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公开(公告)号：CN116621949A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310459317.0
申请日：2023-04-25
IPC: C07K14/145 , C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/47 , C12N15/867 , C12N5/10 , A61K39/205 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种增加狂犬病毒G蛋白分泌表达的方法及其应用。该方法包括：1)以狂犬病毒的标准毒株的糖蛋白氨基酸序列为模板，在C端加入8个组氨酸序列，将表达糖蛋白全长密码子优化标记为G0蛋白；2)将G0蛋白460‑480跨膜区氨基酸进行突变，突变为柔性肽序列：GSGSGSGSGSGSGSGSGSGS，得到密码优化后的突变体G1蛋白；3)基因序列加入限制性内切酶位点和起始密码子序列后，合成序列；4)构建表达载体，转染宿主细胞后，进行单克隆株的筛选，得到狂犬病毒G蛋白分泌表达增高的单克隆株。本发明在狂犬病毒G蛋白构象的基础上，设计表达一种保留其原有抗原性且具有稳定构象的G蛋白，且在真核表达系统中容易表达；通过小鼠免疫保护实验，验证其具有良好的抗原性。
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公开(公告)号：CN116621949B
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202310459317.0
申请日：2023-04-25
IPC: C07K14/145 , C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/47 , C12N15/867 , C12N5/10 , A61K39/205 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种增加狂犬病毒G蛋白分泌表达的方法及其应用。该方法包括：1)以狂犬病毒的标准毒株的糖蛋白氨基酸序列为模板，在C端加入8个组氨酸序列，将表达糖蛋白全长密码子优化标记为G0蛋白；2)将G0蛋白460‑480跨膜区氨基酸进行突变，突变为柔性肽序列：GSGSGSGSGSGSGSGSGSGS，得到密码优化后的突变体G1蛋白；3)基因序列加入限制性内切酶位点和起始密码子序列后，合成序列；4)构建表达载体，转染宿主细胞后，进行单克隆株的筛选，得到狂犬病毒G蛋白分泌表达增高的单克隆株。本发明在狂犬病毒G蛋白构象的基础上，设计表达一种保留其原有抗原性且具有稳定构象的G蛋白，且
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公开(公告)号：CN118812670A
公开(公告)日：2024-10-22
申请号：CN202410900069.3
申请日：2024-07-05
Applicant: 华南生物医药研究院 , 广州伯尼兹生物科技有限公司
IPC: C07K14/145 , C12P21/02
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高哺乳动物细胞狂犬病毒VLP蛋白表达量的生产方法。该方法包括步骤：S1种子细胞接种及培养：将表达狂犬病毒VLP蛋白的哺乳动物细胞种子细胞在摇瓶中利用无血清培养液培养后，接种至生物反应器中，继续用无血清培养液培养；S2蛋白收获及换液：待细胞生长参数和培养液参数达到要求时，收集培养液上清，同时加入等量的新的培养液，直至细胞生长参数达不到要求参数时，收集所有培养液离心后取上清。该方法使用生物反应器全悬浮无血清培养和批量收获相结合生产狂犬病毒VLP，有效提高细胞的表达水平，降低了疫苗的制造成本，为实现疫苗的规模化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116082524B
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310033146.5
申请日：2023-01-10
Applicant: 华南生物医药研究院
IPC: C07K19/00 , A61K39/187 , A61P31/20 , C12N15/62 , C12N15/866 , C12N5/10 , C12N7/01 , C07K16/08
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒P30‑P54重组融合蛋白及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明将P30‑P54的基因序列进行了优化设计，并将优化好的P54、P30序列进行了前后顺序置换，从而大大提高了蛋白的表达量。在此基础上，本发明还构建了重组质粒和杆状病毒，将杆状病毒转染SF9细胞，获得表达非洲猪瘟病毒P30‑P54融合蛋白，为构建表达非洲猪瘟病毒P54‑P30重组融合蛋白的亚单位疫苗奠定了基础。该重组融合蛋白还可用于检测非洲猪瘟病毒抗体，基于该非洲猪瘟病毒P30‑P54重组融合蛋白的特异性，可将其应用于非洲猪瘟病毒抗体检测的研发，从而推动我国非洲猪瘟病毒抗体检测事业的发展。
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公开(公告)号：CN113174392B
公开(公告)日：2021-12-28
申请号：CN202110381468.X
申请日：2021-04-09
Applicant: 华南生物医药研究院
IPC: C12N15/47 , C12N15/867 , C12N15/66 , C12N5/10 , C12N7/01 , A61K39/205 , A61K39/39 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种狂犬病毒的重组基因、重组假病毒及其构建方法和应用。所述重组基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明将重组基因RABV‑G‑N置换慢病毒包膜质粒中的VSV‑G，构建重组包膜质粒pCMV‑RABV‑G‑N，然后将重组包膜质粒与含绿色荧光蛋白报告基因的pLV‑eGFP和psPAX2共转染人胚胎肾细胞HEK‑293T即得到重组假病毒。本发明的重组基因具有与天然狂犬病毒的生物学特性，可以提高假病毒免疫原性，并且制备的重组假病毒包装滴度高，可以替代天然狂犬病毒进行血清中和抗体滴度的评价。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113174392A
