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公开(公告)号：CN103289986B
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201310153715.6
申请日：2013-04-27
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开一种牛布鲁氏菌重组菌株S19-Δbp26-BL及其制备方法与应用。本发明以牛布鲁氏菌S19基因组DNA为模板，得到bp26基因的上游同源臂，BLS基因、L7/L12基因和bp26基因的下游同源臂；将前述基因片段依次连接，得到片段Δbp26-BL；分别对pRE112和Δbp26-BL双酶切，连接，得到自杀性同源重组质粒；将该质粒导入S19-Δbp26菌株的感受态细胞中，在氯霉素的选择压力下，得到同源重组单交换子，再将同源重组单交换子涂布于选择培养基上培养，获得牛布鲁氏菌重组菌S19-Δbp26-BL。该菌株具有良好的遗传稳定性，生长特性和毒力大小好，可作为一种标记疫苗株用于临床。
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公开(公告)号：CN103276061A
公开(公告)日：2013-09-04
申请号：CN201310156085.8
申请日：2013-04-28
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开一种检测布鲁菌的LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下：首先配制LAMP反应体系，包含1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO4、FIP引物、BIP引物、LoopF引物、LoopB引物、F3引物、B3引物以及待测样品DNA；恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读：阳性结果为出现两条红色条带，一条位于检测区内，另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉，反应结果易于观察，特异性好，非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测，易于大范围推广应用。
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公开(公告)号：CN103276061B
公开(公告)日：2014-11-12
申请号：CN201310156085.8
申请日：2013-04-28
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开一种检测布鲁菌的LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下：首先配制LAMP反应体系，包含1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO4、FIP引物、BIP引物、LoopF引物、LoopB引物、F3引物、B3引物以及待测样品DNA；恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读：阳性结果为出现两条红色条带，一条位于检测区内，另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉，反应结果易于观察，特异性好，非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测，易于大范围推广应用。
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公开(公告)号：CN103289986A
公开(公告)日：2013-09-11
申请号：CN201310153715.6
申请日：2013-04-27
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开一种牛布鲁氏菌重组菌株S19-Δbp26-BL及其制备方法与应用。本发明以牛布鲁氏菌S19基因组DNA为模板，得到bp26基因的上游同源臂，BLS基因、L7/L12基因和bp26基因的下游同源臂；将前述基因片段依次连接，得到片段Δbp26-BL；分别对pRE112和Δbp26-BL双酶切，连接，得到自杀性同源重组质粒；将该质粒导入S19-Δbp26菌株的感受态细胞中，在氯霉素的选择压力下，得到同源重组单交换子，再将同源重组单交换子涂布于选择培养基上培养，获得牛布鲁氏菌重组菌S19-Δbp26-BL。该菌株具有良好的遗传稳定性，生长特性和毒力大小好，可作为一种标记疫苗株用于临床。
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