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公开(公告)号：CN103805711B
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201410088887.4
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B、选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种提取DNA；C、Southern Blot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D、PCR鉴定内标准基因引物物种特异性：E、PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组,通过Real-time PCR检测,线性关系良好。
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公开(公告)号：CN102453721B
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201010511771.9
申请日：2010-10-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物检验检疫技术领域，具体涉及一种镰刀菌毒素ZEN的分子检测方法及应用。其特征是，针对玉米赤霉烯酮毒素(ZEN)，通过PKS4和PKS13基因序列信息设计了两对PCR引物PKS4-P1和PKS4-P2以及PKS13-P1和PKS13-P12，分别从产ZEN毒素的禾谷镰刀菌基因组中分离得到271bp、302bp的特异片段，采用PCR反应，利用琼脂糖凝胶电泳检测产物，直接根据产物片段的有无及大小，即可检测出禾谷镰刀菌产毒素ZEN的情况。本发明可用于谷物、饲料和食品安全中ZEN毒素的检测分析。
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公开(公告)号：CN103374614A
公开(公告)日：2013-10-30
申请号：CN201210113251.1
申请日：2012-04-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种转基因小麦定量检测单拷贝RPL21内标准引物及应用，其步骤：A、通过不同数据库筛选结构基因，以非同源区段设计引物，并通过NCBI中Primer-Blast生物信息学工具检测设计引物的物种特异性，并验证其引物在不同数据库中的产物；B、灭菌消毒萌发35种不同小麦品种与15个不同物种种子，取叶片CTAB法提取DNA，并通过普通定性PCR验证其在不同物种间的种属特异性和不同小麦品种中的品种间稳定性,内标准基因引物序列为：名称 Accession 结合位点 序列5’-3’ Size Ta℃；RPL21-7 HM138481.1 928-955 For:CCTAGCCCGTTTCATCTAATGTGTCCTA 161 60；RPL21-8 1088-1062 Rev:TACTACCAACGAGAACCATTAGAGAGC。通过与Southern Blot结果进行比照，可以进行拷贝数精确定量，并且转基因小麦定性检测极限为0.2%，定量检测极限阈值为2%，拷贝数为5个六倍体小麦基因组，与预测的小麦理论检测极限一致。
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公开(公告)号：CN102051376A
公开(公告)日：2011-05-11
申请号：CN201010103458.1
申请日：2010-01-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物转基因技术领域。具体涉及一种甘蓝型油菜转基因的方法。本发明建立了适合以油菜子叶为外植体的叶绿体转化组织培养体系，通过基因枪转化法获得油菜叶绿体转基因植株。本发明还公开了利用油菜叶绿体片段为同源重组片段，构建油菜叶绿体特异性表达载体，对油菜叶绿体进行转化并获得转基因植株的方法。本发明为甘蓝型油菜的转基因提供了一种新途径。
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公开(公告)号：CN103805711A
公开(公告)日：2014-05-21
申请号：CN201410088887.4
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/166
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B、选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种灭菌消毒、萌发取叶片提取DNA；C、SouthernBlot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D、普通PCR鉴定内标准基因引物物种特异性：E、普通PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。确定两对引物做转基因小麦检测时的定性或定量检测内标准基因引物。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组,通过Real-timePCR检测,线性关系良好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102453721A
公开(公告)日：2012-05-16
申请号：CN201010511771.9
