公开(公告)号：CN115637297A

公开(公告)日：2023-01-24

申请号：CN202111568260.5

申请日：2021-12-21

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  姜菲菲 ,  王岳峰 ,  赵潇颖 ,  王丹 ,  宋顺佳 ,  于晟曼 ,  孙丽颖

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术和免疫学技术在微生物鉴定领域的应用，是一种基于分子生物学技术联合免疫学技术快速鉴定呼吸道感染真菌的胶体金免疫层析试纸条。基于真菌ITS基因片段具有高度的保守性，使用DNAMAN对真菌ITS基因片段进行分析，利用NCBI primer‑BLAST 5.0引物设计软件，设计真菌特异性引物。在真菌特异性引物ITS1 5'用FITC进行标记，ITS4 5'用Biotin进行标记，将扩增产物滴加在胶体金试纸条加样处，PCR扩增后产物一端修饰的生物素首先与金标垫上修饰有链霉素抗生物素蛋白的胶体金结合，检测线上的抗荧光素抗体将一端修饰有荧光素的扩增产物捕获，产生红色的条带；质控线上的生物素捕获胶体金，使质控线同样显色。在保证质控线为阳性的提前下，通过检测线是否出现颜色反应确定是否真菌感染，据此建立PCR‑胶体金免疫层析试纸条技术，对呼吸道感染真菌进行快速、可靠的鉴定。