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公开(公告)号：CN119569890A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202311137200.7
申请日：2023-09-05
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C07K19/00 , C07K14/315 , A61K39/12 , A61K39/385 , A61P31/20 , C07K16/08 , B82Y5/00 , B82Y40/00
Abstract: 本发明提供了一种基于非洲猪瘟病毒的C type lectin蛋白纳米颗粒、融合蛋白、及制备和应用；本发明基于插入了Spytag标签的Ferritin纳米颗粒作为外源抗原展示载体，与非洲猪瘟病毒C type lectin胞外域和Spycatcher融合后获得的重组蛋白进行共价连接，并通过凝胶层析等手段对连接后的纳米颗粒成功进行纯化。在动物免疫评价实验中，发现C type lectin胞外域与Ferritin纳米颗粒连接后，机体内C type lectin特异性抗体的水平明显获得提高，且有利于增加机体T细胞免疫反应。
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公开(公告)号：CN115094060B
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202210727672.7
申请日：2022-06-23
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 一种基于LAMP‑CRISPR/Cas12a可视化检测PCV2核酸的试剂盒，包括CRPSPR‑Cas12检测体系和LAMP扩增引物，是将LAMP检测方法和CRPSPR‑Cas12检测方法相结合，建立的可实现猪圆环病毒2型核酸可视化检测方法。本检测方法具有优良的特异性、灵敏性和可重复性，且操作简便，无需昂贵的仪器设备，并具有可视化优势，将该检测方法向猪场及检测单位推广应用，有利于实现猪圆环病毒2型相关病的快速诊断。
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公开(公告)号：CN110711202B
公开(公告)日：2022-08-19
申请号：CN201911023562.7
申请日：2019-10-25
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A61K31/7088 , A61K31/713 , A61P31/20 , C12N15/12 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用。本发明的PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用，通过间接免疫荧光试验检测PCV2在PK‑15细胞中的增殖变化，检测PCV2感染PK‑15细胞后PHB2 mRNA的动态变化，和鉴定在PHB2基因或蛋白的抑制剂转染PK‑15细胞中PCV2 Cap蛋白表达。结果表明，PHB2在正常及PCV2感染的PK‑15细胞中均有效表达。PCV2可显著影响PK‑15细胞中PHB2转录，而且PHB2对PCV2病毒复制具有调节作用，下调PHB2的表达，即PHB2基因敲除或蛋白表达下调，能明显抑制PCV2复制，对阐明PCV2致病机理和研究新的抗病毒药物具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114773483A
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202210058058.6
申请日：2022-01-19
Applicant: 湖南农业大学 , 湖南普简生物科技有限公司
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N15/66 , G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白，由非洲猪瘟病毒CD2v蛋白与MGF360‑505R蛋白的B细胞表位以柔性肽串联后形成，该串联表位蛋白的表达量与包涵体含量更高，且具有一定的可溶性，与血清抗体具有反应性，能够用于抗体ELISA的检测。还公开了该非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白的构建方法、在抗体ELISA检测中的应用及抗体ELISA检测试剂盒。本发明的应用和抗体ELISA检测试剂盒，特异性良好，重复性与稳定性好，灵敏度高，能准确识别ASFV野生型和CD2v基因缺失型毒株免疫后产生的血清样本，对ASF检测具有一定的参考价值，基于保守表位的血清学检测方法有望提供更广泛的诊断范围。
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公开(公告)号：CN114214458A
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202111560511.5
申请日：2021-12-17
