公开(公告)号：CN115918522A

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN202310044710.3

申请日：2023-01-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王海滨 ,  李子旋 ,  陈发棣 ,  马良驹 ,  荆茹月 ,  苏江硕 ,  房伟民 ,  管志勇

IPC: A01H1/02

Abstract: 本发明公开了一种基于种间远缘杂交蒙花苷导入的提升菊花品质的加工方法，通过对“中国菊花资源保存中心”中收集到的野生菊属资源进行筛选，建立以7种功能性成分为指标的综合评价体系，创新性得选择紫花野菊作为父本，进行种间远缘杂交获取F1后代，通过超高效液相色谱技术UPLC和紫外分光光度法分析F1代植株，筛选蒙花苷8.80mg/g，绿原酸2.20mg/g，木犀草苷0.88mg/g，3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸7.70mg/g以上的后代。本发明通过菊花与紫花野菊进行远缘杂交导入蒙花苷，创造蒙花苷、绿原酸、木犀草苷和3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸均符合《药典》标准的新种质，从而解决菊花加工品质提升问题。

公开(公告)号：CN105112534B

公开(公告)日：2022-11-08

申请号：CN201510587171.3

申请日：2015-09-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陈发棣 ,  种昕冉 ,  王海滨 ,  张飞 ,  蒋甲福

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/29 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数的引物对及方法。PGK基因作为内参基因在荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数中的应用。一种应用于荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数的内源基因扩增引物对，正向引物序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物序列如SEQ ID NO.2所示。本发明可以快速、准确、高效的鉴定菊花内源基因拷贝数和转基因菊花转内源、转外源基因拷贝数。通过本发明提供的检测引物和方法，以菊花和转基因菊花为实验材料，根据待检测拷贝数的基因和内源参照基因PGK的CT值比较分析，即可得出菊花内源基因拷贝数和转基因菊花所转基因拷贝数。该检测方法为复杂基因组基因的拷贝数鉴定提供了新思路，大大提高了检测基因拷贝数的效率。

公开(公告)号：CN114875039A

公开(公告)日：2022-08-09

申请号：CN202210502791.2

申请日：2022-05-09

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陈发棣 ,  丁莲 ,  刘家佑 ,  丁宝清 ,  陈素梅 ,  蒋甲福

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  A01H5/02 ,  A01H6/14

Abstract: 本发明公开了一种基因CmBZS1在创制托桂花型菊花中的应用，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1，该基因CmBZS1的定向干扰序列amiR‑CmBZS1，其核苷酸序列为SEQ ID NO.16。本发明首次提出基因CmBZS1在改变菊花花型中的应用，尤其是在创制托桂花型菊花中的应用，还公开了一种创制托桂花型菊花的方法。首次设计得到的定向干扰序列amiR‑CmBZS1可以改变菊花花瓣形状，促进菊花的管状花花瓣伸长，形成花瓣为桂瓣型的菊花，在定向培育托桂型菊花中具有重要意义，大幅提高了桂瓣型菊花育种效率、缩短了培育时间，在开发分子标记、改良菊花花型、完善菊花花型转基因育种技术方面有较大的应用价值。

公开(公告)号：CN112899111B

公开(公告)日：2022-06-03

申请号：CN201911132312.7

申请日：2019-11-19

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王海滨 ,  霍冰洁 ,  曲晓慧 ,  陈发棣 ,  宋爱萍 ,  张智 ,  管志勇 ,  卢漫

IPC: C12G3/055

Abstract: 本发明公开了一种标准化青蒿酒的制作工艺，属于食品加工技术领域。包括从青蒿材料中提取青蒿精油，并向食用酒精中添加一定量的青蒿精油、纯露、甘油等其他添加剂，制成青蒿酒。应用此方法调配的青蒿酒在香气、风味等方面的表现与传统青蒿酒的特点基本一致；并且此技术的生产周期短、生产效率高、品质优良均一，可用于青蒿酒的市场化生产，实用性较强。

公开(公告)号：CN112301117B

公开(公告)日：2022-06-03

申请号：CN202011140853.7

申请日：2020-10-22

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 宋爱萍 ,  余琪 ,  胡月姮 ,  张璐瑶 ,  陈素梅 ,  管志勇 ,  房伟民 ,  陈发棣

IPC: C12Q1/6869 ,  C12N15/10 ,  G16B5/00 ,  G16B25/20

Abstract: 本发明公开了一种基于高通量测序构建目标蛋白互作网络的方法，该方法将BD‑诱饵与猎物文库共转化Y2H酵母菌株，在YPDplus培养基中30℃培养4h后，弃上清，加入1mL无菌水基悬浮，取100μL悬浮菌液再加入10ml SD/‑Leu/‑Trp/‑His/‑Ade液体培养基中震荡培养24h、72h和80h后分别取样，以这些菌液为模版进行PCR扩增，进行琼脂糖凝胶电泳检测菌液筛选程度，将产物回收之后进行高通量测序、de novo组装后进行基因丰度与差异分析，取差异基因即为该文库中与目的基因互作的蛋白编码基因，从而初步构建目标蛋白的互作网络。该方法同时适用于无参考基因物种目标蛋白互作网络的构建。该方法简化了酵母双杂交筛库的步骤，不受单次筛选克隆数限制，找到单个文库中目标蛋白的所有互作蛋白。

公开(公告)号：CN111926005B

公开(公告)日：2022-04-08

申请号：CN201910392989.8

申请日：2019-05-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王海滨 ,  何俊 ,  申屠圆玥 ,  宋爱萍 ,  陈发棣 ,  林思思 ,  邓波 ,  亓增

