公开(公告)号：CN117987465B

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202410034211.0

申请日：2024-01-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵恒 ,  赵红业 ,  王娇祥 ,  角德灵 ,  郭建雄 ,  魏太云 ,  徐凯祥

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/877 ,  C12N15/90 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种十基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中，敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因，转入hCD39、hCD46、hCD47、hCD55、hCD59、hTBM、hEPCR人源化基因，构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD47/hCD55/hCD59/hTBM/hEPCR十基因编辑克隆猪，进一步对克隆猪基因型鉴定、mRNA和蛋白表达分析，获得十基因编辑异种器官移植供体猪。本发明通过对猪抗原基因敲除并转入人源化基因进行组合修饰，解决了异种器官移植过程中面临的超急性免疫排斥反应、抗原‑抗体介导的免疫排斥反应、受体免疫细胞活化及凝血障碍等问题，克服了现有克隆猪生产率低、存活率低及基因编辑成功率低等障碍，对促进猪‑非人灵长类异种器官移植临床前研究和猪‑人异种器官移植临床化应用具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN119177256A

公开(公告)日：2024-12-24

申请号：CN202311457371.8

申请日：2023-11-03

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  角德灵 ,  赵恒 ,  王娇祥 ,  徐凯祥 ,  赵红业 ,  郭建雄 ,  魏太云

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/877 ,  C12N15/90 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种八基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因，转入hCD39、hCD46、hCD55、hCD59、hTBM人源化基因，结合体细胞克隆技术，构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD55/hCD59/hTBM八基因编辑克隆猪，进一步通过基因型、mRNA、蛋白表达鉴定及功能分析，获得八基因编辑异种器官移植供体猪。本发明解决了多基因编辑异种器官移植供体猪生产难度大、效率低、供体猪成活率低的技术难题，最大限度地解决了异种器官移植过程中面临的免疫排斥反应及补体失调共性问题，为更有针对性地开发适合不同组织器官异种移植供体猪奠定了基础，对推动异种器官移植临床转化具有重要的价值。

公开(公告)号：CN110373390A

公开(公告)日：2019-10-25

申请号：CN201910497791.6

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵红业 ,  赵恒 ,  角德灵 ,  徐凯祥

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种异种器官移植基础供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因，并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46多基因修饰的异种移植供体基础猪。本发明在一定程度上解决了异种器官移植中存在的抗原抗体免疫排斥反应及补体调节的共性问题，为在基础供体猪的基础上研究开发适合心脏、肾脏、肝脏等器官及胰岛、皮肤等组织特异性的异种器官移植供体猪的构建奠定了基础，对构建多基因修饰的异种移植供体猪具有重要的应用价值和应用前景。

公开(公告)号：CN117987465A

公开(公告)日：2024-05-07

申请号：CN202410034211.0

申请日：2024-01-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵恒 ,  赵红业 ,  王娇祥 ,  角德灵 ,  郭建雄 ,  魏太云 ,  徐凯祥

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/877 ,  C12N15/90 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种十基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中，敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因，转入hCD39、hCD46、hCD47、hCD55、hCD59、hTBM、hEPCR人源化基因，构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD47/hCD55/hCD59/hTBM/hEPCR十基因编辑克隆猪，进一步对克隆猪基因型鉴定、mRNA和蛋白表达分析，获得十基因编辑异种器官移植供体猪。本发明通过对猪抗原基因敲除并转入人源化基因进行组合修饰，解决了异种器官移植过程中面临的超急性免疫排斥反应、抗原‑抗体介导的免疫排斥反应、受体免疫细胞活化及凝血障碍等问题，克服了现有克隆猪生产率低、存活率低及基因编辑成功率低等障碍，对促进猪‑非人灵长类异种器官移植临床前研究和猪‑人异种器官移植临床化应用具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN119120568A

公开(公告)日：2024-12-13

申请号：CN202311459475.2

申请日：2023-11-03

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  徐凯祥 ,  赵恒 ,  王娇祥 ,  角德灵 ,  赵红业 ,  郭建雄 ,  魏太云

