公开(公告)号：CN116621949B

公开(公告)日：2024-01-30

申请号：CN202310459317.0

申请日：2023-04-25

Applicant: 华南生物医药研究院 ,  南方医科大学

Inventor： 苏海龙 ,  莫海锋 ,  毛莹莹 ,  颜仁和 ,  李红卫 ,  何跃忠 ,  何敏杰 ,  付玉玲 ,  陈学继

IPC: C07K14/145 ,  C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/47 ,  C12N15/867 ,  C12N5/10 ,  A61K39/205 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种增加狂犬病毒G蛋白分泌表达的方法及其应用。该方法包括：1)以狂犬病毒的标准毒株的糖蛋白氨基酸序列为模板，在C端加入8个组氨酸序列，将表达糖蛋白全长密码子优化标记为G0蛋白；2)将G0蛋白460‑480跨膜区氨基酸进行突变，突变为柔性肽序列：GSGSGSGSGSGSGSGSGSGS，得到密码优化后的突变体G1蛋白；3)基因序列加入限制性内切酶位点和起始密码子序列后，合成序列；4)构建表达载体，转染宿主细胞后，进行单克隆株的筛选，得到狂犬病毒G蛋白分泌表达增高的单克隆株。本发明在狂犬病毒G蛋白构象的基础上，设计表达一种保留其原有抗原性且具有稳定构象的G蛋白，且

公开(公告)号：CN116621949A

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202310459317.0

申请日：2023-04-25

Applicant: 华南生物医药研究院 ,  南方医科大学

Inventor： 苏海龙 ,  莫海锋 ,  毛莹莹 ,  颜仁和 ,  李红卫 ,  何跃忠 ,  何敏杰 ,  付玉玲 ,  陈学继

IPC: C07K14/145 ,  C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/47 ,  C12N15/867 ,  C12N5/10 ,  A61K39/205 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种增加狂犬病毒G蛋白分泌表达的方法及其应用。该方法包括：1)以狂犬病毒的标准毒株的糖蛋白氨基酸序列为模板，在C端加入8个组氨酸序列，将表达糖蛋白全长密码子优化标记为G0蛋白；2)将G0蛋白460‑480跨膜区氨基酸进行突变，突变为柔性肽序列：GSGSGSGSGSGSGSGSGSGS，得到密码优化后的突变体G1蛋白；3)基因序列加入限制性内切酶位点和起始密码子序列后，合成序列；4)构建表达载体，转染宿主细胞后，进行单克隆株的筛选，得到狂犬病毒G蛋白分泌表达增高的单克隆株。本发明在狂犬病毒G蛋白构象的基础上，设计表达一种保留其原有抗原性且具有稳定构象的G蛋白，且在真核表达系统中容易表达；通过小鼠免疫保护实验，验证其具有良好的抗原性。

公开(公告)号：CN113336833A

公开(公告)日：2021-09-03

申请号：CN202110626921.9

申请日：2021-06-04

Applicant: 广州伯尼兹生物科技有限公司 ,  南方医科大学

Inventor： 颜仁和 ,  毛莹莹 ,  李红卫 ,  万鹏飞 ,  仇珍珍 ,  梁铁坤 ,  梁文翰 ,  陈泽典 ,  苏海龙 ,  李虎林

IPC: C07K14/165 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高效分泌表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的生产方法。本发明通过聚纤维纸片载体利用细胞生物反应器扩增表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，在细胞培养阶段用含10％胎牛血清的DMEM培养基，待培养2‑3天后，弃去全部培养基并用PBS冲洗1‑2遍去除血清，后全部换成无血清培养基开始生产表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白；每隔3‑5天收集部分培养基并重新加入无血清培养基，并根据每天细胞的糖耗补充葡萄糖，使葡萄糖的浓度保持在4g/L。采用本发明提供的方法有效提高细胞的表达水平，降低了疫苗的制造成本，为实现疫苗的规模化生产奠定了基础。