羊布鲁氏菌重组菌株M5-Δbp26-ΔznuA及制备方法与应用

    公开(公告)号:CN103667334A

    公开(公告)日:2014-03-26

    申请号:CN201310542901.9

    申请日:2013-11-05

    Abstract: 本发明公开一株羊布鲁氏菌重组菌株M5-Δbp26-ΔznuA及制备方法与应用。本发明以羊布鲁氏菌M5基因组为模板,PCR得到znuA基因的上、下游同源臂,并将其连接,得到片段ΔznuA;将片段ΔznuA克隆至载体pRE112上,得到重组质粒pRE-ΔznuA;将该质粒导入羊布鲁氏菌M5-Δbp26细胞中,分别通过氯霉素和蔗糖选择培养基筛选,得到同源重组双交换子,为重组菌株M5-Δbp26-ΔznuA。该菌株较M5亲本菌株,生长特性一致,遗传稳定使其不易返祖,毒力小且免疫效果保持良好,并因bp26基因缺失标记可应用于区分检测自然感染或人工免疫。因此,该菌株可作为一种效果更佳的标记疫苗应用于临床。

    检测猪流行性腹泻病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用

    公开(公告)号:CN103276103A

    公开(公告)日:2013-09-04

    申请号:CN201310153789.X

    申请日:2013-04-27

    Abstract: 本发明公开一种检测猪流行性腹泻病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1~6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下:首先配制RT-LAMP反应体系,包含AMV逆转录酶、1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO4、FIP引物、BIP引物、LoopF引物、LoopB引物、F3引物、B3引物以及待测样品RNA;恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读:阳性结果为出现两条红色条带,一条位于检测区内,另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉,反应结果易于观察,特异性好,非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测,易于大范围推广应用。

    一种检测布鲁菌的LAMP核酸试纸条试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN103276061B

    公开(公告)日:2014-11-12

    申请号:CN201310156085.8

    申请日:2013-04-28

    Abstract: 本发明公开一种检测布鲁菌的LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1~6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下:首先配制LAMP反应体系,包含1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO4、FIP引物、BIP引物、LoopF引物、LoopB引物、F3引物、B3引物以及待测样品DNA;恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读:阳性结果为出现两条红色条带,一条位于检测区内,另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉,反应结果易于观察,特异性好,非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测,易于大范围推广应用。

    检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用

    公开(公告)号:CN103276104B

    公开(公告)日:2014-10-08

    申请号:CN201310154212.0

    申请日:2013-04-27

    Abstract: 本发明公开一种检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1~6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下:首先配制RT-LAMP反应体系,包含AMV逆转录酶、1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO4、FIP引物、BIP引物、LoopF引物、LoopB引物、F3引物、B3引物以及待测样品RNA;恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读:阳性结果为出现两条红色条带,一条位于检测区内,另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉,反应结果易于观察,特异性好,非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测,易于大范围推广应用。

    检测猪流行性腹泻病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用

    公开(公告)号:CN103276103B

    公开(公告)日:2014-09-24

    申请号:CN201310153789.X

    申请日:2013-04-27

    Abstract: 本发明公开一种检测猪流行性腹泻病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1~6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下:首先配制RT-LAMP反应体系,包含AMV逆转录酶、1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO4、FIP引物、BIP引物、LoopF引物、LoopB引物、F3引物、B3引物以及待测样品RNA;恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读:阳性结果为出现两条红色条带,一条位于检测区内,另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉,反应结果易于观察,特异性好,非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测,易于大范围推广应用。

