公开(公告)号：CN105602978A

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201610034446.5

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  姚动邦 ,  王晓姣 ,  魏照辉 ,  黄建华

IPC: C12N15/70 ,  C12P13/24

CPC classification number: C12N9/1217 ,  C12P13/24 ,  C12Y207/02011

Abstract: 本发明公开了一种利用基因组改造的重组大肠杆菌发酵生产L-脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌基因改造菌携带具有点突变的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)，基因组中proB500被替换成proB2500。其中具有点突变的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)是从本实验室保存的含有该基因的重组质粒上酶切获得，proB2500是依proB2A为模板，设计合适的引物，通过PCR获得的。本发明还公开了所述大肠杆菌在L-脯氨酸生产中的应用。

公开(公告)号：CN105567720A

公开(公告)日：2016-05-11

申请号：CN201610034465.8

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  姚动邦 ,  王晓姣 ,  黄建华 ,  魏照辉

IPC: C12N15/70 ,  C12P13/24

CPC classification number: C12N15/70 ,  C12N9/0071 ,  C12N9/1217 ,  C12N2800/101 ,  C12N2800/22 ,  C12P13/24 ,  C12Y114/11002

Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌直接从葡萄糖发酵生产反式-4-羟脯氨酸的方法，该方法是先将突变后的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)与连有色氨酸串联启动子的反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(hyp)重组到合适的载体上，构建proB2A与hyp的共表达体系，然后将此共表达体系导入到大肠杆菌中，得到的重组菌能够实现在无外源L-脯氨酸的条件下，能够高效的利用葡萄糖直接发酵生产反式-4-羟脯氨酸，从而降低了发酵生产反式-4-羟脯氨酸的成本，提高了经济效益。本发明还公开了所述大肠杆菌在羟脯氨酸生产中的应用。

公开(公告)号：CN104894152A

公开(公告)日：2015-09-09

申请号：CN201510275209.3

申请日：2015-05-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  王付才 ,  张胜利 ,  王晓姣 ,  夏紫薇

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/53 ,  C12P13/24

Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了一种利用重组大肠杆菌生产顺式-4-羟基-L-脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌由如下方法构建：对已知的L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶基因序列进行优化，再全基因合成优化后的L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶基因，然后将该基因连接到含有合适启动子的载体上，构建了可过量表达L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶的重组质粒，再将该重组质粒导入大肠杆菌中，得到能够将游离的L-脯氨酸转化为顺式-4-羟基-L-脯氨酸的重组大肠杆菌。本发明还公开了所述重组大肠杆菌在生产顺式-4-羟脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，本发明的重组大肠杆菌的顺式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到47.33mg/L。

公开(公告)号：CN105603017A

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201610035787.4

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  王晓姣 ,  姚动邦 ,  魏照辉 ,  黄建华

IPC: C12P13/24 ,  C12N15/63

CPC classification number: C12P13/24 ,  C12N9/0071 ,  C12Y114/11002

Abstract: 本发明公开了一种利用重组嗜乙酸棒杆菌发酵生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的方法。该重组嗜乙酸棒杆菌携带的重组质粒具有催化脯氨酸生成反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(P4H)。在重组嗜乙酸棒杆菌细胞内，脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸以及亚铁离子存在的情况下，可以将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸。本发明还公开了所述在嗜乙酸棒杆菌反式-4-羟基-L-脯氨酸生产中的应用。

公开(公告)号：CN105572069A

公开(公告)日：2016-05-11

申请号：CN201610035855.7

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  黄建华 ,  王晓姣 ,  姚动邦 ,  魏照辉

IPC: G01N21/33

CPC classification number: G01N21/33

Abstract: 本发明公开一种发酵液中顺式-3-羟基L-脯氨酸的快速检测方法，旨在提供一种使用方便，快速简便，灵敏度高的顺式-3-羟基L-脯氨酸快速检测方法。该方法相比常用的高效液相色谱法和氯胺T法具有无需贵重仪器、操作简单、反应时间短、所需样品少、灵敏度较高等优点。大幅度的提高了工作效率，具有广泛的应用和推广价值。

公开(公告)号：CN105543303A

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201610035648.1

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  王晓姣 ,  姚动邦 ,  黄建华 ,  魏照辉

IPC: C12P13/24

CPC classification number: C12P13/24

Abstract: 本发明公开了一种有效提高羟脯氨酸产量的生物合成方法。其中，生物合成法生产羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内生物体在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下利用脯氨酸羟化酶，将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高羟脯氨酸产量的方法为：切断生物细胞内与L-脯氨酸竞争前体底物谷氨酸的其他代谢途径。其中，其他代谢途径是指，精氨酸代谢途径。通过使用这种方法，反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到921mg/L。

公开(公告)号：CN105543265A

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201610032734.7

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  黄建华 ,  王晓姣 ,  姚动邦 ,  魏照辉

IPC: C12N15/71

CPC classification number: C12N15/71 ,  C12N2800/101 ,  C12N2800/22 ,  C12N2800/60

Abstract: 公开了一种在生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统中有效提高脯氨酸转化率的方法。其中，生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内利用脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下，将游离的L-脯氨酸转化为顺式-3-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高脯氨酸转化率的方法为：打断生物细胞内脯氨酸的降解途径。通过使用这种方法，顺式-3-羟基-L-脯氨酸的转化率达到了100％。