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公开(公告)号：CN117987465B
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202410034211.0
申请日：2024-01-10
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12N9/22 , C12N15/877 , C12N15/90 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及一种十基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中，敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因，转入hCD39、hCD46、hCD47、hCD55、hCD59、hTBM、hEPCR人源化基因，构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD47/hCD55/hCD59/hTBM/hEPCR十基因编辑克隆猪，进一步对克隆猪基因型鉴定、mRNA和蛋白表达分析，获得十基因编辑异种器官移植供体猪。本发明通过对猪抗原基因敲除并转入人源化基因进行组合修饰，解决了异种器官移植过程中面临的超急性免疫排斥反应、抗原‑抗体介导的免疫排斥反应、受体免疫细胞活化及凝血障碍等问题，克服了现有克隆猪生产率低、存活率低及基因编辑成功率低等障碍，对促进猪‑非人灵长类异种器官移植临床前研究和猪‑人异种器官移植临床化应用具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN106755112B
公开(公告)日：2019-07-12
申请号：CN201611224097.X
申请日：2016-12-27
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/877 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种利用体细胞克隆技术培育地方优良家畜品种的方法。利用体细胞克隆技术培育家畜优良品种，通过从家畜群体中筛选出经济性状优良的个体，建立成纤维细胞系，利用体细胞核移植技术对上述筛选出的个体进行克隆，待克隆出生的个体达到适配年龄后，进行组合杂交，再对每一杂交组合的F1代个体的经济性状进行鉴定，对达不到选育标准的F1代个体父母，查明是父代还是母代遗传引起的性状，然后对相应的父母个体进行淘汰，对留下的后代个体中可以稳定遗传的父母再进行组群，选育出优良家畜品种。通过对本发明的实施，能批量地获得具有极其优良经济性状的家畜个体，实现家畜特有品种资源的可持续开发利用，提高家畜的育种效率和选育的成功率。
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公开(公告)号：CN104894166A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201410076057.X
申请日：2014-03-04
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/877 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖哺乳动物的方法，属于繁殖生物学领域。本发明包括哺乳动物的卵母细胞孤雌激活、孤雌胚胎移植、孤雌胎儿成纤维细胞的分离和连续的体细胞核移植；本发明将去脂后的成熟哺乳动物卵母细胞进行孤雌激活获得孤雌胚胎，移植到代孕妈妈体内，诊断为妊娠后根据不同的哺乳动物在不同的日龄取出成活孤雌胎儿，建立哺乳动物孤雌胎儿成纤维细胞系，并将其作为最初供体细胞，利用体细胞核移植技术进行连续克隆获得哺乳动物的孤雌生殖个体，此技术克服了哺乳动物孤雌生殖胚胎在体内早期停止发育的情况，成功延长哺乳动物的孤雌胚胎在体内的发育时间，并最终获得成活的孤雌生殖哺乳动物。
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公开(公告)号：CN103343142A
公开(公告)日：2013-10-09
申请号：CN201310295393.9
申请日：2013-07-15
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/877 , A61D19/04 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，属于繁殖生物学领域。本发明包括猪卵母细胞的去脂、孤雌激活、成纤维细胞的分离和连续的体细胞核移植；将猪去脂后的成熟卵母细胞进行孤雌激活获得孤雌胚胎，移植到代孕母猪体内并获取25－29日龄成活孤雌胎儿，建立猪孤雌胎儿成纤维细胞系，并将其作为最初供体细胞，利用体细胞核移植技术进行连续克隆获得猪的孤雌生殖个体，此技术克服了猪的孤雌生殖胚胎在体内发育至30天便停止发育的情况，成功延长猪的孤雌胚胎在体内的发育时间，并最终获得成活的孤雌克隆猪。
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公开(公告)号：CN101974248A
公开(公告)日：2011-02-16
申请号：CN201010278067.3
申请日：2010-09-10
Applicant: 云南农业大学
IPC: C09B61/00 , C08B37/00 , A23L1/28 , A23L1/30 , A61K36/82 , A61P3/10 , A61P3/06 , A61P35/00 , A61P31/18
Abstract: 本发明公开了一种茶色素组分的分离方法。该方法是采用超滤膜分离茶色素组分，将茶色素中的多种组分根据分子量区间分为若干组分的方法。本发明适用于对茶色素各组分的功能进行研究和应用所需要的组分分离，采用带有不同规格超滤膜，包括1000、3000、10000、30000、50000、100000Da的超滤管或超滤器，将茶色素水溶物按照分子量大小分成若干组分，经过喷雾干燥或冻干得到各组分的成品。该方法不发生化学反应，不添加有机溶剂，快速、安全、高效、成本低、易工业化且产品质量好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113913435B
