公开(公告)号：CN117821620A

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202311687213.1

申请日：2023-12-08

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  潘蓓珍 ,  杨继飞 ,  王岳峰 ,  刘岩 ,  姜菲菲 ,  宿建胜 ,  周钰娇

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术和免疫学技术在细菌耐药基因检测中的应用，是一种联合分子生物学技术和免疫学技术快速鉴定鲍曼不动杆菌碳青霉烯类(OXA)和喹诺酮类(par C)抗生素耐药性的检测方法。其特点是，双重PCR反应体系(20μL)：2×Multiplex PCRMaster Mix10μL，DNA1μL，引物混合物2μL，余为ddH2O。本发明是基于Ab的OXA和par C基因片段具有高度保守性，使用Primer Premier 5.0设计特异性引物，用基因扩增仪进行PCR扩增，得到的产物一端修饰的生物素首先与金标垫上含有链霉亲和素的胶体金结合，再与胶体金试纸条上的二抗、生物素结合呈现红色线从而建立的双重核酸胶体金试纸条。依据该技术所研制的试剂盒，具有节省时间、提高效率等特点，并提供其简便、快速、检测结果可靠的鉴定方法。

公开(公告)号：CN116287350A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310430461.1

申请日：2023-04-21

Applicant: 北华大学

Inventor： 赵云冬 ,  孙丽媛 ,  姜菲菲 ,  潘蓓珍 ,  刘岩 ,  宿建胜 ,  杨继飞 ,  王岳峰

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术和免疫学技术在微生物鉴定领域的应用，是一种基于分子生物学技术联合免疫学技术快速鉴定鲍曼不动杆菌耐苯唑西林β‑内酰胺酶（OXA）基因的胶体金免疫层析试纸条。其特点是，它包含：PCR反应体系和胶体金试纸条反应体系。基于鲍曼不动杆菌OXA基因片段具有高度的保守性，使用DNAMAN对鲍曼不动杆菌OXA基因片段进行分析，设计鲍曼不动杆菌OXA特异性引物。在上游引物（F）5'用FITC进行标记，下游引物（R）5'用生物素进行标记；普通PCR扩增后产物5'端修饰的生物素首先与金标垫上修饰有链霉素抗生物素蛋白的胶体金结合，检测线上的抗荧光素抗体将一端修饰有荧光素的扩增产物捕获，产生红色的条带；质控线上的生物素捕获胶体金，使质控线同样显色。在保证质控线为阳性的提前下，通过检测线是否出现颜色反应确定是否为耐OXA鲍曼不动杆菌感染，据此建立PCR‑胶体金免疫层析试纸条技术，对鲍曼不动杆菌耐药情况进行快速、可靠的鉴定。

公开(公告)号：CN110714006A

公开(公告)日：2020-01-21

申请号：CN201910465768.9

申请日：2019-05-31

Applicant: 北华大学

Inventor： 王艳双 ,  李明成 ,  孙丽媛 ,  艾金霞 ,  赵云东 ,  周亭亭 ,  苑广信 ,  李盈诺

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明涉及中药现代化研究领域，是一种使用分子克隆及基因测序技术制备川贝母对照药材DNA克隆液的方法。该方法包括：川贝母对照药材基因组DNA的提取，目的基因PCR扩增和回收；目的基因与PGM-T载体连接组成重组DNA分子；重组DNA分子转化到DH5α感受态细胞中；“蓝-白斑”筛选出阳性菌落；提取重组质粒DNA，PCR扩增验证目的基因的正确性；目的基因序列测定与川贝母靶基因进行比对等步骤。本发明能够准确无误的制备出川贝母对照药材DNA克隆液。直接反映贝母独一无二的DNA序列，检测结果具有高度的稳定性、可靠性。并且使得川贝母对照品取之不尽用之不竭，节约更多的正品川贝母用于临床治病救人。

公开(公告)号：CN108456736A

公开(公告)日：2018-08-28

申请号：CN201810446159.4

申请日：2018-05-11

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  李明成 ,  艾金霞 ,  赵云冬 ,  王艳双 ,  王雪松 ,  高丽君

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明涉及中药检测技术领域，是一种牛脊髓DNA鉴定试剂盒，其特征是由样本前处理液、线粒体DNA提取体系、PCR反应体系三部分体系组成。PCR反应体系总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL。一种牛脊髓DNA鉴定方法是设计牛脊髓特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤。判断标准：PCR扩增结果出现254bp条带为正品牛脊髓，出现多条或不出现均为伪品牛脊髓，鉴定方法能够准确鉴定牛脊髓真伪。

公开(公告)号：CN115637284A

公开(公告)日：2023-01-24

申请号：CN202111568555.2

申请日：2021-12-21

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  姜菲菲 ,  宋顺佳 ,  赵远 ,  贾慧建 ,  王丹 ,  赵潇颖 ,  王岳峰 ,  邵学超

IPC: C12Q1/14

Abstract: 本发明涉及微生物检测技术领域，是呼吸道常见革兰阳性菌复合乳胶凝集鉴定试剂盒，其特征是由样本处理液、阳性对照品、阴性对照品、乳胶检测试剂四部分组成，包括：复合乳胶检测试剂1管，3mL/管；阳性对照样本1管，0.6mL/管；阴性对照样本1管，0.6mL/管；样本处理液1管，0.6mL/管。呼吸道常见革兰阳性菌鉴定方法是设计三种不同颜色乳胶凝集颗粒，确定最佳包被比例、包被条件和结果判定等步骤。检测样本出现乳胶凝集现象时，即判为阳性结果：蓝色凝集代表金黄色葡萄球菌阳性，红色凝集代表肺炎链球菌阳性，白色凝集代表乙型溶血性链球菌阳性；根据相应凝集颜色判定是单独一种或两种、甚至三种混合阳性。不出现凝集则判为阴性。鉴定方法能够直接准确鉴定且区分是金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌感染。

