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公开(公告)号：CN109212230B
公开(公告)日：2021-11-30
申请号：CN201811064305.3
申请日：2018-09-12
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/015
Abstract: 本发明公开了一种用于检测犬细小病毒结构蛋白VP2抗体的致敏聚苯乙烯纳米微球及其制备方法和应用。所述的致敏聚苯乙烯纳米微球的表面偶联有犬细小病毒重组VP2蛋白，所述的重组VP2蛋白为犬细小病毒VP2蛋白的截短蛋白，位于犬细小病毒VP2蛋白的第365～486位，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。该蛋白含有VP2蛋白的主要抗原表位区、抗原性强、亲水性好，具有较强的特异性和免疫原性。利用该重组蛋白作为抗原制备了致敏彩色聚苯乙烯纳米微球，用于检测犬细小病毒血清抗体。实验证明，制备的致敏微球无自凝现象，重复性好，性质稳定。本发明的方法适用于宠物临床对单份或多份犬血清的快速检测，与商品化检测试剂盒比较，操作简便，检测结果有较高的确准性和符合率。
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公开(公告)号：CN104031152B
公开(公告)日：2017-01-18
申请号：CN201410325521.4
申请日：2014-07-09
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K19/00 , C07K16/18 , C12N15/62 , C12N15/63 , C12N15/66 , C12N1/21 , C12N5/20 , G01N33/577 , A61K39/395 , A61P31/04 , C12R1/19 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种重组猪/牛源大肠杆菌耐热肠毒素(STp)融合蛋白STp5-His、抗该蛋白的单克隆抗体及其应用，本发明中所述的融合蛋白STp5-His的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，编码所述融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明中猪/牛源大肠杆菌耐热肠毒素STp成熟肽基因(estp)经过4次串联后表达出融合蛋白STp5-His，使原本不具有免疫原性的天然STp蛋白具有了良好的免疫原性。本发明采用细胞融合技术制备出针对该融合蛋白STp5-His和天然STp的特异性单克隆抗体，解决了生产实践中无法对STp进行检测的难题，且该特异性单克隆抗体能够在体外中和天然STp，具有临床应用的前景。
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公开(公告)号：CN101887061A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN201010236537.X
申请日：2010-07-26
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/52 , G01N33/531 , G01N33/558
Abstract: 一种用于检测大肠杆菌F5菌毛的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，它涉及一种检测大肠杆菌菌毛的试纸条及其制备方法。本发明提供了一种用于检测大肠杆菌F5菌毛的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。试纸条由PVC背衬、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成。方法：制免疫原；抗F5菌毛多克隆抗体和羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜上；制抗F5菌毛单克隆抗体；抗F5菌毛单克隆抗体-胶体金标记物包被在结合垫上；五、在PVC背衬上依次连续粘附样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，切成试纸条即完成。本发明试纸条具有良好的特异性、稳定性和敏感性，可以用来对产肠毒素大肠杆菌F5菌毛进行鉴定，具有检测结果直观，便于保存。
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公开(公告)号：CN1995331A
公开(公告)日：2007-07-11
申请号：CN200610151213.X
申请日：2006-12-29
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/31 , C07K14/265 , A61K39/108
CPC classification number: Y02A50/476
Abstract: 本发明提供仔猪水肿病大肠杆菌基因突变株及其构建方法。设计扩增编码类志贺氏毒素II型变异体基因及其左侧翼序列的特异性引物；通过PCR扩增获得编码类志贺氏毒素II型变异体基因及其左侧翼序列，分别进行克隆、测序鉴定；设计两对针对基因进行定点突变的突变引物；PCR扩增两个突变片断，分别克隆、测序鉴定；利用二重PCR将两个突变片断连接起来，并克隆、测序鉴定；将突变的基因亚克隆至自杀质粒pCVD442中；诱导致水肿病的0139大肠杆菌的萘啶酮酸抗性；利用突变菌株无Amp及蔗糖抗性，而具有萘啶酮酸抗性，并且其基因PCR产物可特异性的被Stu I核酸内切酶切开成功筛选出完成同源重组的0139大肠杆菌突变株。可以为仔猪水肿病的常规预防提供一种较好的疫苗后备菌株。
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公开(公告)号：CN108588248B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN201810428161.9
申请日：2018-05-07
