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公开(公告)号：CN108034646B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201810033879.8
申请日：2018-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化活性和对映归一性提高的PvEH3突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明在具有一定对映归一性催化特性的环氧化物水解酶基础上，通过组合定点突变生物技术改造环氧化物水解酶分子结构，得到一株催化活性和对映归一性均提高的环氧化物水解酶突变体PvEH3G170E/F187L。突变体具有高对映归一择性、高催化活性的优点，有较大应用潜力，也为EH的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN107988308A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201810033872.6
申请日：2018-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶W102L。与野生型相比，W102L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac-pCSO的E值从2.6提高至25.5，对rac-pCSO的对映选择性提高了9.8倍。使用PvEH1W102L全细胞动力学拆分150mmol·L-1的rac-pCSO，反应4h后，可获得(R)-对氯环氧苯乙烷的产率为45.62％(ees＝96.30％)和(R)-对氯苯基乙二醇产率为50.91％(eep＝90.26％)。
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公开(公告)号：CN107937364A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201810033894.2
申请日：2018-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种对映选择性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第102位的色氨酸突变成了亮氨酸。本发明的突变酶PvEH1W102L的对映体比率(E值)是14.95，是野生型酶(E＝7.36)的2.03倍。
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公开(公告)号：CN104450652B
公开(公告)日：2017-05-24
申请号：CN201410759253.7
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种提高β‑甘露聚糖酶催化活性方法，结合基因工程技术构建一种催化效率高的宇佐美曲霉甘露聚糖酶(AuMan5A)突变酶，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，氨基酸序列为SEQ ID NO:2，相应的基因命名为Auman5ALoop。本发明还公开了突变酶工程菌的构建、高效表达和纯化的方法，制备的突变酶具有底物亲和力强、催化效率高的特性，具有较大的工业化应用潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN106282257A
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201610938662.2
申请日：2016-10-31
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P17/02
Abstract: 本发明公开了一种双相多酶偶联体系高效制备(S)-2-(4-硝基苯基)环氧乙烷的方法，属于生物工程技术领域。本发明以含羰基还原酶(SyS1)基因和葡萄糖脱氢酶(SyGDH)基因的共表达重组大肠杆菌BL21(pETDuet-Sygdh-Sys1)为催化剂，并添加一定量的NADP+和葡萄糖，在磷酸钾缓冲液/异丁醇两相反应体系中实现双酶偶联催化α-溴代对硝基苯乙酮高效制备中间产物(S)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇，其摩尔产率可达99.8％。继续向反应体系中添加破碎SyHheC粗酶液和缓冲液，反应得到产物(S)-2-(4-硝基苯基)环氧乙烷摩尔产率可达99.9％，e.e.值＞99％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106119220A
公开(公告)日：2016-11-16
申请号：CN201610534520.X
申请日：2016-07-07
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/14 , C12P7/22 , C12P41/00 , C12Y303/02003
Abstract: 本发明公开了一种催化活性和对映归一性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明在具有一定对映归一性催化特性的环氧化物水解酶基础上，通过定点突变生物技术改造环氧化物水解酶分子结构，得到一株催化活性和对映归一性均提高的环氧化物水解酶突变体PvEH1L105I/M160A/M175I。突变体具有高对映归一择性、高催化活性的优点，有较大应用潜力，也为EH的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN104450801A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410759167.6
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P7/22
Abstract: 本发明公开了一种共表达羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌系统在不对称还原制备(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇中的应用。以含有羰基还原酶(SyS1)基因和葡萄糖脱氢酶(SyGDH)基因的共表达重组菌E.coil BL21(pETDuet-Sygdh-Sys1)为催化剂，并添加一定量的NADP+和葡萄糖，在缓冲溶液/二甲亚砜两相反应体系中实现不对称还原3-氯苯酰甲基氯高效制备(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇。其收率为98％，产物的对映体过量(e.e.)>99％。
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公开(公告)号：CN104388373A
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201410758942.6
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12N15/70 , C12Y101/01184 , C12Y101/9901
Abstract: 本发明提供了一种共表达羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶的重组菌E.coil BL21(pETDuet-Sygdh-Sys1)，并且公开了其构建方法。其SyS1酶活力为3.7U/g，SyGDH酶活力为44.1U/g。它避免了添加昂贵的纯酶和辅酶NADPH，只需添加低成本的辅酶NADP+就可以使得辅酶NADPH高效再生，大大降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN103627808A
公开(公告)日：2014-03-12
申请号：CN201310666359.8
申请日：2013-12-10
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/686 , C12Q1/6848 , C12Q2521/301 , C12Q2525/301 , C12Q2549/119
Abstract: 本发明是一种利用限制性内切酶、T-发卡结构(HSO-T)和巢式PCR扩增等技术，基于已知DNA序列扩增其5′或3′端侧翼未知序列的方法。该方法设计一条HSO-T的寡聚核苷酸序列；用单一限制性内切酶酶切基因组DNA并经rTaq或Ex Taq修饰；HSO-T接头与修饰后基因组连接；根据HSO-T序列合成引物THSO-F，根据已知DNA序列合成2条下游引物或2条上游引物；以连接物为模板，引物THSO-F和2条下游引物进行巢式PCR扩增获得5′端未知序列；同理，引物HSO-F和2条上游引物进行巢式PCR获得3′端未知序列。该技术操作简便、应用范围广、成本低廉、高效准确等优点，具有广阔应的用前景。
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公开(公告)号：CN103627698A
公开(公告)日：2014-03-12
申请号：CN201310658954.7
申请日：2013-12-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明阐述了乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻，属于生物工程技术领域(微生物领域)。本发明包括如下过程：(1)亚硝基胍诱变：将本实验室筛选并保藏的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens FMME044作为出发菌株制备菌悬液，并将其与不同浓度的亚硝基胍反应，一段时间后，终止反应再进行后培养。(2)驯化：在驯化培养基里添加不同浓度的乙偶姻，制成不同浓度的乙偶姻发酵液，逐步提高乙偶姻浓度进行驯化培养。将上述驯化所得的菌悬液直接涂布到含高浓度乙偶姻的平板上。(3)筛选：在高浓度乙偶姻平板上能够长出的单菌落即为能耐高浓度乙偶姻的菌株。然后，挑取单菌落进行发酵验证并将高产菌株进行二次验证，筛选出一株比出发菌株产更高浓度乙偶姻的菌株，命名为B.amyloliquefaciens E-11。本发明同时公开一种采用该菌株生产乙偶姻的方法，采用本方法发酵40h乙偶姻产量为63g/L。
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