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公开(公告)号：CN112553134A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011601201.9
申请日：2020-12-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中表达α‑淀粉酶的方法，属于基因工程以及生物工程技术领域。本发明通过敲除枯草芽孢杆菌WS9基因组上的hrcA基因，获得了枯草芽孢杆菌基因工程WHS9；通过优化Sec分泌系统元件，发现共表达编码Sec分泌系统中膜转运通道的主要成分SecYEG的基因最有利于α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的重组表达；通过筛选到的信号肽平衡了α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的整个分泌过程，最终获得的枯草芽孢杆菌重组菌WHS9GSAB经摇瓶培养后胞外α‑淀粉酶活性为2835.1U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外α‑淀粉酶活性可高达35779.5U/mL。
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公开(公告)号：CN105543265A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610032734.7
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/71
CPC classification number: C12N15/71 , C12N2800/101 , C12N2800/22 , C12N2800/60
Abstract: 公开了一种在生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统中有效提高脯氨酸转化率的方法。其中，生物合成法生产顺式-3-羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内利用脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下，将游离的L-脯氨酸转化为顺式-3-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高脯氨酸转化率的方法为：打断生物细胞内脯氨酸的降解途径。通过使用这种方法，顺式-3-羟基-L-脯氨酸的转化率达到了100％。
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公开(公告)号：CN108841772B
公开(公告)日：2021-03-30
申请号：CN201810777468.X
申请日：2018-07-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种高效表达α‑淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的枯草芽孢杆菌工程菌以pHY300PLK为表达载体、以来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)的高温α‑淀粉酶基因为目的基因、以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5为表达宿主，并在目的基因的上游插入了信号肽基因。利用本发明的枯草芽孢杆菌工程菌可高效表达α‑淀粉酶，将其作为生产菌株，摇瓶发酵48h，可将发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至732.1U/mL。
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公开(公告)号：CN109022396A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201811002140.7
申请日：2018-08-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/28 , C12N15/56 , C12N15/63 , C12N1/21 , C12P19/14 , C12P19/04 , C12P19/02 , C12P19/12 , C12R1/125
CPC classification number: C12N9/2417 , C12P19/02 , C12P19/04 , C12P19/12 , C12P19/14 , C12Y302/01001
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的α‑淀粉酶突变体及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的突变体是通过将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第82位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸或将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第405位氨基酸由丝氨酸突变为精氨酸或同时将将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第82位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸以及第405位氨基酸由丝氨酸突变为精氨酸得到的；将以编码本发明的突变体的基因为目的基因、以pHY300PLK为表达载体、以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5为表达宿主构建得到的重组枯草芽孢杆菌工程菌发酵48h，可使得发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至474.7U/mL。
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公开(公告)号：CN105602978A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201610034446.5
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/1217 , C12P13/24 , C12Y207/02011
Abstract: 本发明公开了一种利用基因组改造的重组大肠杆菌发酵生产L-脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌基因改造菌携带具有点突变的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)，基因组中proB500被替换成proB2500。其中具有点突变的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)是从本实验室保存的含有该基因的重组质粒上酶切获得，proB2500是依proB2A为模板，设计合适的引物，通过PCR获得的。本发明还公开了所述大肠杆菌在L-脯氨酸生产中的应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104928311A
公开(公告)日：2015-09-23
申请号：CN201510275286.9
申请日：2015-05-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌在不添加外源L-脯氨酸的条件下，从葡萄糖发酵产反式-4-羟脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌携带的重组质粒具有突变基因proBA2以及脯氨酸4-羟化酶基因(hyp)，其中proBA2的突变发生在谷氨酸激酶编码基因proB上，突变后的基因编码的谷氨酸激酶受L-脯氨酸的反馈抑制作用显著降低。proBA2与hyp共表达，可以直接利用葡萄糖发酵产反式-4-羟脯氨酸，不需要添加外源的L-脯氨酸。其中的重组质粒是将proBA2和hyp重组到同一个表达质粒上，或将分别含有两个基因的不同抗性的重组质粒共转化得到的。本发明还公开了所述大肠杆菌在羟脯氨酸生产中的应用。
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公开(公告)号：CN112553134B
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN202011601201.9
申请日：2020-12-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中表达α‑淀粉酶的方法，属于基因工程以及生物工程技术领域。本发明通过敲除枯草芽孢杆菌WS9基因组上的hrcA基因，获得了枯草芽孢杆菌基因工程WHS9；通过优化Sec分泌系统元件，发现共表达编码Sec分泌系统中膜转运通道的主要成分SecYEG的基因最有利于α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的重组表达；通过筛选到的信号肽平衡了α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的整个分泌过程，最终获得的枯草芽孢杆菌重组菌WHS9GSAB经摇瓶培养后胞外α‑淀粉酶活性为2835.1U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外α‑淀粉酶活性可高达35779.5U/mL。
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公开(公告)号：CN109022396B
公开(公告)日：2021-03-30
申请号：CN201811002140.7
申请日：2018-08-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/28 , C12N15/56 , C12N15/63 , C12N1/21 , C12P19/14 , C12P19/04 , C12P19/02 , C12P19/12 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的α‑淀粉酶突变体及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的突变体是通过将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第82位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸或将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第405位氨基酸由丝氨酸突变为精氨酸或同时将将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第82位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸以及第405位氨基酸由丝氨酸突变为精氨酸得到的；将以编码本发明的突变体的基因为目的基因、以pHY300PLK为表达载体、以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5为表达宿主构建得到的重组枯草芽孢杆菌工程菌发酵48h，可使得发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至474.7U/mL。
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公开(公告)号：CN105567720A
公开(公告)日：2016-05-11
申请号：CN201610034465.8
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N15/70 , C12N9/0071 , C12N9/1217 , C12N2800/101 , C12N2800/22 , C12P13/24 , C12Y114/11002
Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌直接从葡萄糖发酵生产反式-4-羟脯氨酸的方法，该方法是先将突变后的γ-谷氨酸激酶基因(proB2A)与连有色氨酸串联启动子的反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(hyp)重组到合适的载体上，构建proB2A与hyp的共表达体系，然后将此共表达体系导入到大肠杆菌中，得到的重组菌能够实现在无外源L-脯氨酸的条件下，能够高效的利用葡萄糖直接发酵生产反式-4-羟脯氨酸，从而降低了发酵生产反式-4-羟脯氨酸的成本，提高了经济效益。本发明还公开了所述大肠杆菌在羟脯氨酸生产中的应用。
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公开(公告)号：CN108841772A
公开(公告)日：2018-11-20
申请号：CN201810777468.X
申请日：2018-07-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的枯草芽孢杆菌工程菌以pHY300PLK为表达载体、以来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)的高温α-淀粉酶基因为目的基因、以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5为表达宿主，并在目的基因的上游插入了信号肽基因。利用本发明的枯草芽孢杆菌工程菌可高效表达α-淀粉酶，将其作为生产菌株，摇瓶发酵48h，可将发酵液中α-淀粉酶的酶活提高至732.1U/mL。
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