公开(公告)号：CN1995331A

公开(公告)日：2007-07-11

申请号：CN200610151213.X

申请日：2006-12-29

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 师东方 ,  付海兵

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C07K14/265 ,  A61K39/108

CPC classification number: Y02A50/476

Abstract: 本发明提供仔猪水肿病大肠杆菌基因突变株及其构建方法。设计扩增编码类志贺氏毒素II型变异体基因及其左侧翼序列的特异性引物；通过PCR扩增获得编码类志贺氏毒素II型变异体基因及其左侧翼序列，分别进行克隆、测序鉴定；设计两对针对基因进行定点突变的突变引物；PCR扩增两个突变片断，分别克隆、测序鉴定；利用二重PCR将两个突变片断连接起来，并克隆、测序鉴定；将突变的基因亚克隆至自杀质粒pCVD442中；诱导致水肿病的0139大肠杆菌的萘啶酮酸抗性；利用突变菌株无Amp及蔗糖抗性，而具有萘啶酮酸抗性，并且其基因PCR产物可特异性的被Stu I核酸内切酶切开成功筛选出完成同源重组的0139大肠杆菌突变株。可以为仔猪水肿病的常规预防提供一种较好的疫苗后备菌株。