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202110381468.X
申请日：2021-04-09
Applicant: 华南生物医药研究院
IPC: C12N15/47 , C12N15/867 , C12N15/66 , C12N5/10 , C12N7/01 , A61K39/205 , A61K39/39 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种狂犬病毒的重组基因、重组假病毒及其构建方法和应用。所述重组基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明将重组基因RABV‑G‑N置换慢病毒包膜质粒中的VSV‑G，构建重组包膜质粒pCMV‑RABV‑G‑N，然后将重组包膜质粒与含绿色荧光蛋白报告基因的pLV‑eGFP和psPAX2共转染人胚胎肾细胞HEK‑293T即得到重组假病毒。本发明的重组基因具有与天然狂犬病毒的生物学特性，可以提高假病毒免疫原性，并且制备的重组假病毒包装滴度高，可以替代天然狂犬病毒进行血清中和抗体滴度的评价。
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公开(公告)号：CN116082524A
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202310033146.5
申请日：2023-01-10
Applicant: 华南生物医药研究院
IPC: C07K19/00 , A61K39/187 , A61P31/20 , C12N15/62 , C12N15/866 , C12N5/10 , C12N7/01 , C07K16/08
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒P30‑P54重组融合蛋白及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明将P30‑P54的基因序列进行了优化设计，并将优化好的P54、P30序列进行了前后顺序置换，从而大大提高了蛋白的表达量。在此基础上，本发明还构建了重组质粒和杆状病毒，将杆状病毒转染SF9细胞，获得表达非洲猪瘟病毒P30‑P54融合蛋白，为构建表达非洲猪瘟病毒P54‑P30重组融合蛋白的亚单位疫苗奠定了基础。该重组融合蛋白还可用于检测非洲猪瘟病毒抗体，基于该非洲猪瘟病毒P30‑P54重组融合蛋白的特异性，可将其应用于非洲猪瘟病毒抗体检测的研发，从而推动我国非洲猪瘟病毒抗体检测事业的发展。
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公开(公告)号：CN114409745B
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202210337523.X
申请日：2022-04-01
Applicant: 南方医科大学 , 广州伯尼兹生物科技有限公司
IPC: C07K14/165 , C12N5/10
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高效分泌表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的生产方法。本发明通过聚纤维纸片载体利用细胞生物反应器扩增表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，用含10%胎牛血清的培养基培养后，换成含7mM咖啡因、2mM KH2PO4及25‑50mg/L硫酸葡聚糖、5mM的丁酸钠、0.5mM羟乙基淀粉、1mM L‑精氨酸的无血清培养基生产表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，每隔5‑7天收集部分培养基并重新加入上述的无血清培养基，并根据每天细胞的糖耗补充葡萄糖，使葡萄糖的浓度保持在4g/L。采用本发明提供的方法有效提高细胞的表达水平，降低了疫苗的制造成本，为实现疫苗的规模化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114409745A
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202210337523.X
申请日：2022-04-01
Applicant: 南方医科大学 , 广州伯尼兹生物科技有限公司
IPC: C07K14/165 , C12N5/10
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高效分泌表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的生产方法。本发明通过聚纤维纸片载体利用细胞生物反应器扩增表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，用含10%胎牛血清的培养基培养后，换成含7mM咖啡因、2mM KH2PO4及25‑50mg/L硫酸葡聚糖、5mM的丁酸钠、0.5mM羟乙基淀粉、1mM L‑精氨酸的无血清培养基生产表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，每隔5‑7天收集部分培养基并重新加入上述的无血清培养基，并根据每天细胞的糖耗补充葡萄糖，使葡萄糖的浓度保持在4g/L。采用本发明提供的方法有效提高细胞的表达水平，降低了疫苗的制造成本，为实现疫苗的规模化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN108611325A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810377292.9
申请日：2018-04-25
Applicant: 南方医科大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一种抗猪流行性腹泻病毒S1蛋白杂交瘤细胞株的制备方法，该由方法由以下步骤组成：(1)哺乳细胞表达的重组猪流行性腹泻病毒S1蛋白与206佐剂1：1充分混合后注射BALB/c小鼠，5μg/只。分别在首免后14d和35d进行两次加强免疫，采用206佐剂，剂量仍为5μg/只；(2)ELISA方法测定血清抗体滴度高于1：105的小鼠采集脾B淋巴细胞与杂交瘤细胞进行融合，挑选阳性克隆后进行亚克隆得到所述的抗猪流行性腹泻病毒S1蛋白杂交瘤细胞株。本方法所制备的杂交瘤细胞株可表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体可用于检测猪流行性腹泻病毒。
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