公开(公告)号：CN115704016A

公开(公告)日：2023-02-17

申请号：CN202110927367.8

申请日：2021-08-10

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 赵书红 ,  阮进学 ,  苏寅钰 ,  李新云 ,  赵广兴 ,  韩晓松 ,  熊友才 ,  庄荣志 ,  聂雄伟 ,  刘艳文 ,  王伟 ,  李长春 ,  谢胜松

IPC: C12N9/22 ,  C12N9/02 ,  C12N15/62 ,  C12N15/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开了一种利用dCas9‑p450系统进行定点突变的方法。本发明具体地公开了一种将细胞色素p450氧化酶(CYP)家族的关键酶CYP3A4蛋白与dCas9(dead Cas9)蛋白融合形成的融合蛋白及dCas9‑P450系统，所述dCas9‑P450系统包括重组载体dCas9‑p450、sgRNA表达载体、黄曲霉毒素B1(AFB1)，并公开了利用该系统将p450酶在特定基因组区域高表达，从而使得该区域的AFB1代谢成为AFBO，AFBO与靶位点DNA形成络合物，在靶位点定点引入随机突变的方法。利用该方法可以突变特定核苷酸序列，为基因功能研究提供可行的方法和强大、灵活的基因编辑工具。