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公开(公告)号:CN117987465A
公开(公告)日:2024-05-07
申请号:CN202410034211.0
申请日:2024-01-10
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12N9/22 , C12N15/877 , C12N15/90 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及一种十基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法,属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中,敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因,转入hCD39、hCD46、hCD47、hCD55、hCD59、hTBM、hEPCR人源化基因,构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD47/hCD55/hCD59/hTBM/hEPCR十基因编辑克隆猪,进一步对克隆猪基因型鉴定、mRNA和蛋白表达分析,获得十基因编辑异种器官移植供体猪。本发明通过对猪抗原基因敲除并转入人源化基因进行组合修饰,解决了异种器官移植过程中面临的超急性免疫排斥反应、抗原‑抗体介导的免疫排斥反应、受体免疫细胞活化及凝血障碍等问题,克服了现有克隆猪生产率低、存活率低及基因编辑成功率低等障碍,对促进猪‑非人灵长类异种器官移植临床前研究和猪‑人异种器官移植临床化应用具有重要的应用价值。
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公开(公告)号:CN114015722B
公开(公告)日:2023-11-10
申请号:CN202111301287.8
申请日:2021-11-04
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/12 , C12N5/077 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种构建重症免疫缺陷和肝损伤双重猪模型的方法及应用,属动物生物技术领域。该方法采用CRISPR/Cas9技术敲除猪胎儿成纤维细胞中RAG2、IL2RG和FAH基因,利用体细胞核移植技术构建RAG2‑/‑/IL2RG‑/Y/FAH‑/‑三基因编辑克隆猪,经表型分析鉴定获得重症免疫缺陷及肝损伤双重猪模型。本发明克服了现有模型构建技术中生产周期长、效率低、损伤不可逆、缺乏免疫缺陷和肝损伤同时应用人源化程度不理想等问题,可通过连续克隆技术实现批量构建重症免疫缺陷和肝损伤双重猪模型,在肿瘤生物学、细胞移植及人源化动物模型等相关领域具有巨大的优势和潜在的市场应用前景。
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公开(公告)号:CN114015722A
公开(公告)日:2022-02-08
申请号:CN202111301287.8
申请日:2021-11-04
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/12 , C12N5/077 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种构建重症免疫缺陷和肝损伤双重猪模型的方法及应用,属动物生物技术领域。该方法采用CRISPR/Cas9技术敲除猪胎儿成纤维细胞中RAG2、IL2RG和FAH基因,利用体细胞核移植技术构建RAG2‑/‑/IL2RG‑/Y/FAH‑/‑三基因编辑克隆猪,经表型分析鉴定获得重症免疫缺陷及肝损伤双重猪模型。本发明克服了现有模型构建技术中生产周期长、效率低、损伤不可逆、缺乏免疫缺陷和肝损伤同时应用人源化程度不理想等问题,可通过连续克隆技术实现批量构建重症免疫缺陷和肝损伤双重猪模型,在肿瘤生物学、细胞移植及人源化动物模型等相关领域具有巨大的优势和潜在的市场应用前景。
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公开(公告)号:CN113907013A
公开(公告)日:2022-01-11
申请号:CN202111024050.X
申请日:2021-09-02
Applicant: 云南农业大学 , 苏州市冯氏实验动物设备有限公司
Abstract: 本发明涉及一种实验小型猪饲养栏,属于实验小型猪养殖技术领域。包括支撑架、漏粪板、粪盘、隔栏;所述的支撑架底部卡接有漏粪板,漏粪板上均匀间隔设有漏粪孔,支撑架上滑动安装有位于漏粪板下方的粪盘,支撑架四周固定安装有围栏,支撑架前侧中部和后侧中部对应安装有竖直的滑杆,隔栏前后两端分别设有与滑杆相匹配的滑槽。本发明所述的饲养栏中部设置拆卸及安装方便的隔栏,根据饲养规模,拆除或安装隔栏,适用性缩小或扩大猪只饲养空间,能最大限度地节约饲养空间和降低饲养成本,同时,通过设置漏粪板及粪盘,快速排出饲养栏内猪只排泄物,保证饲养环境整洁,使小型猪能够健康生长,加快洁净级和SPF级实验小型猪的培育和推广利用。
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公开(公告)号:CN113907012A
公开(公告)日:2022-01-11
申请号:CN202111024021.3
申请日:2021-09-02
Applicant: 云南农业大学 , 苏州市冯氏实验动物设备有限公司
Abstract: 本发明涉及一种实验小型猪饲养笼,属于实验小型猪养殖技术领域。包括支撑架、漏粪板、粪盘、围栏、可拆卸侧栏;所述的支撑架底部卡接有漏粪板,漏粪板上设有漏粪孔,支撑架上滑动安装有位于漏粪板下方的粪盘,支撑架前后两侧面固定安装有围栏,支撑架左右两侧面上滑动安装有可拆卸侧栏。通过可拆卸侧栏,根据饲养需要,抽出或插入并列放置的两个饲养笼相邻侧面上的可拆卸侧栏,将两个或者多个饲养笼内部连通起来,适用性缩小或扩大猪只饲养空间,能最大限度地节约饲养空间和降低饲养成本,同时,通过设置漏粪板及粪盘,快速排出饲养栏内猪只排泄物,保证饲养环境整洁,使小型猪能够健康生长,加快洁净级和SPF级实验小型猪的培育和推广利用。
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公开(公告)号:CN119177256A
公开(公告)日:2024-12-24
申请号:CN202311457371.8
申请日:2023-11-03