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/877 ,  C12N15/90 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种四基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1基因，并转入hCD39、hCD55、hTBM三个人源化基因，结合体细胞核移植技术构建GTKO/hCD39/hCD55/hTBM四基因编辑克隆猪，进一步通过基因型鉴定和蛋白功能表型分析，批量获得四基因编辑异种器官移植供体猪。本发明在一定程度上解决了猪‑人异种器官移植过程中存在的抗原抗体介导的免疫排斥反应共性问题，为进一步研究开发适合心脏、肾脏、肝脏、皮肤等器官/组织异种移植供体猪奠定了基础，对开展猪‑非人灵长类异种器官移植临床前研究和猪‑人异种器官移植临床化应用具有重要的前景。

公开(公告)号：CN118956960A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411426219.8

申请日：2024-10-14

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 赵红业 ,  魏红江 ,  曹攀 ,  角德灵 ,  徐凯祥 ,  郭建雄

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/0275 ,  C12N5/077 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明涉及一种通过诱导性表达K‑Ras基因构建小型猪肿瘤模型的方法，通过Tet‑On诱导表达系统与转座子技术结合，构建Tet‑On转座子表达载体PB‑CAG‑Teton3g‑T2A‑mcherry‑TRE3GS‑MCS‑Puro。获得K‑Ras基因编辑阳性细胞细胞系，构建K‑Ras基因编辑克隆胚，并移植至代孕母猪输卵管内，生产K‑Ras基因编辑克隆猪个体，通过饲喂四环素诱导K‑Ras表达，促进克隆猪肿瘤的发生，获得小型猪肿瘤模型。本发明克服了现有模型构建周期长、效率低、表型不明显、基因表达可控性差等技术问题，实现批量K‑Ras基因诱导性表达小型猪肿瘤模型的生产，在肿瘤生物学研究领域具有重要的应用价值和前景。

公开(公告)号：CN110373392A

公开(公告)日：2019-10-25

申请号：CN201910498532.5

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵恒 ,  赵红业 ,  角德灵 ,  徐凯祥 ,  郭建雄

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种适合肾脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术同时敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，在此基础猪上再定点插入hCD39、hTBM、REN三个修饰基因，构建多基因修饰的肾脏异种移植供体猪，再对该供体猪进行功能验证，获得适合肾脏异种移植的供体猪。本发明为适合异种肾脏移植供体猪的开发提供了科学的理论基础，为肾脏衰竭患者的移植治疗提供了希望。

公开(公告)号：CN110373391A

公开(公告)日：2019-10-25

申请号：CN201910498531.0

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  角德灵 ,  赵红业 ,  赵恒 ,  徐凯祥 ,  李鸿辉

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因后并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，再在此基础猪的Rosa26位点再定点插入hCD39、hTBM两个心脏功能修饰特异基因，构建出多基因修饰的心脏异种器官移植供体猪再进行功能验证，获得适合心脏异种移植的供体猪。本发明为异种心脏移植提供了可靠的供体猪，为处于终末期的心脏病患者的治疗提供了希望。

公开(公告)号：CN110295194A

公开(公告)日：2019-10-01

申请号：CN201910497796.9

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  徐凯祥 ,  赵红业 ,  角德灵 ,  郭建雄 ,  赵恒 ,  李鸿辉 ,  卿玉波

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种猪内源性逆转录病毒失活克隆猪的构建方法，属动物生物技术领域。通过ddPCR和全基因组测序比对，确定猪内源性逆转录病毒在猪胎儿成纤维细胞基因组中的拷贝数和其占据染色体的位置，利用CRISPR/Cas9技术构建猪内源性逆转录病毒失活载体转染至猪胎儿成纤维细胞，筛选获得的阳性细胞进行体细胞核移植，待妊娠时取出胎儿鉴定其失活与否，利用ddPCR和全基因组测序比对后，再对该猪胎儿成纤维细胞进行基因打靶，依次循环，直至获得猪内源性逆转录病毒完全失活的细胞后进行体细胞核移植，最终获得猪内源性逆转录病毒完全失活的克隆猪。本发明克服了猪内源性逆转录病毒失活效率低、成功率低的问题，对解决异种器官移植的安全性问题具有重要的意义。