公开(公告)号：CN117821620A

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202311687213.1

申请日：2023-12-08

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  潘蓓珍 ,  杨继飞 ,  王岳峰 ,  刘岩 ,  姜菲菲 ,  宿建胜 ,  周钰娇

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术和免疫学技术在细菌耐药基因检测中的应用，是一种联合分子生物学技术和免疫学技术快速鉴定鲍曼不动杆菌碳青霉烯类(OXA)和喹诺酮类(par C)抗生素耐药性的检测方法。其特点是，双重PCR反应体系(20μL)：2×Multiplex PCRMaster Mix10μL，DNA1μL，引物混合物2μL，余为ddH2O。本发明是基于Ab的OXA和par C基因片段具有高度保守性，使用Primer Premier 5.0设计特异性引物，用基因扩增仪进行PCR扩增，得到的产物一端修饰的生物素首先与金标垫上含有链霉亲和素的胶体金结合，再与胶体金试纸条上的二抗、生物素结合呈现红色线从而建立的双重核酸胶体金试纸条。依据该技术所研制的试剂盒，具有节省时间、提高效率等特点，并提供其简便、快速、检测结果可靠的鉴定方法。

公开(公告)号：CN116287350A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310430461.1

申请日：2023-04-21

Applicant: 北华大学

Inventor： 赵云冬 ,  孙丽媛 ,  姜菲菲 ,  潘蓓珍 ,  刘岩 ,  宿建胜 ,  杨继飞 ,  王岳峰

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术和免疫学技术在微生物鉴定领域的应用，是一种基于分子生物学技术联合免疫学技术快速鉴定鲍曼不动杆菌耐苯唑西林β‑内酰胺酶（OXA）基因的胶体金免疫层析试纸条。其特点是，它包含：PCR反应体系和胶体金试纸条反应体系。基于鲍曼不动杆菌OXA基因片段具有高度的保守性，使用DNAMAN对鲍曼不动杆菌OXA基因片段进行分析，设计鲍曼不动杆菌OXA特异性引物。在上游引物（F）5'用FITC进行标记，下游引物（R）5'用生物素进行标记；普通PCR扩增后产物5'端修饰的生物素首先与金标垫上修饰有链霉素抗生物素蛋白的胶体金结合，检测线上的抗荧光素抗体将一端修饰有荧光素的扩增产物捕获，产生红色的条带；质控线上的生物素捕获胶体金，使质控线同样显色。在保证质控线为阳性的提前下，通过检测线是否出现颜色反应确定是否为耐OXA鲍曼不动杆菌感染，据此建立PCR‑胶体金免疫层析试纸条技术，对鲍曼不动杆菌耐药情况进行快速、可靠的鉴定。