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公开(公告)号：CN109251933A
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201710569950.X
申请日：2017-07-13
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种与镰刀菌毒素及有毒醛类化合物脱毒相关基因AKR18A1及其应用，所述基因AKR18A1的序列为SEQ ID NO.1所示，编码的氨基酸包含醛酮还原酶的保守的特征结构元件，氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。通过原核表达基因AKR18A1获得纯化的蛋白，体外实验证实该纯化的蛋白可以氧化脱氧雪腐镰刀菌烯醇，形成3-酮基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇；同时，该蛋白还可作用于玉米赤霉烯酮及其衍生物α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇，并能有效降解有毒醛类化合物乙二醛和甲基乙二醛。
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公开(公告)号：CN103805711B
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201410088887.4
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B、选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种提取DNA；C、Southern Blot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D、PCR鉴定内标准基因引物物种特异性：E、PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组,通过Real-time PCR检测,线性关系良好。
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公开(公告)号：CN103421743B
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201310214201.7
申请日：2013-05-31
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物免疫检测技术领域。具体涉及一种分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单克隆重组抗体的制备与应用。将伏马菌素B1分别与载体蛋白KLH和BSA偶联得到抗原，用所得FB1-KLH抗原免疫小鼠，细胞融合后进行选择性培养，利用FB1-BSA偶联物对杂交瘤细胞进行筛选，经亚克隆获得稳定分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C5。通过抗体基因库技术和噬菌体展示技术筛选杂交瘤细胞株2C5的单克隆重组抗体H7。本发明对单克隆抗体和重组抗体进行了大量生产和纯化，所得的2C5单克隆抗体和H7重组抗体可用于伏马菌素的免疫检测。
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公开(公告)号：CN103014012B
公开(公告)日：2014-09-10
申请号：CN201210574749.8
申请日：2012-12-26
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/13 , C07K16/14 , C07K19/00 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了镰刀菌特异单链抗体及制备方法和应用，从串珠镰刀菌菌丝中抽提细胞壁蛋白，免疫来亨母鸡后提取脾脏细胞，利用分子克隆方法和技术构建单链抗体基因文库，通过噬菌体展示技术筛选、PhageELISA、表达ELISA和序列测定，获得了一个高亲和力的镰刀菌特异单链抗体及其编码基因，申请人将其命名为FvSG7，并与碱性磷酸酶基因构建融合蛋白表达载体，在大肠杆菌中进行可溶性表达，得到镰刀菌特异单链抗体FvSG7和FvSG7-AP融合蛋白，该抗体和融合蛋白可用于在植物或植物来源产品中镰刀菌污染情况的免疫学检测，为镰刀菌病情调查及出入境粮食和饲料中镰刀菌污染情况的检验检疫提供可靠有效的检测手段。
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公开(公告)号：CN102453721B
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201010511771.9
申请日：2010-10-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物检验检疫技术领域，具体涉及一种镰刀菌毒素ZEN的分子检测方法及应用。其特征是，针对玉米赤霉烯酮毒素(ZEN)，通过PKS4和PKS13基因序列信息设计了两对PCR引物PKS4-P1和PKS4-P2以及PKS13-P1和PKS13-P12，分别从产ZEN毒素的禾谷镰刀菌基因组中分离得到271bp、302bp的特异片段，采用PCR反应，利用琼脂糖凝胶电泳检测产物，直接根据产物片段的有无及大小，即可检测出禾谷镰刀菌产毒素ZEN的情况。本发明可用于谷物、饲料和食品安全中ZEN毒素的检测分析。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103421743A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310214201.7
申请日：2013-05-31
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物免疫检测技术领域。具体涉及一种分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单克隆重组抗体的制备与应用。将伏马菌素B1分别与载体蛋白KLH和BSA偶联得到抗原，用所得FB1-KLH抗原免疫小鼠，细胞融合后进行选择性培养，利用FB1-BSA偶联物对杂交瘤细胞进行筛选，经亚克隆获得稳定分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C5。通过抗体基因库技术和噬菌体展示技术筛选杂交瘤细胞株2C5的单克隆重组抗体H7。本发明对单克隆抗体和重组抗体进行了大量生产和纯化，所得的2C5单克隆抗体和H7重组抗体可用于伏马菌素的免疫检测。
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公开(公告)号：CN103374614A
公开(公告)日：2013-10-30
申请号：CN201210113251.1
申请日：2012-04-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种转基因小麦定量检测单拷贝RPL21内标准引物及应用，其步骤：A、通过不同数据库筛选结构基因，以非同源区段设计引物，并通过NCBI中Primer-Blast生物信息学工具检测设计引物的物种特异性，并验证其引物在不同数据库中的产物；B、灭菌消毒萌发35种不同小麦品种与15个不同物种种子，取叶片CTAB法提取DNA，并通过普通定性PCR验证其在不同物种间的种属特异性和不同小麦品种中的品种间稳定性,内标准基因引物序列为：名称 Accession 结合位点 序列5’-3’ Size Ta℃；RPL21-7 HM138481.1 928-955 For:CCTAGCCCGTTTCATCTAATGTGTCCTA 161 60；RPL21-8 1088-1062 Rev:TACTACCAACGAGAACCATTAGAGAGC。通过与Southern Blot结果进行比照，可以进行拷贝数精确定量，并且转基因小麦定性检测极限为0.2%，定量检测极限阈值为2%，拷贝数为5个六倍体小麦基因组，与预测的小麦理论检测极限一致。
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公开(公告)号：CN102453093B
公开(公告)日：2013-10-30
申请号：CN201010527116.2
申请日：2010-10-28
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种抗伏马菌素单链抗体的筛选及其在伏马菌素免疫学检测方面的应用。直接从偶联的抗原FB1-KLH免疫的小鼠脾脏细胞出发，利用分子克隆方法和技术构建单链抗体基因文库，再通过噬菌体展示技术筛选、表达ELISA鉴定及序列测定，最后获得一个高亲和力的抗伏马菌素单链抗体及其编码基因，命名为FB-Mu 1H3。该单链抗体在大肠杆菌中进行大量表达纯化后可直接应用于伏马菌素的检测，包括在检测田间作物、饲料、粮食或食品伏马菌素污染中的应用。
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公开(公告)号：CN102051376A
公开(公告)日：2011-05-11
申请号：CN201010103458.1
申请日：2010-01-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物转基因技术领域。具体涉及一种甘蓝型油菜转基因的方法。本发明建立了适合以油菜子叶为外植体的叶绿体转化组织培养体系，通过基因枪转化法获得油菜叶绿体转基因植株。本发明还公开了利用油菜叶绿体片段为同源重组片段，构建油菜叶绿体特异性表达载体，对油菜叶绿体进行转化并获得转基因植株的方法。本发明为甘蓝型油菜的转基因提供了一种新途径。
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公开(公告)号：CN1312475C
公开(公告)日：2007-04-25
申请号：CN200410009300.2
申请日：2004-07-02
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物检验检疫技术领域，具体地说涉及一种镰刀菌毒素的分子检测技术领域。本发明的特征是，通过自行设计的一对引物，从中国和国外采集得到的镰刀菌中检测分离得到镰刀菌毒素DON和NIV基因片段，该片段全长分别为300bp和360bp。本发明仅仅采用一对特异性引物，进行一次PCR扩增反应，利用2.0%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，直接根据产物片断的长度，即可检测出禾谷镰刀菌产生毒素的类型deoxynivalenol(DON)或者nivalenol(NIV)，本发明可应用于谷物、饲料和食品安全中毒素DON和NIV污染的检测。
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