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公开(公告)号：CN103805711A
公开(公告)日：2014-05-21
申请号：CN201410088887.4
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/166
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B、选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种灭菌消毒、萌发取叶片提取DNA；C、SouthernBlot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D、普通PCR鉴定内标准基因引物物种特异性：E、普通PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。确定两对引物做转基因小麦检测时的定性或定量检测内标准基因引物。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组,通过Real-timePCR检测,线性关系良好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103374614B
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201210113251.1
申请日：2012-04-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种转基因小麦定量检测单拷贝RPL21内标准引物及应用，其步骤：A、通过不同数据库筛选结构基因，以非同源区段设计引物，并通过NCBI中Primer-Blast生物信息学工具检测设计引物的物种特异性，并验证其引物在不同数据库中的产物；B、灭菌消毒萌发35种不同小麦品种与15个不同物种种子，取叶片CTAB法提取DNA，并通过普通定性PCR验证其在不同物种间的种属特异性和不同小麦品种中的品种间稳定性,内标准基因引物序列为：通过与Southern Blot结果进行比照，可以进行拷贝数精确定量，并且转基因小麦定性检测极限为0.2%，定量检测极限阈值为2%，拷贝数为5个六倍体小麦基因组，与预测的小麦理论检测极限一致。
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公开(公告)号：CN103173521A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201110432297.5
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A.通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B.选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种灭菌消毒、萌发取叶片提取DNA；C.SouthernBlot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D.普通PCR鉴定内标准基因引物物种特异性；E.普通PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。确定两对引物做转基因小麦检测时的定性或定量检测内标准基因引物。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组，通过Real-timePCR检测，线性关系良好。
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公开(公告)号：CN103805711B
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201410088887.4
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B、选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种提取DNA；C、Southern Blot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D、PCR鉴定内标准基因引物物种特异性：E、PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组,通过Real-time PCR检测,线性关系良好。
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公开(公告)号：CN103374614A
公开(公告)日：2013-10-30
申请号：CN201210113251.1
申请日：2012-04-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种转基因小麦定量检测单拷贝RPL21内标准引物及应用，其步骤：A、通过不同数据库筛选结构基因，以非同源区段设计引物，并通过NCBI中Primer-Blast生物信息学工具检测设计引物的物种特异性，并验证其引物在不同数据库中的产物；B、灭菌消毒萌发35种不同小麦品种与15个不同物种种子，取叶片CTAB法提取DNA，并通过普通定性PCR验证其在不同物种间的种属特异性和不同小麦品种中的品种间稳定性,内标准基因引物序列为：名称 Accession 结合位点 序列5’-3’ Size Ta℃；RPL21-7 HM138481.1 928-955 For:CCTAGCCCGTTTCATCTAATGTGTCCTA 161 60；RPL21-8 1088-1062 Rev:TACTACCAACGAGAACCATTAGAGAGC。通过与Southern Blot结果进行比照，可以进行拷贝数精确定量，并且转基因小麦定性检测极限为0.2%，定量检测极限阈值为2%，拷贝数为5个六倍体小麦基因组，与预测的小麦理论检测极限一致。
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公开(公告)号：CN103173521B
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201110432297.5
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B、选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种灭菌消毒、萌发取叶片提取DNA；C、SouthernBlot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D、普通PCR鉴定内标准基因引物物种特异性：E、普通PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。确定两对引物做转基因小麦检测时的定性或定量检测内标准基因引物。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组,通过Real-timePCR检测,线性关系良好。
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