公开(公告)号：CN104099391A

公开(公告)日：2014-10-15

申请号：CN201310125868.X

申请日：2013-04-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  高堂杰 ,  顾春银

IPC: C12P21/02 ,  C07K1/22 ,  C12R1/865

Abstract: 一种利用FLAG标签从酿酒酵母细胞中分离RAVE复合物的方法，涉及酿酒酵母中RAVE复合物蛋白的修饰与纯化，属于分子生物学及蛋白组学领域。本发明提供了一种利用FLAG标签的亲和层析原理从酿酒酵母重组菌株BY4742rav2-FLAG细胞中分离RAVE复合物的方法，为后续研究复合物的结构打下了坚实基础。本发明利用FLAG标签亲和层析原理，从大量的细胞破碎液上清中分离出易降解的多亚基调节蛋白RAVE复合物，使得RAVE复合物的浓度与纯度得到极大的提升；由于FLAG标签只含有8个氨基酸，对蛋白的结构与功能的影响微乎其微，在最大程度上保证了分离的RAVE复合物具有活性；此外，通过FLAG标签亲和层析可以一起分离得到与RAVE复合物存在相互作用的一系列蛋白，结合质谱签定可以丰富与RAVE复合物相关的蛋白组学的研究资料。

公开(公告)号：CN103194469A

公开(公告)日：2013-07-10

申请号：CN201210003954.9

申请日：2012-01-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  顾春银 ,  李忠浩 ,  杨冬美

IPC: C12N15/62 ,  C12N1/19 ,  C12R1/865

Abstract: 一种在酿酒酵母蛋白Rav2p的C末端上快速添加FLAG标记的方法，涉及酿酒酵母中Rav2p基因的改造与修饰，属于分子生物学相关领域。本发明提供了一种在酿酒酵母蛋白Rav2p的C末端上快速添加FLAG标记，其特征在于使该菌蛋白Rav2p的C末端上带有FLAG标记，并插入抗生素G418抗性基因KanMX6，有利于重组菌的筛选。利用本发明人构建的线性DNA，实现对Rav2p的基因改造与修饰，从而构建Rav2p的C末端上含有FLAG标记的酿酒酵母重组菌。

公开(公告)号：CN103194440A

公开(公告)日：2013-07-10

申请号：CN201210003952.X

申请日：2012-01-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  顾春银 ,  徐灿 ,  李忠浩 ,  杨冬美

IPC: C12N15/10 ,  C12R1/865

Abstract: 一种从酿酒酵母细胞中高效提取高分子量基因组的方法，包括采用lyticase破壁、蛋白酶k与RNase除去组蛋白和RNA、氯仿抽提、沉淀、溶解。本发明从影响酿酒酵母基因组提取的质和量入手，将破壁和去除蛋白、RNA的过程分开，分别采用不同的缓冲液及添加还原剂来保证破壁的效率和除去杂质的效果。在工艺过程上进行了更细致的优化，增加了抽提的次数，使基因组更加完整并提高了纯度。