公开(公告)号：CN119177256A

公开(公告)日：2024-12-24

申请号：CN202311457371.8

申请日：2023-11-03

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  角德灵 ,  赵恒 ,  王娇祥 ,  徐凯祥 ,  赵红业 ,  郭建雄 ,  魏太云

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/877 ,  C12N15/90 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种八基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因，转入hCD39、hCD46、hCD55、hCD59、hTBM人源化基因，结合体细胞克隆技术，构建GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD39/hCD46/hCD55/hCD59/hTBM八基因编辑克隆猪，进一步通过基因型、mRNA、蛋白表达鉴定及功能分析，获得八基因编辑异种器官移植供体猪。本发明解决了多基因编辑异种器官移植供体猪生产难度大、效率低、供体猪成活率低的技术难题，最大限度地解决了异种器官移植过程中面临的免疫排斥反应及补体失调共性问题，为更有针对性地开发适合不同组织器官异种移植供体猪奠定了基础，对推动异种器官移植临床转化具有重要的价值。

公开(公告)号：CN118147227A

公开(公告)日：2024-06-07

申请号：CN202410347106.2

申请日：2024-03-26

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李鸿辉 ,  魏红江 ,  方玉珠

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/877 ,  A01K67/0275 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明涉及基于PKP2基因获得小型猪心律失常性右心室心肌病(ARVC)疾病模型的方法，属于医学动物疾病模型领域。本方法主要包括筛选并获得PKP2基因关键碱基突变的阳性细胞系，利用二次体细胞核移植技术构建重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得PKP2基因突变仔猪。该ARVC疾病模型可以精准模拟人类PKP2基因致病突变，对开展人类ARVC的发生、形成、临床研究以及药物的研发具有重要的意义，为人类ARVC疾病的研究和治疗提供了可靠的模型。

公开(公告)号：CN113249456B

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202110557343.8

申请日：2021-05-21

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵红业 ,  赵恒 ,  角德灵 ,  范柠粼

IPC: C12Q1/6869 ,  C12Q1/06

Abstract: 本发明涉及一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法，属动物转基因技术领域。本发明针对已知的不同基因编辑类型的猪阳性成纤维细胞系，进行PCR、酶切及测序鉴定，基于细胞PCR条带灰度值，筛选获得细胞基因型鉴定所需的最低细胞量；将目的基因表达载体转染至猪成纤维细胞并进行单细胞培养筛选，当单克隆细胞系形成时，抠取后于培养板扩大培养并按上述最低细胞量计数进行基因型鉴定，经鉴定后立即进行体细胞核移植，取出胎儿分离培养及鉴定后获得大量转基因猪阳性成纤维细胞系。本发明克服了基因编辑猪阳性细胞系筛选周期长、效率低、成功率低的问题，对促进转基因猪的生产具有重要的意义。

公开(公告)号：CN110373390A

公开(公告)日：2019-10-25

申请号：CN201910497791.6

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵红业 ,  赵恒 ,  角德灵 ,  徐凯祥

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种异种器官移植基础供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因，并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46多基因修饰的异种移植供体基础猪。本发明在一定程度上解决了异种器官移植中存在的抗原抗体免疫排斥反应及补体调节的共性问题，为在基础供体猪的基础上研究开发适合心脏、肾脏、肝脏等器官及胰岛、皮肤等组织特异性的异种器官移植供体猪的构建奠定了基础，对构建多基因修饰的异种移植供体猪具有重要的应用价值和应用前景。

公开(公告)号：CN106106195B

公开(公告)日：2017-07-28

申请号：CN201610665810.8

申请日：2016-08-15

Applicant: 云南农业大学 ,  魏红江

Inventor： 魏红江 ,  角德灵 ,  赵红业 ,  王跃宁 ,  芮绍辉 ,  何瑞清 ,  钟文庆 ,  余波

IPC: A01K1/00

Abstract: 本发明属于畜牧养殖技术领域，具体地说，涉及一种装配式可移动标准化饲养羊舍。所述的装配式可移动标准化饲养羊舍主要包括地形调整平台、羊舍底板、羊舍墙体、羊舍屋顶、羊舍内部设施，其组装式标准化摸块由工厂统一加工而成，本发明中整个羊舍房处于悬粪且稳定牢固，建设不受任何地形结构、地貌特征等因素的限制，适用范围较广，不会改变土地的使用性质，可以二次循环使用，装配较简单、方便，可根据不同的需要随时进行组装和拆卸，生态环保，建设周期短、成本低，能够充分地发挥中国西南山区、半山区的山羊等生物资源优势，特别适用于中国西南贫困山区、半山区等地区的养殖户发展山羊养殖业，是使贫困地区农养殖户实现脱贫致富的有效途径。

公开(公告)号：CN106755112A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201611224097.X

申请日：2016-12-27

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  王文 ,  卿玉波 ,  赵红业 ,  角德灵

IPC: C12N15/877 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/877 ,  A01K67/0273 ,  A01K2227/10 ,  A01K2227/102 ,  A01K2227/103 ,  C12N15/8772 ,  C12N15/8773