申请日：2010-10-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物检验检疫技术领域，具体涉及一种镰刀菌毒素ZEN的分子检测方法及应用。其特征是，针对玉米赤霉烯酮毒素(ZEN)，通过PKS4和PKS13基因序列信息设计了两对PCR引物PKS4-P1和PKS4-P2以及PKS13-P1和PKS13-P12，分别从产ZEN毒素的禾谷镰刀菌基因组中分离得到271bp、302bp的特异片段，采用PCR反应，利用琼脂糖凝胶电泳检测产物，直接根据产物片段的有无及大小，即可检测出禾谷镰刀菌产毒素ZEN的情况。本发明可用于谷物、饲料和食品安全中ZEN毒素的检测分析。
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公开(公告)号：CN102321657A
公开(公告)日：2012-01-18
申请号：CN201110267782.1
申请日：2011-09-09
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种Viviparous1基因及其启动子表达载体的构建方法和应用，其步骤：A、目的基因及其启动子的克隆：合成引物VpromoterF、VpromoterR以玉米851213-1×HE124B基因组DNA为模板，扩增出目的基因Vp1的启动子序列Vpromoter.剥离玉米胚，在含10μmABA MS培养基中，摇床培养，提取mRNA，反转录合成cDNA，引物VgCF和VgCR，扩增出Vp1基因的编码序列Vp1cds，PCR产物经酶切后连接到pBluescript SK+/-，测序；B、载体构建：以pBML-PMI载体为基础，Vpromoter和Vp1cds经酶切后，与pBML-PMI质粒连接，构建成pBML-PMI-Vp1表达载体。C、Viviparous 1基因及其启动子在小麦穗发芽抗性育种中的应用。利用农杆菌介导，转化小麦愈伤，获得转基因小麦。提高了ABA信号传递的敏感性，增强了小麦种子的休眠性，获得的转基因阳性材料穗发芽抗性显著提高。
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公开(公告)号：CN102321657B
公开(公告)日：2015-09-16
申请号：CN201110267782.1
申请日：2011-09-09
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/66
Abstract: 本发明公开了一种Viviparous 1基因及其启动子表达载体的构建方法和应用，其步骤：A、目的基因及其启动子的克隆：合成引物VpromoterF、VpromoterR以玉米851213-1×HE124B基因组DNA为模板，扩增出目的基因Vp1的启动子序列Vpromoter.剥离玉米胚，在含10μmABA MS培养基中，摇床培养，提取mRNA，反转录合成cDNA，引物VgCF和VgCR，扩增出Vp1基因的编码序列Vp1cds，PCR产物经酶切后连接到pBluescript SK+/-，测序；B、载体构建：以pBML-PMI载体为基础，Vpromoter和Vp1cds经酶切后，与pBML-PMI质粒连接，构建成pBML-PMI-Vp1表达载体。C、Viviparous 1基因及其启动子在小麦穗发芽抗性育种中的应用。利用农杆菌介导，转化小麦愈伤，获得转基因小麦。提高了ABA信号传递的敏感性，增强了小麦种子的休眠性，获得的转基因阳性材料穗发芽抗性显著提高。
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公开(公告)号：CN103374614B
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201210113251.1
申请日：2012-04-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种转基因小麦定量检测单拷贝RPL21内标准引物及应用，其步骤：A、通过不同数据库筛选结构基因，以非同源区段设计引物，并通过NCBI中Primer-Blast生物信息学工具检测设计引物的物种特异性，并验证其引物在不同数据库中的产物；B、灭菌消毒萌发35种不同小麦品种与15个不同物种种子，取叶片CTAB法提取DNA，并通过普通定性PCR验证其在不同物种间的种属特异性和不同小麦品种中的品种间稳定性,内标准基因引物序列为：通过与Southern Blot结果进行比照，可以进行拷贝数精确定量，并且转基因小麦定性检测极限为0.2%，定量检测极限阈值为2%，拷贝数为5个六倍体小麦基因组，与预测的小麦理论检测极限一致。
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公开(公告)号：CN103173521A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201110432297.5
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A.通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B.选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种灭菌消毒、萌发取叶片提取DNA；C.SouthernBlot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D.普通PCR鉴定内标准基因引物物种特异性；E.普通PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。确定两对引物做转基因小麦检测时的定性或定量检测内标准基因引物。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组，通过Real-timePCR检测，线性关系良好。
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