锈钢打孔器将菌落依次打成圆形的琼脂块，用镊子夹取琼脂块放置于可吸附性材料上，待其干燥；加试剂①不同氨基酸显示不同颜色；点加试剂②后只有L-羟脯氨酸颜色变为玫红色，其他氨基酸褪色。据显色圈与菌落直径之比，以及显色圈深浅，筛选产反式-4-羟脯氨酸的菌株。本发明的优点是提供了一种以固体培养方式，利用单菌落琼脂块法方便快速的筛选出高产菌株，使筛选具有一定的定向性，大大减少了筛选菌株工作量。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104894152A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510275209.3
申请日：2015-05-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了一种利用重组大肠杆菌生产顺式-4-羟基-L-脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌由如下方法构建：对已知的L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶基因序列进行优化，再全基因合成优化后的L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶基因，然后将该基因连接到含有合适启动子的载体上，构建了可过量表达L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶的重组质粒，再将该重组质粒导入大肠杆菌中，得到能够将游离的L-脯氨酸转化为顺式-4-羟基-L-脯氨酸的重组大肠杆菌。本发明还公开了所述重组大肠杆菌在生产顺式-4-羟脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，本发明的重组大肠杆菌的顺式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到47.33mg/L。
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公开(公告)号：CN104894087A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510266804.0
申请日：2015-05-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效水解农林生物质原料纤维素酶制剂的复配定制方法。本方法首先用甘油有机溶剂预处理打破农林生物质原料的复杂组成和致密结构，使之易于酶解。然后采用里氏木霉液体发酵方式获得纤维素酶。最后将自产纤维素酶与辅助酶和添加剂混合制得复合纤维素酶制剂，用于酶解甘油有机溶剂预处理的生物质基质。与商业纤维素酶相比，本方法所用纤维素酶来源经济，酶解时所需酶载量低，获得的基质酶解率高。
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公开(公告)号：CN104726386A
公开(公告)日：2015-06-24
申请号：CN201410664371.X
申请日：2014-11-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0071 , C12P13/24 , C12Y114/11002
Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了一种利用发酵法，直接用微生物或酶对原料L-脯氨酸进行羟基化处理，生产顺式-3-L-羟脯氨酸的方法。其中，能进行羟基化处理的微生物是含有顺式-3-L-脯氨酸羟化酶活性的重组大肠杆菌，羟基化反应是在2-酮戊二酸和亚铁离子存在下，催化游离的L-脯氨酸为顺式-3-羟基-L-脯氨酸。本发明公开了所述大肠杆菌在生产顺式-3-L-羟脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，本发明的重组大肠杆菌发酵生产顺式-3-L-的产量达到0.5g/L，表明该重组菌具有良好的工业开发前景。
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公开(公告)号：CN103509813A
公开(公告)日：2014-01-15
申请号：CN201210203625.9
申请日：2012-06-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了一种利用重组大肠杆菌发酵生产L-4-羟脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌由如下方法构建：根据公布的脯氨酸-4-羟化酶基因和色氨酸启动子序列，先优化设计色氨酸串联启动子和脯氨酸-4-羟化酶结构基因，然后全基因合成色氨酸串联启动子基因和脯氨酸-4-羟化酶结构基因后，将启动子和结构基因连接到pAMP质粒上，构建了可过量表达脯氨酸-4-羟化酶的重组质粒pAMP-P2trp-Hyp。本发明还公开了所述大肠杆菌在生产4-羟基脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，本发明的重组大肠杆菌的4-羟基脯氨酸的产量达到0.31g/L，提示该重组菌具有良好的工业开发前景。
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公开(公告)号：CN103194469A
公开(公告)日：2013-07-10
申请号：CN201210003954.9
申请日：2012-01-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种在酿酒酵母蛋白Rav2p的C末端上快速添加FLAG标记的方法，涉及酿酒酵母中Rav2p基因的改造与修饰，属于分子生物学相关领域。本发明提供了一种在酿酒酵母蛋白Rav2p的C末端上快速添加FLAG标记，其特征在于使该菌蛋白Rav2p的C末端上带有FLAG标记，并插入抗生素G418抗性基因KanMX6，有利于重组菌的筛选。利用本发明人构建的线性DNA，实现对Rav2p的基因改造与修饰，从而构建Rav2p的C末端上含有FLAG标记的酿酒酵母重组菌。
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