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明提供了一种同时检测四种猪繁殖障碍病原的多重荧光定量PCR引物和探针及其方法，包括针对猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒的四个基因PCV2‑cap、PCV3‑cap、PPV‑NS1和PRV‑gE的保守片段的引物和探针。本发明检测方法具有较高的特异性和敏感性，可较好地适配于多通道荧光PCR仪，能有效应用于四种猪繁殖障碍相关病原的检测与分析，能在较短的时间内完成疾病的诊断检测，以为科学合理地制定防控措施提供有效工具。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110669142A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201910942130.X
申请日：2019-09-30
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种融合RGD的猪圆环病毒2型病毒样颗粒、感染性克隆及其制备方法和应用。融合RGD的猪圆环病毒2型病毒样颗粒，RGD短肽融合于PCV2 Cap蛋白上。本发明的融合RGD的猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒，是通过对PCV2 Cap蛋白进行了RGD多肽序列短肽修饰，RGD短肽融合于PCV2 Cap蛋白上，并在体外组装成表面融合RGD的PCV2病毒样颗粒。与野生型PCV2病毒样颗粒相比，融合RGD的PCV2病毒样颗粒免疫小鼠产生的PCV2特异性IgM和IgG抗体水平显著升高，能诱导产生高滴度的PCV2抗体，融合RGD的PCV2病毒样颗粒增强体液免疫应答。融合RGD的PCV2病毒样颗粒可应用于增强型VLPs和鉴别诊断的分子标签VLPs疫苗研制，为PCV2疫苗的研发提供了新思路。
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公开(公告)号：CN108410907A
公开(公告)日：2018-08-17
申请号：CN201810192797.8
申请日：2018-03-08
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)-2A-Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR-gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。
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公开(公告)号：CN104073473B
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201410145870.8
申请日：2014-04-11
Applicant: 美国普赛生物高科技有限责任公司 , 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种PCV2病毒样颗粒及其制备方法和裂解及VLP组装缓冲液。基于自主优化设计，并人工合成适合在原核表达系统中高效表达的PCV2核衣壳蛋白基因，通过大肠杆菌原核表达系统表达PCV2核衣壳蛋白的全长基因序列，并利用其可溶性核衣壳蛋白在特定条件下高效自体组装成了病毒样颗粒。本发明创新点主要在于采用不同于常规的真核表达系统获取VLPs方法，而是利用原核表达系统获取PCV2VLPs，本方法成本低廉、简单高效，适合大规模产业化应用；其中还应用到独创的既可以促进菌体裂解又能适合VLPs自体组装的双功能于一体的缓冲液配方；另外发明所获得的PCV2病毒样颗粒与野生型病毒外形相似度高，并且免疫原性好，可以用于研发具有应用潜力的猪圆环病毒的亚单位疫苗及药物传递载体。
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公开(公告)号：CN104498439A
公开(公告)日：2015-04-08
申请号：CN201410712094.5
申请日：2014-11-28
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/20 , B01D15/38 , C12M1/00
Abstract: 本发明提供了一种杂交瘤细胞、PCV2单克隆抗体及其应用。本发明通过创造性地采用PCV2病毒样颗粒作为免疫原，由于PCV2病毒样颗粒是更接近于正常PCV2病毒的蛋白组装而成的空壳结构，能够通过和正常病毒感染一样的途径递呈给免疫细胞，诱导免疫系统产生免疫保护反应，使得本发明的杂交瘤细胞分泌得到的单克隆抗体相比PCV2抗原蛋白单克隆抗体具有更高特异性和灵敏度。
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公开(公告)号：CN104073473A
公开(公告)日：2014-10-01
申请号：CN201410145870.8
申请日：2014-04-11
Applicant: 美国普赛生物高科技有限责任公司 , 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种PCV2病毒样颗粒及其制备方法和裂解及VLP组装缓冲液。基于自主优化设计，并人工合成适合在原核表达系统中高效表达的PCV2核衣壳蛋白基因，通过大肠杆菌原核表达系统表达PCV2核衣壳蛋白的全长基因序列，并利用其可溶性核衣壳蛋白在特定条件下高效自体组装成了病毒样颗粒。本发明创新点主要在于采用不同于常规的真核表达系统获取VLPs方法，而是利用原核表达系统获取PCV2VLPs，本方法成本低廉、简单高效，适合大规模产业化应用；其中还应用到独创的既可以促进菌体裂解又能适合VLPs自体组装的双功能于一体的缓冲液配方；另外发明所获得的PCV2病毒样颗粒与野生型病毒外形相似度高，并且免疫原性好，可以用于研发具有应用潜力的猪圆环病毒的亚单位疫苗及药物传递载体。
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