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202111259580.2
申请日：2021-10-28
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/12 , C12N5/10 , C12N15/877 , C12N15/89 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及基于P53基因获得小型猪肿瘤疾病模型的方法，属于医学动物疾病模型领域。本方法主要包括P53基因BE3 sgRNA的设计与组装，BE3和sgRNA质粒的转染，筛选并获得P53基因关键碱基突变的阳性细胞系，利用体细胞核移植技术构建重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得P53基因突变仔猪，通过检测克隆仔猪组织中P53基因RNA及蛋白质表达水平来验证P53基因的功能，采用组织病理学及免疫组化法鉴定仔猪组织中的肿瘤；该肿瘤疾病模型可以精准模拟人类P53基因致病突变，对开展人类肿瘤的发生、形成、临床研究以及药物的研发具有重要的意义，为人类肿瘤疾病的研究和治疗提供了可靠的模型。
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公开(公告)号：CN113249456A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110557343.8
申请日：2021-05-21
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/6869 , C12Q1/06
Abstract: 本发明涉及一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法，属动物转基因技术领域。本发明针对已知的不同基因编辑类型的猪阳性成纤维细胞系，进行PCR、酶切及测序鉴定，基于细胞PCR条带灰度值，筛选获得细胞基因型鉴定所需的最低细胞量；将目的基因表达载体转染至猪成纤维细胞并进行单细胞培养筛选，当单克隆细胞系形成时，抠取后于培养板扩大培养并按上述最低细胞量计数进行基因型鉴定，经鉴定后立即进行体细胞核移植，取出胎儿分离培养及鉴定后获得大量转基因猪阳性成纤维细胞系。本发明克服了基因编辑猪阳性细胞系筛选周期长、效率低、成功率低的问题，对促进转基因猪的生产具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN108342491A
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201810362449.0
申请日：2018-04-20
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/6888
Abstract: 本发明涉及一种筛选异种移植供体猪最佳基因组合的方法，属动物生物技术领域。以人成纤维细胞为研究对象，建立人成纤维细胞体外相容性评价方法，用此方法验证已报道的心脏或其他移植存活时间长的基因修饰猪成纤维细胞的结果，筛出更适合的补体调节因子、免疫应答因子及抗凝血因子，在GTKO的基础上，对上述因子组合后进行定点敲入或敲除，再对不同多因子组合的猪成纤维细胞用此方法进行早期筛选，获得3种以上最佳基因组合的细胞再克隆，克隆猪进行猪-非灵长类的心脏移植验证此筛选方法的可靠性。本发明不需在获得基因组合修饰猪的基础上即可评价最佳基因组合，将极大地节约基因组合筛选时间和经费投入，对开发真正的异种移植供体猪具有重大的意义。
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公开(公告)号：CN103266122A
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201310209089.8
申请日：2013-05-31
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种利用TALEN技术的高效定点转基因方法，属于分子生物学领域；利用TALEN技术在生物体基因组中的特定位置设计出具有特异性序列TALEN靶点、构建TALEN质粒，同时，构建外源基因质粒；再将TALEN质粒和外源基因共同转染受体细胞，然后，在受体细胞基因组待整合的位置上切开一个口；外源基因就会在受体细胞基因组的切口处将外源基因序列自动插入。本发明实现了外源基因在基因组上定点整合，本方法操作简单，可控性高，实用性强。
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公开(公告)号：CN119177256A
公开(公告)日：2024-12-24
申请号：CN202311457371.8
申请日：2023-11-03
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12N9/22 , C12N15/877 , C12N15/90 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及一种八基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因，转入hCD39、hCD46、hCD55、hCD59、hTBM人源化基因，结合体细胞克隆技术，构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD55/hCD59/hTBM八基因编辑克隆猪，进一步通过基因型、mRNA、蛋白表达鉴定及功能分析，获得八基因编辑异种器官移植供体猪。本发明解决了多基因编辑异种器官移植供体猪生产难度大、效率低、供体猪成活率低的技术难题，最大限度地解决了异种器官移植过程中面临的免疫排斥反应及补体失调共性问题，为更有针对性地开发适合不同组织器官异种移植供体猪奠定了基础，对推动异种器官移植临床转化具有重要的价值。
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