公开(公告)号：CN104894218B

公开(公告)日：2018-09-28

申请号：CN201510254026.3

申请日：2015-05-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  王金霞 ,  孙付保 ,  丁灿灿

IPC: C12Q1/10

Abstract: 本发明公开了利用单菌落琼脂块筛选产反式‑4‑羟脯氨酸重组大肠杆菌的方法。该方法采用重组大肠杆菌为出发菌株，经诱变后，涂布到所设计的平板上，培养至有大小合适的菌落长出；用不锈钢打孔器将菌落依次打成圆形的琼脂块，用镊子夹取琼脂块放置于可吸附性材料上，待其干燥；加试剂①不同氨基酸显示不同颜色；点加试剂②后只有L‑羟脯氨酸颜色变为玫红色，其他氨基酸褪色。据显色圈与菌落直径之比，以及显色圈深浅，筛选产反式‑4‑羟脯氨酸的菌株。本发明的优点是提供了一种以固体培养方式，利用单菌落琼脂块法方便快速的筛选出高产菌株，使筛选具有一定的定向性，大大减少了筛选菌株工作量。

公开(公告)号：CN104894218A

公开(公告)日：2015-09-09

申请号：CN201510254026.3

申请日：2015-05-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  王金霞 ,  孙付保 ,  丁灿灿

IPC: C12Q1/10

Abstract: 本发明公开了利用单菌落琼脂块筛选产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的方法。该方法采用重组大肠杆菌为出发菌株，经诱变后，涂布到所设计的平板上，培养至有大小合适的菌落长出；用不锈钢打孔器将菌落依次打成圆形的琼脂块，用镊子夹取琼脂块放置于可吸附性材料上，待其干燥；加试剂①不同氨基酸显示不同颜色；点加试剂②后只有L-羟脯氨酸颜色变为玫红色，其他氨基酸褪色。据显色圈与菌落直径之比，以及显色圈深浅，筛选产反式-4-羟脯氨酸的菌株。本发明的优点是提供了一种以固体培养方式，利用单菌落琼脂块法方便快速的筛选出高产菌株，使筛选具有一定的定向性，大大减少了筛选菌株工作量。

公开(公告)号：CN104726386A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201410664371.X

申请日：2014-11-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  姚雪娜 ,  丁灿灿 ,  沈松

IPC: C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12P13/24

CPC classification number: C12N9/0071 ,  C12P13/24 ,  C12Y114/11002

Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了一种利用发酵法，直接用微生物或酶对原料L-脯氨酸进行羟基化处理，生产顺式-3-L-羟脯氨酸的方法。其中，能进行羟基化处理的微生物是含有顺式-3-L-脯氨酸羟化酶活性的重组大肠杆菌，羟基化反应是在2-酮戊二酸和亚铁离子存在下，催化游离的L-脯氨酸为顺式-3-羟基-L-脯氨酸。本发明公开了所述大肠杆菌在生产顺式-3-L-羟脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，本发明的重组大肠杆菌发酵生产顺式-3-L-的产量达到0.5g/L，表明该重组菌具有良好的工业开发前景。