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公开(公告)号：CN102994530A
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201210562538.2
申请日：2012-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种底物亲和力强的甘露聚糖酶的设计与制备。本发明提出了一种底物亲和力强的AusMan5AY111F与AusMan5AY115F突变酶的设计与构建的方法，通过序列同源性分析、同源建模、结合能的计算等最终确定突变位点，大引物PCR得到的相应的基因命名为Ausman5AY111F、man5AY115F。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达和纯化的方法，制备的突变酶具有底物亲和力强、催化效率高的特性，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN102140502A
公开(公告)日：2011-08-03
申请号：CN201010550886.9
申请日：2010-11-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明是一种利用限制性内切酶酶切、发卡结构连接和巢式PCR扩增等技术，基于已知DNA序列测定其3′端侧翼未知DNA序列的方法。该方法通过合成一条易形成发卡结构的寡聚核苷酸序列；选用单一限制性内切酶酶切基因组DNA，纯化后与发卡结构连接；利用引物设计软件选定发卡结构序列上的互补序列作为3′端引物、两条靠近未知序列端的已知DNA序列上的特异性序列作为5′端引物；以发卡结构连接物为模板，用设计的引物进行巢式PCR扩增以获取已知DNA序列3′端侧翼的未知序列。本发明具有操作简便、应用范围广、操作限制少、引物特异性强、结果验证简捷、未知序列长度不限和成本低廉等特点。
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公开(公告)号：CN102994538A
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201210562490.5
申请日：2012-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: pUC19-TVG质粒的构建及使用方法。本发明的技术方案提供了一种新型的载体pUC19-TVG，其特征在于，所述载体是基于限制性内切酶酶切及连接原理由载体pUC19改造而来，载体中含有包括EcoRI、MluI、NotI、XhoI、HindIII在内的多克隆位点，不含Xho I、Mlu I、Sac I、Kpn I、Cla I、EcoRV、NcoI、Pst I、BglII、Sal I、Pst I、BamH I、Sca I、Xba I酶切位点，因此该载体能够实现多基因片段依赖酶切位点的融合及单一基因的分段和拼接，同时该载体还可以用于解决长片段基因克隆过程中极易出现的错配问题。
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公开(公告)号：CN102492716A
公开(公告)日：2012-06-13
申请号：CN201110410391.0
申请日：2011-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种便于实现目的蛋白天然N端表达的真核表达载体pPIC9KM及其构建和使用方法。所述表达载体是基于同尾酶原理由载体pPIC9K改造而来，并仅含有单一的Xho I酶切位点，pPIC9KM结构如图一所示。将目的基因经PCR、连接及双酶切过程连接至pPIC9KM质粒中Kex2酶切位点序列后，在分泌信号的引导下分泌至胞外，在此过程中经Kex2加工切除信号肽，即获得为天然N端目的蛋白质。
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公开(公告)号：CN102392034A
公开(公告)日：2012-03-28
申请号：CN201110410457.6
申请日：2011-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种源自T.virideWL 0422菌株β-1，4-内切葡聚糖酶基因cDNA序列克隆，β-内切葡聚糖酶工程菌的构建以及重组β-内切葡聚糖酶的高效表达和纯化方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1。生物信息学分析表明，来源于T.virideWL 0422菌株的β-内切葡聚糖酶属于糖苷水解酶第5家族，命名为Tvi Cel5A，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2，其相应的基因命名为Tvi cel5A。Tvi Cel5A具有较高的催化活性和热稳定性，具有较大的研究和应用潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102140503A
公开(公告)日：2011-08-03
申请号：CN201010550905.8
申请日：2010-11-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明是一种涉及限制性内切酶酶切、发卡结构连接和巢式PCR扩增等技术，基于已知DNA序列测定其5′端侧翼未知DNA序列的方法。该方法通过合成一条易形成发卡结构的寡聚核苷酸序列；选用单一限制性内切酶酶切基因组DNA，纯化后与发卡结构连接；利用引物设计软件选定发卡结构上的一段特异性序列作为5′端引物、两条靠近未知序列端的已知DNA序列上的互补序列作为3′端引物；以发卡结构连接物为模板，采用设计的引物进行巢式PCR扩增以获取已知DNA序列5′端侧翼的未知序列。本发明具有操作简便、应用范围广、操作限制少、引物特异性强、结果验证简捷、未知序列长度不限和成本低廉等特点。
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公开(公告)号：CN102994529A
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201210562519.X
申请日：2012-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明的目的是提供一种GH10木聚糖酶Aus Xyn10A热稳定性改造及重组突变酶的高效表达和纯化方法。依据Aus Xyn10A(源于Aspergillus usamii E001)与耐热木聚糖酶(源于Thermoascus Aurantiacus 751K6A)蛋白质序列比对结果，运用基因工程的方法将耐热酶的N末端区域序列替换Aus Xyn10A的对应序列。获得的突变酶命名为ATx10AM。实验结果表明突变后该酶的最适温度和热稳定性有了明显的提高，作为一种耐热型的酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN102127556A
公开(公告)日：2011-07-20
申请号：CN201010581342.9
申请日：2010-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株的新型木聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。生物信息学分析表明该木聚糖酶属于糖苷水解酶第10家族，命名为Aus Xyn10A，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3，相应的基因命名为Aus xyn10A。本发明还公开了木聚糖酶工程菌的构建以及重组木聚糖酶的高效表达和纯化的方法。作为一种新型酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN102690832A
公开(公告)日：2012-09-26
申请号：CN201210181446.X
申请日：2012-06-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明的目的是提供一种第10家族木聚糖酶Aus Xyn10A热稳定性改造及重组突变酶的高效表达和纯化方法。依据Aus Xyn10A(源于Aspergillus usamii E001)与耐热木聚糖酶(源于Thermotoga maritima)蛋白质序列比对结果，运用基因工程的方法将耐热酶的C末端序列融合到Aus Xyn10A的C末端。获得的突变酶命名为Aus Xyn10A’。实验结果表明突变后该酶的最适温度有了明显的提高，作为一种耐热型的酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN102492676A
公开(公告)日：2012-06-13
申请号：CN201110410494.7
申请日：2011-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种通过计算机技术与生物信息学相结合的手段获得耐热杂合木聚糖酶EvAus Xyn11A的方法，其核苷酸和氨基酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。本发明公开了利用分子动力学模拟理性设计耐热杂合基因的方法，并通过重叠PCR获得了这一杂合基因EvAus xyn11A；此外本发明还公开了EvAus Xyn11A工程菌的构建以及重组EvAus Xyn11A异源表达的方法，制备的重组EvAus Xyn11A的最适作用温度60℃，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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