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12N9/22 , C12N15/877 , C12N15/90 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及一种八基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法,属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因,转入hCD39、hCD46、hCD55、hCD59、hTBM人源化基因,结合体细胞克隆技术,构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD55/hCD59/hTBM八基因编辑克隆猪,进一步通过基因型、mRNA、蛋白表达鉴定及功能分析,获得八基因编辑异种器官移植供体猪。本发明解决了多基因编辑异种器官移植供体猪生产难度大、效率低、供体猪成活率低的技术难题,最大限度地解决了异种器官移植过程中面临的免疫排斥反应及补体失调共性问题,为更有针对性地开发适合不同组织器官异种移植供体猪奠定了基础,对推动异种器官移植临床转化具有重要的价值。
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公开(公告)号:CN113249456B
公开(公告)日:2023-05-23
申请号:CN202110557343.8
申请日:2021-05-21
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/6869 , C12Q1/06
Abstract: 本发明涉及一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法,属动物转基因技术领域。本发明针对已知的不同基因编辑类型的猪阳性成纤维细胞系,进行PCR、酶切及测序鉴定,基于细胞PCR条带灰度值,筛选获得细胞基因型鉴定所需的最低细胞量;将目的基因表达载体转染至猪成纤维细胞并进行单细胞培养筛选,当单克隆细胞系形成时,抠取后于培养板扩大培养并按上述最低细胞量计数进行基因型鉴定,经鉴定后立即进行体细胞核移植,取出胎儿分离培养及鉴定后获得大量转基因猪阳性成纤维细胞系。本发明克服了基因编辑猪阳性细胞系筛选周期长、效率低、成功率低的问题,对促进转基因猪的生产具有重要的意义。
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公开(公告)号:CN110373390A
公开(公告)日:2019-10-25
申请号:CN201910497791.6
申请日:2019-06-10
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/877 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种异种器官移植基础供体猪的构建方法,属动物生物技术领域。在胎儿成纤维细胞的基础上,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因,并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因,结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46多基因修饰的异种移植供体基础猪。本发明在一定程度上解决了异种器官移植中存在的抗原抗体免疫排斥反应及补体调节的共性问题,为在基础供体猪的基础上研究开发适合心脏、肾脏、肝脏等器官及胰岛、皮肤等组织特异性的异种器官移植供体猪的构建奠定了基础,对构建多基因修饰的异种移植供体猪具有重要的应用价值和应用前景。
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公开(公告)号:CN104687060B
公开(公告)日:2017-05-31
申请号:CN201510060639.3
申请日:2015-02-05
Applicant: 云南农业大学 , 云南省高原特色农业产业研究院
IPC: A23L33/105
Abstract: 本发明公开一种富含γ‑氨基丁酸辣木产品及其加工工艺和应用,属食品加工技术领域。以辣木茎、叶为原料,30℃~50℃厌氧处理6~48小时;或厌氧3~6小时、有氧3~6小时交互处理1~3次;或采用5%的谷氨酸溶液浸泡3~24小时;在30℃~50℃鼓风干燥即得GABA含量可达15毫克/克(干物质)以上的辣木产品。本发明产品可作为制备降血压、促睡眠、调节情绪、缓解压力、保肝护肾、增强免疫、抗肿瘤等多种保健食品、药品、日化产品、饲料的原料或添加剂,以及作为提取制备GABA的原料;本工艺具有简单易于产业化、生产的产品γ氨基丁酸含量高的特点。
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公开(公告)号:CN117987465B
公开(公告)日:2024-11-15
申请号:CN202410034211.0
申请日:2024-01-10
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12N9/22 , C12N15/877 , C12N15/90 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及一种十基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法,属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中,敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因,转入hCD39、hCD46、hCD47、hCD55、hCD59、hTBM、hEPCR人源化基因,构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD47/hCD55/hCD59/hTBM/hEPCR十基因编辑克隆猪,进一步对克隆猪基因型鉴定、mRNA和蛋白表达分析,获得十基因编辑异种器官移植供体猪。本发明通过对猪抗原基因敲除并转入人源化基因进行组合修饰,解决了异种器官移植过程中面临的超急性免疫排斥反应、抗原‑抗体介导的免疫排斥反应、受体免疫细胞活化及凝血障碍等问题,克服了现有克隆猪生产率低、存活率低及基因编辑成功率低等障碍,对促进猪‑非人灵长类异种器官移植临床前研究和猪‑人异种器官移植临床化应用具有重要的应用价值。
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