一种调控丹参酮生物合成的SmAP2/ERF82转录因子的筛选、鉴定及应用

    公开(公告)号:CN107699576B

    公开(公告)日:2021-08-31

    申请号:CN201710849664.9

    申请日:2017-09-20

    Abstract: 本发明公开了一条调控丹参酮合成的AP2/ERF转录因子SmAP2/ERF82的编码基因序列;本发明所提供的SmAP2/ERF82基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述基因编码蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明构建了SmAP2/ERF82‑RNAi载体及SmAP2/ERF82‑过表达载体,通过遗传转化方法转化丹参,获得转基因毛状根,与对照株系相比,SmAP2/ERF82‑RNAi株系中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II A的含量显著降低,SmAP2/ERF82‑过表达株系中二氢丹参酮I、隐丹参酮的含量显著上升。本发明提供的SmAP2/ERF82具有正调控丹参酮类化合物生物合成的功能,该类化合物具有治疗心血管疾病的显著疗效。本发明创新了丹参酮合成调控分子机制的研究思路,为丹参酮的合成生物学研究奠定基础。

    丹参倍半萜合酶基因SmTPS12、其克隆引物、表达载体、催化产物及应用

    公开(公告)号:CN108795914A

    公开(公告)日:2018-11-13

    申请号:CN201810647878.2

    申请日:2018-06-22

    Inventor: 罗红梅 刘琬菁

    CPC classification number: C12N9/88 C12N15/70 C12P5/007 C12Y402/03

    Abstract: 本发明公开了一条参与合成丹参次生代谢产物α‑金合欢烯的萜类合酶基因序列(SmTPS12);本发明所提供的SmTPS12基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述基因编码的蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明基于丹参基因组信息获得SmTPS12基因序列,通过构建pGEX‑4T‑1‑SmTPS12原核表达载体并转化大肠杆菌,在大肠杆菌体内检测其催化产物,研究SmTPS12的生物学功能。结果表明SmTPS12具有催化合成α‑金合欢烯等化合物的功能。α‑金合欢烯可以作为柴油和化学品生产的前体化合物;广泛用于皂用、洗涤剂香精中和日化香精中。本发明为丹参功能性代谢化合物关联基因基因奠定研究基础,有利于开发商业开发和生物防治。

    一种调控丹酚酸生物合成的SmAP2/ERF8转录因子的筛选、鉴定及应用

    公开(公告)号:CN107699577A

    公开(公告)日:2018-02-16

    申请号:CN201710849712.4

    申请日:2017-09-20

    CPC classification number: C07K14/415 C12N15/8243

    Abstract: 本发明公开了一条调控丹酚酸合成的AP2/ERF转录因子SmAP2/ERF8的编码基因序列;本发明所提供的SmAP2/ERF8基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述基因编码蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明构建了SmAP2/ERF8-RNAi载体及SmAP2/ERF8-过表达载体,遗传转化丹参,获得转基因毛状根,与对照株系相比,SmAP2/ERF8-RNAi株系中丹酚酸B的含量显著降低,SmAP2/ERF8-过表达株系中丹酚酸B的含量显著上升。本发明提供的SmAP2/ERF8具有正调控丹酚酸类化合物生物合成的功能,该类化合物具有治疗心血管疾病的显著疗效。本发明创新了丹酚酸合成调控分子机制的研究思路,为丹酚酸的合成生物学研究奠定基础,同时为开展丹参优良品种选育提供靶基因。

    丹参倍半萜合酶基因SmTPS12、其克隆引物、表达载体、催化产物及应用

    公开(公告)号:CN108795914B

    公开(公告)日:2021-11-05

    申请号:CN201810647878.2

    申请日:2018-06-22

    Inventor: 罗红梅 刘琬菁

    Abstract: 本发明公开了一条参与合成丹参次生代谢产物α‑金合欢烯的萜类合酶基因序列(SmTPS12);本发明所提供的SmTPS12基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述基因编码的蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明基于丹参基因组信息获得SmTPS12基因序列,通过构建pGEX‑4T‑1‑SmTPS12原核表达载体并转化大肠杆菌,在大肠杆菌体内检测其催化产物,研究SmTPS12的生物学功能。结果表明SmTPS12具有催化合成α‑金合欢烯等化合物的功能。α‑金合欢烯可以作为柴油和化学品生产的前体化合物;广泛用于皂用、洗涤剂香精中和日化香精中。本发明为丹参功能性代谢化合物关联基因基因奠定研究基础,有利于开发商业开发和生物防治。