Abstract: 本发明涉及一种利用体细胞克隆技术培育地方优良家畜品种的方法。利用体细胞克隆技术培育家畜优良品种，通过从家畜群体中筛选出经济性状优良的个体，建立成纤维细胞系，利用体细胞核移植技术对上述筛选出的个体进行克隆，待克隆出生的个体达到适配年龄后，进行组合杂交，再对每一杂交组合的F1代个体的经济性状进行鉴定，对达不到选育标准的F1代个体父母，查明是父代还是母代遗传引起的性状，然后对相应的父母个体进行淘汰，对留下的后代个体中可以稳定遗传的父母再进行组群，选育出优良家畜品种。通过对本发明的实施，能批量地获得具有极其优良经济性状的家畜个体，实现家畜特有品种资源的可持续开发利用，提高家畜的育种效率和选育的成功率。

公开(公告)号：CN116640804B

公开(公告)日：2024-11-19

申请号：CN202310428547.0

申请日：2023-04-20

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  角德灵 ,  郭建雄 ,  魏太云

IPC: C12N15/877 ,  A01K67/0273

Abstract: 本发明涉及一种基于体细胞核移植技术构建三倍体猪的方法。本发明在体外建立二倍体猪细胞系，以此为核供体进行体细胞核移植，经电融合、电激活后构建克隆胚，检测其克隆胚的体外发育潜力，进一步移植至代孕母猪中继续发育，适时根据B超监测结果获取胎儿，建立胎儿成纤维细胞系进行倍性鉴定及核型分析。以三倍体猪胎儿成纤维细胞为核供体再次体细胞核移植，经电融合、电激活后构建克隆胚，检测其克隆胚的体外发育能力，并进一步移植至代孕母猪体内，生产三倍体猪。本发明克服了猪三倍体胚胎发育效率低、成功率低的问题，对三倍体猪的生产及应用具有重要的意义。

公开(公告)号：CN113913435B

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202111259580.2

申请日：2021-10-28

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李鸿辉 ,  魏红江 ,  成文敏 ,  赵红业

IPC: C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  C12N15/89 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及基于P53基因获得小型猪肿瘤疾病模型的方法，属于医学动物疾病模型领域。本方法主要包括P53基因BE3 sgRNA的设计与组装，BE3和sgRNA质粒的转染，筛选并获得P53基因关键碱基突变的阳性细胞系，利用体细胞核移植技术构建重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得P53基因突变仔猪，通过检测克隆仔猪组织中P53基因RNA及蛋白质表达水平来验证P53基因的功能，采用组织病理学及免疫组化法鉴定仔猪组织中的肿瘤；该肿瘤疾病模型可以精准模拟人类P53基因致病突变，对开展人类肿瘤的发生、形成、临床研究以及药物的研发具有重要的意义，为人类肿瘤疾病的研究和治疗提供了可靠的模型。

公开(公告)号：CN113249456A

公开(公告)日：2021-08-13

申请号：CN202110557343.8

申请日：2021-05-21

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵红业 ,  赵恒 ,  角德灵 ,  范柠粼

IPC: C12Q1/6869 ,  C12Q1/06

Abstract: 本发明涉及一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法，属动物转基因技术领域。本发明针对已知的不同基因编辑类型的猪阳性成纤维细胞系，进行PCR、酶切及测序鉴定，基于细胞PCR条带灰度值，筛选获得细胞基因型鉴定所需的最低细胞量；将目的基因表达载体转染至猪成纤维细胞并进行单细胞培养筛选，当单克隆细胞系形成时，抠取后于培养板扩大培养并按上述最低细胞量计数进行基因型鉴定，经鉴定后立即进行体细胞核移植，取出胎儿分离培养及鉴定后获得大量转基因猪阳性成纤维细胞系。本发明克服了基因编辑猪阳性细胞系筛选周期长、效率低、成功率低的问题，对促进转基因猪的生产具有重要的意义。

公开(公告)号：CN108342491A

公开(公告)日：2018-07-31

申请号：CN201810362449.0

申请日：2018-04-20

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵红业 ,  角德灵 ,  李鸿辉 ,  赵恒

IPC: C12Q1/6888

Abstract: 本发明涉及一种筛选异种移植供体猪最佳基因组合的方法，属动物生物技术领域。以人成纤维细胞为研究对象，建立人成纤维细胞体外相容性评价方法，用此方法验证已报道的心脏或其他移植存活时间长的基因修饰猪成纤维细胞的结果，筛出更适合的补体调节因子、免疫应答因子及抗凝血因子，在GTKO的基础上，对上述因子组合后进行定点敲入或敲除，再对不同多因子组合的猪成纤维细胞用此方法进行早期筛选，获得3种以上最佳基因组合的细胞再克隆，克隆猪进行猪-非灵长类的心脏移植验证此筛选方法的可靠性。本发明不需在获得基因组合修饰猪的基础上即可评价最佳基因组合，将极大地节约基因组合筛选时间和经费投入，对开发真正的异种移植供体猪具有重大的意义。