核苷酸序列构建的CRISPR重组质粒靶向编辑ISS序列的方法

    公开(公告)号:CN110714008A

    公开(公告)日:2020-01-21

    申请号:CN201910985414.7

    申请日:2019-10-17

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明提供一种核苷酸序列构建的CRISPR重组质粒靶向编辑ISS序列的方法,步骤为:靶向设计sgRNAqingqin oligo序列,两端加BsmBI质粒酶切位点,构建重组质粒,转化,铺板,挑单克隆,提质粒,测序,序列比对,经鉴定,构建成功。本发明采用CRISPR case 9 sgRNAqingqin重组质粒,可以精准靶向编辑(包括删除、插入及突变)ISS序列,也可以达到使剪接沉默子ISS序列失去作用或作用减弱的效果,从而显著促进SMN2外显子7列入,而且该重组质粒可以在细胞内持续性表达发挥作用,一次性转染即可,是治疗相关遗传性疾病最有潜力的方法。

    一种SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞的建立方法及应用

    公开(公告)号:CN114107190A

    公开(公告)日:2022-03-01

    申请号:CN202111467078.0

    申请日:2021-12-02

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明属于生物医疗技术领域,本发明公开了一种SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞的建立方法,包括以下步骤:通过对SMA模型小鼠进行基因型鉴定,选取基因型为SMA小鼠BMMSC提取分离,用培养基培养,次日进行换液;倒置显微镜观察细胞形态,待其长满后用胰酶消化,进行传代继续培养;F3代细胞用于后续实验。本发明还公开了SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定试剂盒,另外还公开了本发明所构建的SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞的应用,本发明首次利用原代培养的SMA小鼠骨髓间充质干细胞,原代细胞呈梭形,仅有两个拷贝的SMN2基因,无SMN1基因的干扰,因其来源于SMA小鼠自身,是脊髓性肌萎缩小鼠体外最真实的模拟。

    NOVA1促SMN2外显子7列入的验证方法及其应用

    公开(公告)号:CN112481272A

    公开(公告)日:2021-03-12

    申请号:CN202011535839.7

    申请日:2020-12-23

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明提供一种NOVA1促SMN2外显子7列入的验证方法及其应用,验证方法包括如下步骤:(1)RT‑PCR及酶切电泳分析SMN2全长基因在不同组织中的表达;(2)寻找SMN2全长基因在中枢系统中高表达的机制;(3)验证NOVA1是促进SMN2全长基因表达重要的剪接因子;(4)通过体外细胞实验证明敲降和过表达NOVA1显著抑制和促进SMN2外显子7列入;(5)证实NOVA1是通过结合外显子7靶向序列促进SMN2外显子7列入;(6)构建小鼠模型,证实NOVA1治疗脊髓、脑、肌肉SMN2列入比例均明显上升,其中大脑中SMN2外显子7列入上调具有显著差异。本发明证实NOVA1是通过结合外显子7靶向序列促进SMN2外显子7列入,并显著提升SMN蛋白的表达,而且该重组质粒可以在细胞内持续性表达,不用持续性给药。

    一种肝癌动物模型的制备方法

    公开(公告)号:CN110558280A

    公开(公告)日:2019-12-13

    申请号:CN201910884959.9

    申请日:2019-09-19

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明提供一种肝癌动物模型的制备方法,包括以下具体步骤:(1)选取4周龄的ICR小鼠,观察饲养2周;将HepG2细胞在加有10%胎牛血清的DMEM培养基中培养传代扩增后用注射器注射入ICR小鼠腹腔;(2)待小鼠出现明显腹水后抽出腹水2mL,加入离心管内,离心,弃上清;加入5mL PBS溶液重悬、吹洗,再离心5分钟,弃上清;(3)用PBS溶液以步骤(2)中同样的方法重复洗2-3遍;(4)在步骤(3)中弃上清后的沉淀内加入5mL PBS溶液吹散细胞,离心3分钟;用精密移液器将上清和沉淀上层的红细胞取出,保留下层白色沉淀;本发明制备的原发性肝癌小鼠模型的效果大大优于目前已有的原发性肝癌动物模型建立方法,较已有模型具有更加真实性、实用性、方便性、经济性。

    操作速度快的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中应用

    公开(公告)号:CN105938065B

    公开(公告)日:2019-03-12

    申请号:CN201610404345.2

    申请日:2014-09-26

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开了一种操作速度快的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中应用,将细胞接种于载玻片式培养皿中进行细胞爬片,细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定;所述载玻片式培养皿设有培养皿体和皿盖,培养皿体型号分单孔室和多孔室两种;各孔室面积大于载玻片,皿体底直接作为载玻片使用,皿体底外侧面设有与载玻片尺寸对应的长方形框痕线凹沟,在外力作用下可将皿体的底部沿长方形框痕线凹沟脱出。本发明适用于玻璃切片的各种免疫组织化学染色实验,可显著减少抗体和试剂用量,避免染色时液体流淌和扩散,提高操作速度。尤其可适用于细胞爬片或细胞涂片的实验研究中进行大规模,大样本多组别的的免疫组化染色。

    核壳结构量子点的制备方法、靶向肿瘤标志物GPC-3的荧光纳米探针及其制备方法

    公开(公告)号:CN105112046A

    公开(公告)日:2015-12-02

    申请号:CN201510629766.0

    申请日:2015-09-29

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明提供一种核壳结构量子点的制备方法、靶向肿瘤标志物GPC-3的荧光纳米探针及其制备方法,其中荧光纳米探针的制备方法为:制备以ZnS为壳层的核壳结构量子点;以ZnS为壳层的核壳结构量子点表面的羧基被碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化,然后加入单抗GC33使之与以ZnS为壳层的核壳结构量子点表面的活化羧基形成酰胺键,将GC33(IgG2a,κ)修饰到量子点表面得到纳米探针(GC-QDs)。本发明通过将GC-33修饰到量子点的表面制备得到高特异性、高靶向性的纳米探针,通过克服生物组织对荧光干扰的影响,实现对肝癌的原位、活体标记与成像,为荧光量子点的临床应用提供实验基础和理论研究。

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