    牛布鲁氏菌重组菌株S19-Δbp26-BL及其制备方法与应用

    公开(公告)号:CN103289986A

    公开(公告)日:2013-09-11

    申请号:CN201310153715.6

    申请日:2013-04-27

    Abstract: 本发明公开一种牛布鲁氏菌重组菌株S19-Δbp26-BL及其制备方法与应用。本发明以牛布鲁氏菌S19基因组DNA为模板,得到bp26基因的上游同源臂,BLS基因、L7/L12基因和bp26基因的下游同源臂;将前述基因片段依次连接,得到片段Δbp26-BL;分别对pRE112和Δbp26-BL双酶切,连接,得到自杀性同源重组质粒;将该质粒导入S19-Δbp26菌株的感受态细胞中,在氯霉素的选择压力下,得到同源重组单交换子,再将同源重组单交换子涂布于选择培养基上培养,获得牛布鲁氏菌重组菌S19-Δbp26-BL。该菌株具有良好的遗传稳定性,生长特性和毒力大小好,可作为一种标记疫苗株用于临床。

    检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用

    公开(公告)号:CN103276104A

    公开(公告)日:2013-09-04

    申请号:CN201310154212.0

    申请日:2013-04-27

    Abstract: 本发明公开一种检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1~6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下:首先配制RT-LAMP反应体系,包含AMV逆转录酶、1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO4、FIP引物、BIP引物、LoopF引物、LoopB引物、F3引物、B3引物以及待测样品RNA;恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读:阳性结果为出现两条红色条带,一条位于检测区内,另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉,反应结果易于观察,特异性好,非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测,易于大范围推广应用。

    一种检测布鲁菌的LAMP核酸试纸条试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN103276061A

    公开(公告)日:2013-09-04

    申请号:CN201310156085.8

    申请日:2013-04-28

    Abstract: 本发明公开一种检测布鲁菌的LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1~6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下:首先配制LAMP反应体系,包含1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO4、FIP引物、BIP引物、LoopF引物、LoopB引物、F3引物、B3引物以及待测样品DNA;恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读:阳性结果为出现两条红色条带,一条位于检测区内,另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉,反应结果易于观察,特异性好,非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测,易于大范围推广应用。

    羊布鲁氏菌重组菌株M5-ΔznuA及制备方法与应用

    公开(公告)号:CN103571867B

    公开(公告)日:2015-09-30

    申请号:CN201310542575.1

    申请日:2013-11-05

    Abstract: 本发明公开一株羊布鲁氏菌重组菌株M5-ΔznuA及制备方法与应用。本发明通过以羊布鲁氏菌M5基因组DNA为模板,PCR扩增得到znuA基因的上、下游同源臂;将znuA基因的上、下游同源臂连接,得到片段ΔznuA;将片段ΔznuA克隆至载体pRE112上,得到自杀性同源重组质粒pRE-ΔznuA;将该质粒导入羊布鲁氏菌M5细胞中,在氯霉素的选择压力下,得到同源重组单交换子,再将同源重组单交换子涂布于选择培养基上,得到羊布鲁氏菌重组菌株M5-ΔznuA。该菌株较M5菌株,具有良好的生长特性和遗传稳定性,毒力小且免疫效果相当,因此,其有望成为新型疫苗进行应用。

    羊布鲁氏菌重组菌株M5-ΔznuA及制备方法与应用

    公开(公告)号:CN103571867A

    公开(公告)日:2014-02-12

    申请号:CN201310542575.1

    申请日:2013-11-05

    Abstract: 本发明公开一株羊布鲁氏菌重组菌株M5-ΔznuA及制备方法与应用。本发明通过以羊布鲁氏菌M5基因组DNA为模板,PCR扩增得到znuA基因的上、下游同源臂;将znuA基因的上、下游同源臂连接,得到片段ΔznuA;将片段ΔznuA克隆至载体pRE112上,得到自杀性同源重组质粒pRE-ΔznuA;将该质粒导入羊布鲁氏菌M5细胞中,在氯霉素的选择压力下,得到同源重组单交换子,再将同源重组单交换子涂布于选择培养基上,得到羊布鲁氏菌重组菌株M5-ΔznuA。该菌株较M5菌株,具有良好的生长特性和遗传稳定性,毒力小且免疫效果相当,因此,其有望成为新型疫苗进行应用。

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