    丹参CYP76AK5v2的基因克隆引物、表达载体、催化功能及应用

    公开(公告)号:CN113186205A

    公开(公告)日:2021-07-30

    申请号:CN202010030601.2

    申请日:2020-01-13

    Abstract: 本发明公开了丹参中一条反向调控丹参酮合成的细胞色素P450基因CYP76AK5v2的编码基因序列;本发明所提供的CYP76AK5v2基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述基因编码蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明检测了CYP76AK5v2在丹参组织中的表达情况,发现其在丹参根和根周皮高丰度表达;构建了CYP76AK5v2‑RNAi载体及CYP76AK5v2‑过表达(CYP76AK5v2‑oe)载体,通过发根农杆菌介导的丹参遗传转化获得转基因毛状根阳性株系;化学检测分析发现,在CYP76AK5v2‑RNAi株系中,丹参酮类化合物含量升高,而在CYP76AK5v2‑oe株系中,丹参酮类化合物含量显著降低。本发明提供的CYP76AK5v2具有反调控丹参酮类化合物生物合成的功能,可能参与丹参酮生物合成途径的竞争途径。本研究有助于解析植物次生代谢途径分子机制,为丹参酮的合成生物学研究奠定基础。

    一种用于预测丹参花色的SNP分子标记及其应用

    公开(公告)号:CN113106164A

    公开(公告)日:2021-07-13

    申请号:CN202010030602.7

    申请日:2020-01-13

    Abstract: 本发明提供一种预测丹参花色的SNP分子标记及其应用。基于丹参基因组F3′5′H基因的全长cDNA序列,所述SNP分子标记位点在该基因序列的1230bp位点;本发明还提供一种用于检测所述分子标记的引物和使用所述分子标记预测丹参花色的方法及其应用。使用基于该基因设计的全长扩增引物对,从逆转录获得的cDNA模板中扩增基因全长,经测序证明该引物能特异性的扩增F3′5′H的正确序列。经过序列对比,筛选而得到与丹参花色性状相关的SNP位点。本发明所述的分子标记与丹参花色具有显著关联性,基于所述分子标记的本发明技术能方便快捷检测丹参花色,用于判断丹参花色,紫花丹参F3′5′H基因参考序列的1230bp处的碱基为C,与此相比,白花丹参中的该基因对应位置的变异碱基为T,浅紫花丹参在该为点可为C或T。通过该SNP分子标记,可以快捷地对丹参花色性状进行鉴定,适用于以丹参花色为育种目标的丹参的种植与选育。

    一种参与丹参酮生物合成的丹参CYP71BE37的基因克隆引物、功能及应用

    公开(公告)号:CN112522220A

    公开(公告)日:2021-03-19

    申请号:CN201910793404.3

    申请日:2019-08-27

    Inventor: 罗红梅 张建红

    Abstract: 本发明公开了丹参中一条参与调控丹参酮合成的细胞色素P450基因CYP71BE37的编码基因序列;本发明所提供的CYP71BE37基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述基因编码蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明检测了CYP71BE37在丹参组织中的表达情况,发现其在丹参花和根的周皮部高丰度表达;构建了CYP71BE37‑RNAi载体及CYP71BE37‑过表达(CYP71BE37‑oe)载体,通过发根农杆菌介导的丹参遗传转化获得转基因毛状根阳性株系;超高效液相色谱(UPLC)检测分析发现,在CYP71BE37‑RNAi株系中,丹参酮类化合物含量显著降低,而在CYP71BE37‑oe株系中,丹参酮类化合物含量升高。本发明提供的CYP71BE37具有催化产生丹参酮类化合物的能力,为利用生物技术手段提高丹参酮类化合物的含量奠定基础。

    丹参萜类合酶基因SmTPS8、其克隆引物、表达载体、催化产物及应用

    公开(公告)号:CN108893482A

    公开(公告)日:2018-11-27

    申请号:CN201810647879.7

    申请日:2018-06-22

    Inventor: 罗红梅 刘琬菁

    Abstract: 本发明公开了一条主要催化合成丹参中倍半萜类化合物反式橙花叔醇和单萜类化合物桧烯、β-月桂烯等的萜类合酶基因序列(SmTPS8);本发明所提供的SmTPS8基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,所述基因编码蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明利用获得的SmTPS8基因序列,通过检测该基因的催化产物,验证基因功能。结果表明SmTPS8在丹参转基因植株中主要具有单萜合酶活性,而在大肠杆菌中主要具有倍半萜合酶活性。反式橙花叔醇([E]-nerolidol)具有较强的香气和生物活性,是医药、食品、香料和化妆品工业的重要原料。本发明为基于SmTPS8基因功能的丹参萜类次生代谢途径研究奠定基础,有利于开发SmTPS8催化合成的倍半萜化合物、单萜类化合物在医药、香料以及生物防治方面的商业用途。

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