公开(公告)号：CN104894152A

公开(公告)日：2015-09-09

申请号：CN201510275209.3

申请日：2015-05-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  王付才 ,  张胜利 ,  王晓姣 ,  夏紫薇

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/53 ,  C12P13/24

Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了一种利用重组大肠杆菌生产顺式-4-羟基-L-脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌由如下方法构建：对已知的L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶基因序列进行优化，再全基因合成优化后的L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶基因，然后将该基因连接到含有合适启动子的载体上，构建了可过量表达L-脯氨酸-顺式-4-羟化酶的重组质粒，再将该重组质粒导入大肠杆菌中，得到能够将游离的L-脯氨酸转化为顺式-4-羟基-L-脯氨酸的重组大肠杆菌。本发明还公开了所述重组大肠杆菌在生产顺式-4-羟脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，本发明的重组大肠杆菌的顺式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到47.33mg/L。

公开(公告)号：CN104480172A

公开(公告)日：2015-04-01

申请号：CN201410663050.8

申请日：2014-11-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  何艳春 ,  夏紫薇 ,  王宇婷

IPC: C12P21/02 ,  C12R1/19

Abstract: 公开了一种利用重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的方法，其中，利用重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺是指在一定pH值的水溶液中，作用于游离的L-谷氨酰胺和L-丙氨酸甲酯盐酸盐，生成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的具有氨基酸酯酰基转移酶的蛋白质的基因片段重组到载体里并转入宿主菌，得到带有重组DNA并且使L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物合成系统活性增强的宿主菌。经过以下阶段(1)培养大量表达氨基酸酯酰基转移酶的重组大肠杆菌细胞；(2)过量表达阶段(1)中的氨基酸酯酰基转移酶；(3)将阶段(2)所得作为粗酶源，加入到含有L-谷氨酰胺和L-丙氨酸甲酯盐酸盐底物氨基酸的缓冲溶液中反应，实现L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的高效生产。