IPC: C12N15/11 ,  C12Q1/6841

Abstract: 本发明提供了一种基于菊属植物重复序列设计的寡核苷酸探针套，并公开了一种基于寡核苷酸探针套的菊属植物有丝分裂中期染色体荧光原位杂交方法。具体为：将染色体制片先于‑80℃下保存12h，揭片后放入无水乙醇中脱水30min以上，晾干后制片置于碱变性液中44℃变性5min，室温下置于70.0％、70.0％、100.0％酒精中，依次梯度脱水各5min，气干；配制FISH杂交液并混匀，滴加于染色体制片上，37℃培养箱中进行杂交培养，最后进行信号检测；本发明开发的寡核苷酸探针套和原位杂交方法，可有效的用于菊属植物染色体分析核型图谱的构建(图1)，通过组配好的寡核苷酸探针套通过一次FISH分析进行检测，避免了对一张制片重复多次杂交，大大简化了FISH分析的程序，提高了实验效率。

公开(公告)号：CN113957166A

公开(公告)日：2022-01-21

申请号：CN202010700190.3

申请日：2020-07-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王海滨 ,  何俊 ,  陈发棣 ,  林思思 ,  房伟民 ,  陈素梅 ,  宋爱萍

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6841 ,  G16B20/20 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供了一种基于菊花近缘种属植物参考基因组的核糖体DNA(rDNA)寡核苷酸混合探针套，并公开了一种基于菊花近缘种属植物参考基因组的核糖体DNA(rDNA)寡核苷酸混合探针套的开发方法。具体为：利用已下载的拟南芥rDNA数据，对已有的菊花脑、甘野菊、黄蒿和向日葵进行本地Blast比对,获得5S rDNA和45S rDNA(5.8S、18S和28S)共有序列；再利用该数据在Oligo7软件开发5S rDNA和45S rDNA探针；合成的5S rDNA和45SrDNA寡核苷酸探针套分别包含2条和10条寡核苷酸探针。本发明开发的寡核苷酸探针开发方法和探针套，可有效的用于菊属植物染色体分析核型图谱的构建，通过组配好的寡核苷酸探针套通过FISH分析进行检测，避免克隆重组、标记探针的繁琐程序和异源片段，大大简化了FISH分析的程序，提高了实验效率。

公开(公告)号：CN108411026B

公开(公告)日：2021-10-01

申请号：CN201810483506.0

申请日：2018-05-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张飞 ,  仰小东 ,  苏江硕 ,  王海滨 ,  房伟民 ,  陈素梅 ,  陈发棣

IPC: C12Q1/6895 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开一种菊花托桂花型分子标记辅助选择方法，所述的分子标记为SRAP分子标记或/和SCAR标记，本发明以托桂型切花小菊品种‘南农雪峰’为母本和非托桂型品种‘QX096’为父本杂交获得的80株F1分离群体为试材。用SRAP分子标记来筛选与控制托桂花型基因相连锁的特异位点。其中SRAP分子标记引物组合M11E1在托桂型菊花材料中扩增得到一条272bp的特异片段，通过设计特异SCAR分子标记引物在托桂材料中扩增出单一的168bp的条带，进一步在‘南农雪峰’בQX096’和‘南农雪峰’ב蒙白’两个群体中验证，准确率分别高达92.5％和84.3％。说明上述标记已成功转化成SCAR分子标记。该发明提高了托桂花型的选择效率，加快托桂花型菊花新品种的选育进程。

公开(公告)号：CN109856330B

公开(公告)日：2021-05-28

申请号：CN201910085871.0

申请日：2019-01-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王海滨 ,  何俊 ,  陈发棣 ,  卢漫 ,  林思思 ,  房伟民 ,  陈素梅 ,  赵爽

IPC: G01N33/00

Abstract: 本发明公开了一种通过人工调控提高菊花根尖有丝分裂相的方法。利用人工调控的方法，即通过实验验证的合适的暗处理和光照(强)时间来对菊花组培苗进行处理，不仅获得了较为干净的染色体制片，还有效提高细胞有丝分裂中期分裂相数量(见图1、图2)。本发明利用的原材料易得，简单易行，成本低廉，可操作性强，实用性突出；通过暗处理和光照处理，提高在菊花染色体制片观察时其有丝分裂中期相的数量，且获得干净的根尖有丝分裂中期染色体图像，可用于菊花有丝分裂染色体的鉴定，同时也有助于获得用于核型分析、FISH分析等细胞学研究。而这种获得清晰的菊花根尖有丝分裂中期的染色体图像的方法可推广至菊属其他植物的细胞学研究中。

公开(公告)号：CN111635902A

公开(公告)日：2020-09-08

申请号：CN202010482826.1

申请日：2020-05-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陈发棣 ,  辛静静 ,  刘晔 ,  蒋甲福 ,  管志勇 ,  陈素梅 ,  房伟民

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/14 ,  C12Q1/6895

Abstract: 本发明属于植物基因工程育种领域，涉及一种通过人工干扰提高菊花黑斑病抗性的方法，包括以下步骤：构建pMDC32-amiCmKIC植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行培养获得抗性植株。对转化植株进行PCR、定量RT-PCR检测证实amiRNA在转录水平上影响靶基因CmKIC的表达。对转基因植株进行抗病性检测，发现与野生型植株相比，转基因植株抗病性有很大提高。本发明通过人工干扰CmKIC基因提高菊花的黑斑病抗性，为利用基因工程技术选育菊花抗病品种提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。