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了用于检测产肠毒素大肠杆菌5种菌毛基因的多重PCR引物组、试剂盒及检测方法。引起幼畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌常带有F4、F5、F6、F18和F41菌毛及其编码基因，本发明通过对5种菌毛基因序列的比对分析，设计并合成了一套特异性检测引物组，并建立了一种用于检测产肠毒素大肠杆菌5种菌毛基因的多重PCR检测方法，组装了一个含有特异性引物组的试剂盒。使用本发明的试剂盒检测产肠毒素大肠杆菌5种菌毛基因具有特异性强，快速简单，灵敏度好等优点，适用于快速检测从病畜腹泻样品中分离的大肠杆菌的菌毛基因，是筛选和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛血清型的有效技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109265522A
公开(公告)日：2019-01-25
申请号：CN201811145516.X
申请日：2018-09-29
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种用于检测犬瘟热病毒血凝蛋白H抗体的致敏聚苯乙烯纳米微球及其制备方法和应用。所述的致敏聚苯乙烯纳米微球的表面偶联有犬瘟热病毒重组血凝蛋白H，所述的重组血凝蛋白H为犬瘟热病毒血凝蛋白H的截短蛋白，位于犬瘟热病毒血凝蛋白H基因的第550nt～1002nt位，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。利用该重组蛋白作为抗原制备了致敏彩色聚苯乙烯纳米微球，用于检测犬瘟热病毒血清抗体。实验证明，制备的致敏微球无自凝现象，重复性好，性质稳定。本发明建立的CDV抗体间接凝集试验具有良好的特异性，操作简单，眼观判定结果，适合临床上对单个血清样品的检测，成本低，便于推广等优点。
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公开(公告)号：CN1285609C
公开(公告)日：2006-11-22
申请号：CN200510009706.5
申请日：2005-02-04
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种猪传染性胃肠炎重组N蛋白抗原及纯化方法。从纯化后的TGEV病毒液中进行病毒核酸提取，以TGEV N基因的上游引物Li01进行病毒基因组cDNA的合成，再使用TGEV N基因的上、下游引物，进行N基因的扩增，将扩增后的TGEV N基因克隆到原核表达载体质粒pProEXHTb中，并在大肠杆菌DH5α菌株中进行表达得到的猪传染性胃肠炎重组N蛋白抗原。该抗原可以克服猪传染性胃肠炎传统诊断方法中的抗原所存在的排毒、散毒的潜在危险，可作为一种疾病监测的诊断抗原。
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公开(公告)号：CN1680433A
公开(公告)日：2005-10-12
申请号：CN200510009706.5
申请日：2005-02-04
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种猪传染性胃肠炎重组N蛋白抗原及纯化方法。从纯化后的TGEV病毒液中进行病毒核酸提取，以TGEV N基因的上游引物Li01进行病毒基因组cDNA的合成，再使用TGEV N基因的上、下游引物，进行N基因的扩增，将扩增后的TGEV N基因克隆到原核表达载体质粒pProEXHTb中，并在大肠杆菌DH5α菌株中进行表达得到的猪传染性胃肠炎重组N蛋白抗原。该抗原可以克服猪传染性胃肠炎传统诊断方法中的抗原所存在的排毒、散毒的潜在危险，可作为一种疾病监测的诊断抗原。
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公开(公告)号：CN108588248A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810428161.9
申请日：2018-05-07
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了用于检测产肠毒素大肠杆菌5种菌毛基因的多重PCR引物组、试剂盒及检测方法。引起幼畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌常带有F4、F5、F6、F18和F41菌毛及其编码基因，本发明通过对5种菌毛基因序列的比对分析，设计并合成了一套特异性检测引物组，并建立了一种用于检测产肠毒素大肠杆菌5种菌毛基因的多重PCR检测方法，组装了一个含有特异性引物组的试剂盒。使用本发明的试剂盒检测产肠毒素大肠杆菌5种菌毛基因具有特异性强，快速简单，灵敏度好等优点，适用于快速检测从病畜腹泻样品中分离的大肠杆菌的菌毛基因，是筛选和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛血清型的有效技术手段。
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公开(公告)号：CN104593397A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201510016549.4
申请日：2015-01-12
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/62 , C07K19/00 , C12N1/21 , A61K39/116 , A61K39/108 , A61K48/00 , A61P31/04 , A61P1/12 , C12R1/19 , C12R1/01
Abstract: 本发明公开了一种优化的产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)多价抗原基因序列及其在预防断奶仔猪腹泻中的应用，属于生物技术领域。本发明根据乳酸乳球菌密码子使用偏好，大片段合成了包含引起断奶仔猪腹泻的常见ETEC优势血清型的F4+的主要结构蛋白FaeG、F18+的受体结合域RBD和毒素Stx2e、STa突变体、LT B亚单位、STb 6种抗原基因以及分别靶向M细胞、肠道细胞的分子肽CO1、YadA31基因的多价抗原基因序列，各基因间由GGGGS连接而成。该基因不但可以用于构建乳酸菌活载体疫苗，显著提高目的蛋白的分泌表达量，具有良好的免疫原性和保护效应，而且也适用于在大肠杆菌中高效表达，实验证明，其包涵体具有良好免疫活性，可作为预防断奶仔猪F4+、F18+ETEC感染的疫苗。
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