基于全基因组分析与基因组编辑的植物物种鉴定方法与应用

    公开(公告)号:CN115843318A

    公开(公告)日:2023-03-24

    申请号:CN202180026003.0

    申请日:2021-12-14

    Abstract: 本发明公开了一种基于全基因组分析与基因组编辑的植物物种鉴定方法与应用,即GAGE法(Genome Analysis and Genome Editing),所述方法具体包括:筛选待鉴定植物全基因组中带有PAM的序列,将其与混伪品及密切相关物种的基因组比对后选择仅存在于待鉴定植物基因组中的序列作为靶标序列,引入基因组编辑系统对其进行检测,根据所选靶标序列设计并合成crRNA(CRISPR RNA),crRNA引导Cas蛋白与靶标序列结合形成复合体,之后Cas蛋白反式切割活性被激活并切割带有荧光信号基团的单链DNA,通过检测荧光信号鉴定植物物种。

    丹参细胞色素P450基因CYP72A395的基因克隆引物、表达载体、催化功能及应用

    公开(公告)号:CN112143742B

    公开(公告)日:2022-08-09

    申请号:CN201910571191.X

    申请日:2019-06-28

    Abstract: 本发明公开了丹参中一条反向调控丹参酮合成的细胞色素P450基因CYP72A395的编码基因序列;本发明所提供的CYP72A395基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述基因编码蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明检测了CYP72A395的转录表达谱,发现其在丹参花和根周皮高丰度表达;构建了CYP72A395‑RNAi载体及CYP72A395‑过表达(CYP72A395‑oe)载体,通过发根农杆菌介导的丹参遗传转化获得转基因毛状根阳性株系;化学检测分析发现,在CYP72A395‑RNAi株系中,丹参酮类化合物含量升高,而在CYP72A395‑oe株系中,丹参酮类化合物含量显著降低。本发明提供的CYP72A395具有负调控丹参酮类化合物生物合成的功能,可能参与丹参酮生物合成途径的竞争途径。本研究为提高丹参中丹参酮产量提供了新思路,并为丹参酮合成生物学研究奠定基础。

    一种乌头属分子身份证及其应用

    公开(公告)号:CN112980987B

    公开(公告)日:2022-06-28

    申请号:CN202110276491.2

    申请日:2021-03-15

    Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域,具体涉及一种乌头属分子身份证及其应用。所述乌头属分子身份证中含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述鉴定方法包括通过检测高通量原始测序数据中是否含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列来判断样品中是否存在乌头属物种。利用本发明所提供的分子身份证和方法可以准确的鉴定乌头属,本发明所提供的方法适用性更广,可检测所有能提取出DNA的样品中是否含有乌头属物种。因此,能够实现乌头属原植物、药材、种子、种苗、粉末和食物混合品的快速、准确鉴定。

    用于鉴别木通及其两种混伪品的微滴数字PCR方法及应用

    公开(公告)号:CN114350843A

    公开(公告)日:2022-04-15

    申请号:CN202210046294.6

    申请日:2022-01-17

    Abstract: 本发明公开了用于鉴别木通及其两种混伪品的微滴数字PCR方法及应用。基于木通及其常见混伪品关木通和川木通的ITS2序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,开发单重和三重微滴数字PCR技术。单重微滴数字PCR技术能够分别特异性检测木通、川木通和关木通,三重微滴数字PCR技术可以一次性在同一PCR反应体系中同时检测三种药材,不同引物组之间没有相互干扰,可用于市售木通药材及相关中成药检测。所述特异性引物和TaqMan探针为SEQ ID No.1‑9所示序列。该方法特异性强,灵敏度高,适用于痕量DNA的检测,可为中药质量控制和市场监管提供依据,保证中药安全性及有效性。

    一种鉴别大黄药材三个基原物种的方法与应用

    公开(公告)号:CN113897415A

    公开(公告)日:2022-01-07

    申请号:CN202111223899.X

    申请日:2021-10-21

    Abstract: 本发明涉及大黄药材三个基原物种的鉴别及其应用,具体包括基于叶绿体基因组筛选高变区,以筛选的高变区rps16‑trnQ、psaA‑ycf3、psbE‑petL、ndhF‑rpl32与trnT‑trnL序列为模板设计引物1F/1R、2F/2R、3F/3R、4F/4R和5F/5R,并对42份样本进行PCR扩增,Sanger测序后利用MEGA7.0评价所筛选序列的物种鉴定能力,确定能够用于鉴定唐古特大黄、药用大黄与掌叶大黄的特异DNA条形码。本发明公开可有效扩增高变区rps16‑trnQ、psaA‑ycf3、psbE‑petL、ndhF‑rpl32与trnT‑trnL的5对通用引物,可用于大黄药材三个基原物种原植物、种子及药材的鉴定,为大黄药材三个基原物种分类鉴定、保证大黄药材临床用药安全及规范大黄药材市场提供依据。

    一种徐长卿药材与其混伪品的快速鉴定方法

    公开(公告)号:CN107619877A8

    公开(公告)日:2018-06-26

    申请号:CN201711054790.1

    申请日:2017-11-01

    Abstract: 本发明公开了一种徐长卿药材与其混伪品白前和白薇的快速鉴定方法,其包括如下步骤:1)提取待测样品DNA;2)以待测样品DNA为模板,PCR扩增含有核糖体DNA的ITS2序列的片段;3)对扩增产物进行拼接,获得完整ITS2基因间隔区;4)徐长卿与其混伪品白前和白薇的种间变异位点分析,如果第50位为碱基C,则鉴定为徐长卿,如果第50位为碱基缺失,则鉴定为其混伪品。本发明方法适用性强,操作简单,能够实现徐长卿与其混伪品药材的快速准确鉴定,在短时间内鉴定大量样本。

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