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公开(公告)号：CN102559923A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201210073698.0
申请日：2012-03-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物病原菌的分子生物学检测领域，公开了一种快速鉴定菊花真菌病害病原菌种类的方法。该方法包括：(1)植物病样制备；(2)聚合酶链式反应(PCR)、电泳检测及片段纯化；(3)测序及结果比对确定病原菌种类。本方法突破了传统的植物真菌病害鉴定周期长、专业性强等局限性，提供的检测方法可在6小时内即可完成检测与鉴定菊花真菌病害，检测广谱性强，灵敏度高，工序简单。
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公开(公告)号：CN116024255A
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202210812008.2
申请日：2022-07-11
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用不定芽体外再生提高菊属植物基因编辑效率的方法，包括以下步骤：将CRISPR/Cas9基因编辑菊属植物的幼叶的叶盘经过不定芽再生培养获得不定芽，再将不定芽切下接种到生根培养基上进行生根培养得到再生植株。本发明通过构建含有编辑CsDRM1基因的载体，利用叶盘转化法获得基因编辑植株，再利用不定芽体外再生的方式将基因编辑效率从≤50％提升至100％，此方法具有操作简单，效果显著等优点，为基因编辑发展提供新方法，具有较高的实用性和科研应用价值。
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公开(公告)号：CN112301117B
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN202011140853.7
申请日：2020-10-22
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6869 , C12N15/10 , G16B5/00 , G16B25/20
Abstract: 本发明公开了一种基于高通量测序构建目标蛋白互作网络的方法，该方法将BD‑诱饵与猎物文库共转化Y2H酵母菌株，在YPDplus培养基中30℃培养4h后，弃上清，加入1mL无菌水基悬浮，取100μL悬浮菌液再加入10ml SD/‑Leu/‑Trp/‑His/‑Ade液体培养基中震荡培养24h、72h和80h后分别取样，以这些菌液为模版进行PCR扩增，进行琼脂糖凝胶电泳检测菌液筛选程度，将产物回收之后进行高通量测序、de novo组装后进行基因丰度与差异分析，取差异基因即为该文库中与目的基因互作的蛋白编码基因，从而初步构建目标蛋白的互作网络。该方法同时适用于无参考基因物种目标蛋白互作网络的构建。该方法简化了酵母双杂交筛库的步骤，不受单次筛选克隆数限制，找到单个文库中目标蛋白的所有互作蛋白。
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公开(公告)号：CN111926005B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN201910392989.8
申请日：2019-05-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/11 , C12Q1/6841
Abstract: 本发明提供了一种基于菊属植物重复序列设计的寡核苷酸探针套，并公开了一种基于寡核苷酸探针套的菊属植物有丝分裂中期染色体荧光原位杂交方法。具体为：将染色体制片先于‑80℃下保存12h，揭片后放入无水乙醇中脱水30min以上，晾干后制片置于碱变性液中44℃变性5min，室温下置于70.0％、70.0％、100.0％酒精中，依次梯度脱水各5min，气干；配制FISH杂交液并混匀，滴加于染色体制片上，37℃培养箱中进行杂交培养，最后进行信号检测；本发明开发的寡核苷酸探针套和原位杂交方法，可有效的用于菊属植物染色体分析核型图谱的构建(图1)，通过组配好的寡核苷酸探针套通过一次FISH分析进行检测，避免了对一张制片重复多次杂交，大大简化了FISH分析的程序，提高了实验效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113957166A
公开(公告)日：2022-01-21
申请号：CN202010700190.3
申请日：2020-07-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6841 , G16B20/20 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种基于菊花近缘种属植物参考基因组的核糖体DNA(rDNA)寡核苷酸混合探针套，并公开了一种基于菊花近缘种属植物参考基因组的核糖体DNA(rDNA)寡核苷酸混合探针套的开发方法。具体为：利用已下载的拟南芥rDNA数据，对已有的菊花脑、甘野菊、黄蒿和向日葵进行本地Blast比对,获得5S rDNA和45S rDNA(5.8S、18S和28S)共有序列；再利用该数据在Oligo7软件开发5S rDNA和45S rDNA探针；合成的5S rDNA和45SrDNA寡核苷酸探针套分别包含2条和10条寡核苷酸探针。本发明开发的寡核苷酸探针开发方法和探针套，可有效的用于菊属植物染色体分析核型图谱的构建，通过组配好的寡核苷酸探针套通过FISH分析进行检测，避免克隆重组、标记探针的繁琐程序和异源片段，大大简化了FISH分析的程序，提高了实验效率。
