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公开(公告)号：CN117384812A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311320966.9
申请日：2023-10-12
Applicant: 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种生产肝素前体的重组大肠杆菌及其构建和应用。本发明以益生菌大肠杆菌Nissle 1917为宿主，通过研究KfiB在肝素前体合成中的作用并研究KfiB和肝素前体合酶KfiAC之间的量级变化来设计提高肝素前体的产量，明确了kfiACB表达的最优结构，通过不同组合优化肝素前体产量达到0.349g/L，并在突变文库中筛选RBS进一步优化kfiACB的表达量，肝素前体产量在摇瓶上可以达到0.97g/L，相比于野生型菌株产量提高了6倍以上。
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公开(公告)号：CN114292338A
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202111664146.2
申请日：2021-12-31
Applicant: 南京汉欣医药科技有限公司
IPC: C07K19/00 , C07K14/605 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N15/81 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12R1/19 , C12R1/125 , C12R1/84
Abstract: 本发明公开了一种融合蛋白及其制备司美格鲁肽中间体多肽的方法，属于基因工程及多肽制备技术领域。所述融合蛋白包括一段融合肽，蛋白酶酶切位点和目的主分子序列。通过优化融合肽序列，改变蛋白等电点及亲水性等性质，有效提高了融合蛋白的表达量，最高可达13.1g/L；同时，也改善了融合蛋白的性状，利于后续提取、酶切及纯化工艺的开发，酶切后中间体多肽的量为3.62g/L。从源头降低了司美格鲁肽中间体多肽Arg34GLP‑1(9‑37)的生产成本，有利于工业化放大，适用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN109913437A
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201910264385.5
申请日：2019-04-03
Applicant: 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种硫酸软骨素酶的筛选，鉴定及优化表达，属于生物工程技术领域。本发明从自然界中筛选鉴定出一种硫酸软骨素酶，其氨基酸序列与NCBI报道的硫酸软骨素酶最高相似度为85％，然后在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中优化表达，实现了高酶活的硫酸软骨素酶高效生物合成，其最高酶活为11976.5U/L，而且整个工艺和后处理相对更简单。本发明为在医药、化妆品、生物领域制备含低分子量硫酸软骨素的产品中具有潜在而广泛的应用价值，为微生物系统高效发酵制备高酶活的硫酸软骨素酶奠定了基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN114292338B
公开(公告)日：2023-01-03
申请号：CN202111664146.2
申请日：2021-12-31
Applicant: 南京汉欣医药科技有限公司
IPC: C07K19/00 , C07K14/605 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N15/81 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12R1/19 , C12R1/125 , C12R1/84
Abstract: 本发明公开了一种融合蛋白及其制备司美格鲁肽中间体多肽的方法，属于基因工程及多肽制备技术领域。所述融合蛋白包括一段融合肽，蛋白酶酶切位点和目的主分子序列。通过优化融合肽序列，改变蛋白等电点及亲水性等性质，有效提高了融合蛋白的表达量，最高可达13.1g/L；同时，也改善了融合蛋白的性状，利于后续提取、酶切及纯化工艺的开发，酶切后中间体多肽的量为3.62g/L。从源头降低了司美格鲁肽中间体多肽Arg34GLP‑1(9‑37)的生产成本，有利于工业化放大，适用于工业化生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112877316A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110095773.2
申请日：2021-01-25
Applicant: 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了新硫酸软骨素酶及表达硫酸软骨素酶的乳酸乳球菌，属于生物工程技术领域。本发明通过将野生型的硫酸软骨素酶氨基酸序列第180位、233位、296位氨基酸进行一个或多个突变，获得了硫酸软骨素酶的酶活提高的突变体。将本发明构建的任一突变体在乳酸乳球菌中表达，可实现高酶活的硫酸软骨素酶的生物合成，其酶活可达35800U/L，比原始菌种酶活提高了200％，而且整个工艺和后处理相对更简单。本发明的乳酸乳球菌可用于硫酸软骨素的安全生产，在食品、医药、化妆品等领域制备含低分子量硫酸软骨素的产品中具有潜在而广泛的应用价值，为微生物系统高效发酵制备高酶活的硫酸软骨素酶奠定了基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN109913437B
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN201910264385.5
申请日：2019-04-03
Applicant: 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种硫酸软骨素酶的筛选，鉴定及优化表达，属于生物工程技术领域。本发明从自然界中筛选鉴定出一种硫酸软骨素酶，其氨基酸序列与NCBI报道的硫酸软骨素酶最高相似度为85％，然后在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中优化表达，实现了高酶活的硫酸软骨素酶高效生物合成，其最高酶活为11976.5U/L，而且整个工艺和后处理相对更简单。本发明为在医药、化妆品、生物领域制备含低分子量硫酸软骨素的产品中具有潜在而广泛的应用价值，为微生物系统高效发酵制备高酶活的硫酸软骨素酶奠定了基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN114763518B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202111062175.1
申请日：2021-09-10
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/65 , C12N15/64 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12N15/61 , C12P19/26 , C12R1/84 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了发酵生产肝素的酵母工程菌的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先将肝素合成途径中的外源基因肝素前体合酶基因kfiC，α4‑N‑乙酰氨基葡糖转移酶酶基因kfiA和UDP‑葡萄糖脱氢酶编码基因tuaD分别整合到毕赤酵母和酿酒酵母基因组中，初步构建了肝素前体合成途径，之后分别在毕赤酵母和酿酒酵母中表达筛选并优化N‑脱乙酰磺酸转移酶、葡萄糖醛酸C5‑变构酶、磺酸乙酰肝素2‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素6‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素3‑磺酸转移酶，得到合成不同磺酸化程度的磺酸乙酰肝素的生产菌株。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成不同磺酸化程度的肝素。
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