公开(公告)号：CN114774347A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210246470.0

申请日：2022-03-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  曹贝贝 ,  朱荣香 ,  李甲明 ,  明美玲 ,  余金珊 ,  赵永琪 ,  汪润泽 ,  单燕飞 ,  赵渴姣

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种梨茎原生质体的分离方法。本发明的方法包括组织酶解、原生质体释放、纯化的步骤。其中原生质体释放对象为酶解后的植物组织残渣，经过多次的释放过程，获得大量完整的原生质体；经过蔗糖界面离心纯化方法，获得背景干净的原生质体，对梨遗传重组、体细胞杂交、以及单细胞测序等具有重大意义。

公开(公告)号：CN114891793A

公开(公告)日：2022-08-12

申请号：CN202210660916.4

申请日：2022-06-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  明美玲 ,  龙虹郡 ,  叶志成 ,  陈佳丽 ,  田荣 ,  李甲明 ,  汪润泽 ,  单燕飞

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/84 ,  A01H4/00 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了一种梨CRISPRa基因转录激活系统及其应用，属于植物基因工程技术领域。包括靶基因的选择；sgRNA的设计；CRISPRa基因转录激活载体的构建；梨愈伤组织的遗传转化；愈伤组织中梨CRISPRa基因转录激活倍数的统计与分析；靶基因转录激活的愈伤组织表型鉴定与分析。本发明构建了一种高效的梨CRISPRa基因转录激活系统，并实现了梨花青苷代谢通路靶基因PybZIPa的单基因激活以及PyMYB114和PybHLH3双基因激活，PyDFR、PyANS和PyUFGT的多基因同时激活，得到了与预期相符的基因功能获得型的表型和花青苷合成结构基因的表达模式，对梨花青苷代谢通路相关靶基因进行了功能鉴定，为梨中基因功能研究和分子遗传育种提供了更高效简便的途径。

公开(公告)号：CN114774347B

公开(公告)日：2023-07-04

申请号：CN202210246470.0

申请日：2022-03-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  曹贝贝 ,  朱荣香 ,  李甲明 ,  明美玲 ,  余金珊 ,  赵永琪 ,  汪润泽 ,  单燕飞 ,  赵渴姣

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种梨茎原生质体的分离方法。本发明的方法包括组织酶解、原生质体释放、纯化的步骤。其中原生质体释放对象为酶解后的植物组织残渣，经过多次的释放过程，获得大量完整的原生质体；经过蔗糖界面离心纯化方法，获得背景干净的原生质体，对梨遗传重组、体细胞杂交、以及单细胞测序等具有重大意义。

公开(公告)号：CN107686840A

公开(公告)日：2018-02-13

申请号：CN201710768517.9

申请日：2017-08-31

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  姚改芳 ,  张绍铃 ,  明美玲 ,  谷超 ,  汪润泽 ,  杨广艳 ,  刘海楠

IPC: C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  C12N15/82 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了梨转录因子PyERF3及其重组表达载体和应用。一种分离自‘红茄’梨具有促进梨果皮花青苷生物合成功能的转录因子PyERF3基因，其核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，其编码的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2所示。通过农杆菌介导遗传转化方法将转录因子瞬时转化烟草，草莓和梨果实，经生物学功能验证，表明本发明克隆的PyERF3基因与其它的转录因子PyMYB114和PybHLH3形成转录调控复合体促进梨果皮花青苷的生物合成的功能。PyERF3基因的发现，为促进梨果皮花青苷合成的分子育种提供新的基因资源，为实施绿色农业提供新的遗传资源，该遗传资源的开发利用有利于降低农业成本和实现环境友好。

公开(公告)号：CN107267522B

公开(公告)日：2020-04-21

申请号：CN201710485838.8

申请日：2017-06-23

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  姚改芳 ,  明美玲 ,  张绍铃 ,  谷超 ,  常耀军 ,  汪润泽 ,  殷豪

IPC: C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  C12N15/82 ,  A01H5/08 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了梨转录因子PyMYB114及其重组表达载体和应用。一种分离自‘八月红’梨具有促进植物器官脱落功能的转录因子PyMYB114基因，其核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，其编码的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2所示。通过农杆菌介导遗传瞬时转化方法把PyMYB114与它的辅助因子PybHLH3共同转化到烟草叶片，草莓和梨果实，都能促进花青苷的生物合成。这些结果表明本发明克隆的PyMYB114基因具有促进花青苷生物合成的功能。PyMYB114基因的发现，为促进红皮梨花青苷生物合成的分子育种提供新的基因资源，为实施绿色农业提供新的遗传资源。

公开(公告)号：CN107686840B

公开(公告)日：2019-11-05

申请号：CN201710768517.9

申请日：2017-08-31

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  姚改芳 ,  张绍铃 ,  明美玲 ,  谷超 ,  汪润泽 ,  杨广艳 ,  刘海楠

IPC: C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  C12N15/82 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了梨转录因子PyERF3及其重组表达载体和应用。一种分离自‘红茄’梨具有促进梨果皮花青苷生物合成功能的转录因子PyERF3基因，其核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，其编码的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2所示。通过农杆菌介导遗传转化方法将转录因子瞬时转化烟草，草莓和梨果实，经生物学功能验证，表明本发明克隆的PyERF3基因与其它的转录因子PyMYB114和PybHLH3形成转录调控复合体促进梨果皮花青苷的生物合成的功能。PyERF3基因的发现，为促进梨果皮花青苷合成的分子育种提供新的基因资源，为实施绿色农业提供新的遗传资源，该遗传资源的开发利用有利于降低农业成本和实现环境友好。

公开(公告)号：CN117264947A

公开(公告)日：2023-12-22

申请号：CN202210662170.0

申请日：2022-06-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  明美玲 ,  龙虹郡 ,  叶志成 ,  陈佳丽 ,  田荣 ,  孙聪睿 ,  薛雍松 ,  李甲明 ,  赵渴娇

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/66 ,  C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了一种梨CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用，属于植物基因工程技术领域。包括靶基因的选择；sgRNA的设计；CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建；梨愈伤组织的遗传转化；愈伤组织中CRISPR/Cas9基因编辑效率的鉴定与统计；基因定向编辑的愈伤组织表型观察与分析。本发明首先比较了四种不同的CRISPR/Cas9表达系统在梨愈伤组织中的编辑效率，从而筛选出编辑效率高达100％的一个系统对梨中花青苷和木质素生物合成相关基因进行定向编辑和功能验证，为梨中基因功能研究和分子遗传育种提供了更高效简便的途径。

公开(公告)号：CN107267522A

公开(公告)日：2017-10-20

申请号：CN201710485838.8

申请日：2017-06-23

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  姚改芳 ,  明美玲 ,  张绍铃 ,  谷超 ,  常耀军 ,  汪润泽 ,  殷豪

IPC: C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  C12N15/82 ,  A01H5/08

Abstract: 本发明公开了梨转录因子PyMYB114及其重组表达载体和应用。一种分离自‘八月红’梨具有促进植物器官脱落功能的转录因子PyMYB114基因，其核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，其编码的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2所示。通过农杆菌介导遗传瞬时转化方法把PyMYB114与它的辅助因子PybHLH3共同转化到烟草叶片，草莓和梨果实，都能促进花青苷的生物合成。这些结果表明本发明克隆的PyMYB114基因具有促进花青苷生物合成的功能。PyMYB114基因的发现，为促进红皮梨花青苷生物合成的分子育种提供新的基因资源，为实施绿色农业提供新的遗传资源。