公开(公告)号：CN105602978A

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201610034446.5

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  姚动邦 ,  王晓姣 ,  魏照辉 ,  黄建华

IPC: C12N15/70 ,  C12P13/24

CPC classification number: C12N9/1217 ,  C12P13/24 ,  C12Y207/02011

Abstract: 本发明公开了一种利用基因组改造的重组大肠杆菌发酵生产L-脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌基因改造菌携带具有点突变的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)，基因组中proB500被替换成proB2500。其中具有点突变的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)是从本实验室保存的含有该基因的重组质粒上酶切获得，proB2500是依proB2A为模板，设计合适的引物，通过PCR获得的。本发明还公开了所述大肠杆菌在L-脯氨酸生产中的应用。

公开(公告)号：CN105543155A

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201610034151.8

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  魏照辉

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/67 ,  C12P21/02 ,  C12R1/19

CPC classification number: C07K14/245 ,  C07K5/06026 ,  C12N9/1029 ,  C12N15/67 ,  C12N15/70 ,  C12N2800/101

Abstract: 本发明公开了一种提高含有重组DNA的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物合成系统活性的方法，该重组大肠杆菌携带的重组质粒具有能够催化L-谷氨酰胺与L-丙氨酸甲酯盐酸盐生成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的氨基酸酯酰基转移酶编码基因(SAET)以及能够将L-丙氨酰-L-谷氨酰胺从胞内转运至胞外的多药外排转运蛋白编码基因(ydeE)，两者共表达可以有效地改善菌种的稳定性，提高菌种的产量与转化率。其中的重组质粒是通过将SAET以及ydeE重组到同一质粒上，或将分别含有两个基因的不同抗性的两种重组质粒共转化得到的。该重组菌的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺产量提高到了原来的3.33倍。

公开(公告)号：CN105603017A

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201610035787.4

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  王晓姣 ,  姚动邦 ,  魏照辉 ,  黄建华

IPC: C12P13/24 ,  C12N15/63

CPC classification number: C12P13/24 ,  C12N9/0071 ,  C12Y114/11002

Abstract: 本发明公开了一种利用重组嗜乙酸棒杆菌发酵生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的方法。该重组嗜乙酸棒杆菌携带的重组质粒具有催化脯氨酸生成反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(P4H)。在重组嗜乙酸棒杆菌细胞内，脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸以及亚铁离子存在的情况下，可以将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸。本发明还公开了所述在嗜乙酸棒杆菌反式-4-羟基-L-脯氨酸生产中的应用。

公开(公告)号：CN105572069A

公开(公告)日：2016-05-11

申请号：CN201610035855.7

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  黄建华 ,  王晓姣 ,  姚动邦 ,  魏照辉

IPC: G01N21/33

CPC classification number: G01N21/33

Abstract: 本发明公开一种发酵液中顺式-3-羟基L-脯氨酸的快速检测方法，旨在提供一种使用方便，快速简便，灵敏度高的顺式-3-羟基L-脯氨酸快速检测方法。该方法相比常用的高效液相色谱法和氯胺T法具有无需贵重仪器、操作简单、反应时间短、所需样品少、灵敏度较高等优点。大幅度的提高了工作效率，具有广泛的应用和推广价值。

公开(公告)号：CN105543303A

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201610035648.1

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  王晓姣 ,  姚动邦 ,  黄建华 ,  魏照辉

IPC: C12P13/24

CPC classification number: C12P13/24

Abstract: 本发明公开了一种有效提高羟脯氨酸产量的生物合成方法。其中，生物合成法生产羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内生物体在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下利用脯氨酸羟化酶，将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高羟脯氨酸产量的方法为：切断生物细胞内与L-脯氨酸竞争前体底物谷氨酸的其他代谢途径。其中，其他代谢途径是指，精氨酸代谢途径。通过使用这种方法，反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到921mg/L。

公开(公告)号：CN105543265A

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201610032734.7

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  黄建华 ,  王晓姣 ,  姚动邦 ,  魏照辉

IPC: C12N15/71

CPC classification number: C12N15/71 ,  C12N2800/101 ,  C12N2800/22 ,  C12N2800/60

Abstract: 公开了一种在生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统中有效提高脯氨酸转化率的方法。其中，生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内利用脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下，将游离的L-脯氨酸转化为顺式-3-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高脯氨酸转化率的方法为：打断生物细胞内脯氨酸的降解途径。通过使用这种方法，顺式-3-羟基-L-脯氨酸的转化率达到了100％。

公开(公告)号：CN105675756A

公开(公告)日：2016-06-15

申请号：CN201610049902.3

申请日：2016-01-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  魏照辉

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/74

CPC classification number: G01N30/02 ,  G01N30/74 ,  G01N2030/027

Abstract: 公开了一种可以同时测定微生物酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系中五种物质(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，L-谷氨酰胺，L-丙氨酸甲酯，L-谷氨酸，L-丙氨酰-L-丙氨酸)的高效液相检测方法。利用邻苯二甲醛对五种物质进行柱前自动化衍生处理，使其具有强荧光基团，用荧光检测器检测。其色谱条件如下：高效液相色谱仪：Agilent 1260 Infinity；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq，5μm，4.6×250mm C18柱；检测器：Agilent 1260 Infinity荧光检测器；流动相组成：乙腈与磷酸盐缓冲液的体积比为12：88，磷酸调节流动相pH至7.4；流动相流速：1.0ml/min；柱室温度：40℃；检测波长：激发波长Ex 338nm，发射波长Em 450nm。该方法实现了寡肽、氨基酸与氨基酸衍生物的同时测定，操作简单，灵敏度高，具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN105567720A

公开(公告)日：2016-05-11

申请号：CN201610034465.8

申请日：2016-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  姚动邦 ,  王晓姣 ,  黄建华 ,  魏照辉

IPC: C12N15/70 ,  C12P13/24

CPC classification number: C12N15/70 ,  C12N9/0071 ,  C12N9/1217 ,  C12N2800/101 ,  C12N2800/22 ,  C12P13/24 ,  C12Y114/11002

Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌直接从葡萄糖发酵生产反式-4-羟脯氨酸的方法，该方法是先将突变后的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)与连有色氨酸串联启动子的反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(hyp)重组到合适的载体上，构建proB2A与hyp的共表达体系，然后将此共表达体系导入到大肠杆菌中，得到的重组菌能够实现在无外源L-脯氨酸的条件下，能够高效的利用葡萄糖直接发酵生产反式-4-羟脯氨酸，从而降低了发酵生产反式-4-羟脯氨酸的成本，提高了经济效益。本发明还公开了所述大肠杆菌在羟脯氨酸生产中的应用。