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公开(公告)号：CN105671056A
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201610134871.1
申请日：2016-03-09
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C07K14/415 , C12N15/66 , C12N15/8205 , C12N15/827 , C12Q1/6895 , C12Q2600/13 , C12Q2600/158
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转CmTCP20基因调控菊花花瓣生长的方法，包括以下步骤：从切花大菊‘神马’中克隆CmTCP20基因；构建CmTCP20基因植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行培养初步获得抗性植株。对转化植株进行PCR、定量RT-PCR检测证实CmTCP20内源基因已经整合到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行表型观察与统计分析，发现与未转基因植株相比，转基因植株的花瓣生长量明显变大。本发明通过转化内源CmTCP20转录因子并正常转录表达，从而调控了切花菊花瓣的生长，为利用基因工程技术提高切花菊观赏品质提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN102559923B
公开(公告)日：2014-01-08
申请号：CN201210073698.0
申请日：2012-03-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物病原菌的分子生物学检测领域，公开了一种快速鉴定菊花真菌病害病原菌种类的方法。该方法包括：(1)植物病样制备；(2)聚合酶链式反应(PCR)、电泳检测及片段纯化；(3)测序及结果比对确定病原菌种类。本方法突破了传统的植物真菌病害鉴定周期长、专业性强等局限性，提供的检测方法可在6小时内即可完成检测与鉴定菊花真菌病害，检测广谱性强，灵敏度高，工序简单。
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公开(公告)号：CN103146712A
公开(公告)日：2013-06-12
申请号：CN201310096562.6
申请日：2013-03-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及菊花bHLH转录因子CmbHLH1基因及其植物表达载体和应用。本发明菊花bHLH转录因子CmbHLH1基因序列如SEQ ID NO.1所示，所构建的表达载体pCAMBIA1301‐（+/‐）‐CmbHLH1是将CmbHLH1基因插入到克隆载体pMD19‐T simple vector(Takara)，后经过BamH I(Takara)和Sac I(Takara)双酶切后连接到表达载体pCAMBIA1301的BamH I和Sac I位点得到的。将该植物表达载体用于植物遗传转化，正反义CmbHLH1基因在CaMV35S启动子的启动下过量表达，从而达到影响下游目的基因的表达效果，提高植物铁离子的吸收能力并进一步验证该基因的功能。菊属中该基因是首次发现与铁离子吸收相关的bHLH转录因子。
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公开(公告)号：CN102559702A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201210063040.1
申请日：2012-03-12
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , C12N15/84 , A01H5/00
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，公开了耐盐基因CcSOS1及其应用。耐盐基因CcSOS1，其核苷酸序列为SEQ ID No.1。所述的耐盐基因CcSOS1在提高菊花抗盐性方面的应用。一种提高菊花抗盐性的方法，该方法包括如下步骤：(1)构建CcSOS1基因的植物表达载体；(2)采用农杆菌介导法将含CcSOS1基因的植物表达载体转入到切花菊中，进行培养初步获得抗性植株。本发明从盐生植物大岛野路菊首次克隆了一个新的耐盐基因CcSOS1，通过将该基因整合到菊花基因组中，通过高盐试验分析获得耐高盐的转基因菊花株系。利用本方法可以显著提高菊花的耐盐性。
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