公开(公告)号：CN111206103A

公开(公告)日：2020-05-29

申请号：CN201811395719.4

申请日：2018-11-21

Applicant: 北华大学

Inventor： 李明成 ,  孙丽媛 ,  艾金霞 ,  高丽君 ,  王艳双 ,  王雪松 ,  赵云东

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明涉及中药检测技术领域，是一种牛鞭、驴鞭及马鞭多重PCR检测试剂盒，其特征是由鉴定反应、阳性对照反应和阴性对照反应三部分体系组成。总体积为100μL，含有缓冲液，dNTP，引物1、引物2和引物3，Taq DNA聚合酶，模板DNA提取液，双蒸馏水补齐至100μL。一种牛鞭、驴鞭及马鞭多重PCR检测鉴定方法是设计合成牛鞭、驴鞭及马鞭三对特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤。判断标准：琼脂糖凝胶出现扩增长度为254bp的是牛鞭，出现扩增长度为447bp的是驴鞭，出现扩增长度为595bp的是马鞭。牛鞭、驴鞭及马鞭多重PCR检测试剂盒及鉴定方法能够同时准确区别牛鞭、驴鞭及马鞭。

公开(公告)号：CN110358843A

公开(公告)日：2019-10-22

申请号：CN201910686384.X

申请日：2019-07-29

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  王天添 ,  陈思秀 ,  刘玟妍 ,  关奕泽 ,  艾金霞 ,  李明成 ,  赵云冬 ,  王艳双 ,  高丽君 ,  王雪松

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明涉及肉类检测技术领域，是一种狗源性DNA检测试剂盒，其特征是由样本前处理液、线粒体DNA提取体系、PCR反应体系三部分体系组成。PCR反应体系总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM狗肉引物2μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水7μL。一种狗源性DNA鉴定方法是设计狗肉特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤。判断标准：PCR扩增结果出现481bp条带为正品狗肉，出现多条或不出现均为伪品狗肉，出现393bp条带为伪品狐肉，出现289bp条带为伪品貂肉，参照图1、图2。鉴定方法能够准确鉴定狗肉真伪。

公开(公告)号：CN116970732A

公开(公告)日：2023-10-31

申请号：CN202311076998.9

申请日：2023-08-25

Applicant: 北华大学

Inventor： 周亭亭 ,  周磊 ,  高丽君 ,  孙丽媛 ,  张亚丽 ,  李嘉宜 ,  尹荣 ,  李明成

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种可鉴定松茸真伪的引物对及其应用，属于分子生物技术领域。所述引物对包括如SEQ ID NO.1所示的上游引物和如SEQ ID NO.2所示的下游引物。利用所述引物对对待测松茸样品进行PCR扩增反应，反应产物进行凝胶电泳，根据电泳图谱中DNA条带位置的不同，可区分松茸正品及其伪品。本发明对松茸真伪鉴定的操作步骤简单、操作快速，过程中不需要使用有毒有害试剂，且专属性更强、准确度和灵敏度更高，当DNA样品浓度为1ng·μL‑1时仍可获得清晰的电泳条带。

公开(公告)号：CN116356035A

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202111623162.7

申请日：2021-12-28

Applicant: 北华大学

Inventor： 王艳双 ,  孙丽媛 ,  高丽君 ,  苑广信 ,  李明成 ,  王雪松

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及肉类食品的分子鉴定领域，是一种PCR‑免疫胶体金试纸条猪肉快速鉴定方法及检测试剂盒。鉴定方法包括：猪肉基因组DNA的提取、设计猪mtDNA Cyt b基因的特异性引物、建立PCR反应体系和反应条件、胶体金试纸条鉴定猪肉真伪图谱和结果判定。试剂盒包括：猪肉基因组DNA提取试剂、猪肉PCR鉴定试剂、阳性对照DNA克隆液、空白对照液及免疫胶体金试纸条。本发明结合PCR技术的特异性、灵敏性、快速特点，免疫胶体金试纸条技术的可视化、简便、快速、低成本优势，以及试剂盒的标准化、规范化特征，能够实地、特异、准确、快速地鉴定猪肉与其易混品种，具有一定的新颖性、创造性和实用性。

公开(公告)号：CN115637297A

公开(公告)日：2023-01-24

申请号：CN202111568260.5

申请日：2021-12-21

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  姜菲菲 ,  王岳峰 ,  赵潇颖 ,  王丹 ,  宋顺佳 ,  于晟曼 ,  孙丽颖

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术和免疫学技术在微生物鉴定领域的应用，是一种基于分子生物学技术联合免疫学技术快速鉴定呼吸道感染真菌的胶体金免疫层析试纸条。基于真菌ITS基因片段具有高度的保守性，使用DNAMAN对真菌ITS基因片段进行分析，利用NCBI primer‑BLAST 5.0引物设计软件，设计真菌特异性引物。在真菌特异性引物ITS1 5'用FITC进行标记，ITS4 5'用Biotin进行标记，将扩增产物滴加在胶体金试纸条加样处，PCR扩增后产物一端修饰的生物素首先与金标垫上修饰有链霉素抗生物素蛋白的胶体金结合，检测线上的抗荧光素抗体将一端修饰有荧光素的扩增产物捕获，产生红色的条带；质控线上的生物素捕获胶体金，使质控线同样显色。在保证质控线为阳性的提前下，通过检测线是否出现颜色反应确定是否真菌感染，据此建立PCR‑胶体金免疫层析试纸条技术，对呼吸道感染真菌进行快速、可靠的鉴定。