公开(公告)号：CN117511757A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311504252.3

申请日：2023-11-13

Applicant: 清华大学 ,  北京理工大学

Inventor： 李春 ,  安婷 ,  冯旭东

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/52 ,  C12N15/31 ,  C12N15/29 ,  C12P19/60 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明为一种工程菌及其在合成淫羊藿苷中的应用，提供一种工程化酿酒酵母从头合成淫羊藿苷的方法及应用。本发明利用合成生物学，探究催化山奈酚生成淫羊藿苷的可行性催化顺序：8‑C‑异戊烯基化→4'‑O‑甲基化→3‑O‑鼠李糖基化→7‑O‑葡萄糖基化。本发明通过表达羽扇豆来源的8‑C异戊烯基转移酶LaPT2(氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)等四种后修饰酶，并结合代谢工程策略实现淫羊藿苷在酿酒酵母中的从头合成。本发明利用微生物合成生产得到淫羊藿苷，与传统植物提取相比，不受气候地理等条件限制，环境友好，为微生物发酵生产淫羊藿苷奠定了基础，也为其它结构复杂的黄酮类化合物的微生物可持续生产提供了思路。

公开(公告)号：CN114350646A

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN202111582565.1

申请日：2021-12-22

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 冯旭东 ,  孙秋艳 ,  李春

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12P19/02 ,  C12P19/24 ,  A61K31/704 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明“一种UDP‑糖差向异构酶PsUGE2及其在合成阿拉伯糖苷中的应用”属于生物工程与技术领域。所述一种UDP‑糖差向异构酶PsUGE2的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。基于所述UDP‑糖差向异构酶PsUGE2，本发明还提供一种合成UDP‑阿拉伯糖的方法，其采用氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或基因序列如SEQ ID NO.2所示的UDP‑糖差向异构酶PsUGE2对底物进行催化反应。本发明建立UDP‑阿拉伯糖循环体系及五环三萜阿拉伯糖苷的合成体系，实现五环三萜阿拉伯糖苷的合成，提高UDP的循环体系再生，提高反应速率，同时以蔗糖作为初始糖供体，将大大降低合成阿拉伯糖苷化合物成本。

公开(公告)号：CN109628427B

公开(公告)日：2022-03-29

申请号：CN201811564903.7

申请日：2018-12-20

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 李春 ,  冯旭东 ,  吕波

IPC: C12N9/24 ,  C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N15/81 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12P33/00 ,  C12R1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明“一种高效制备甘草次酸的重组酶及方法”，属于酶工程领域。所述重组酶包括来源于土曲霉的β‑葡萄糖醛酸苷酶AtGUS的TIM桶结构域、及来源于米曲霉的β‑葡萄糖醛酸苷酶PGUS的糖基结构域SBD和免疫球蛋白状β‑三明治结构域IMD。该重组酶AtGUS‑mix性状优良，60℃下的热稳定性比野生酶AtGUS高550％，且比酶活比野生酶AtGUS和PGUS分别高2和6.9倍。重组酶AtGUS‑mix的底物转化率达到95.06％，GA的收率达到98.82％。产物GA终浓度为19.22mM，是野生酶PGUS的5.7倍、AtGUS的2.6倍。

公开(公告)号：CN109371080B

公开(公告)日：2022-02-11

申请号：CN201811196680.3

申请日：2018-10-15

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 冯旭东 ,  李春 ,  郜雅楠 ,  张良 ,  刘潇斐 ,  郭芳

IPC: C12P19/44 ,  C12P19/18 ,  C12P19/24

Abstract: 本发明克隆了来自植物大豆的糖基转移酶基因GmSGT2，并在大肠杆菌中异源表达糖基转移酶GmSGT2。在pH 7.5、温度35℃条件下，以尿苷二磷酸半乳糖为糖基供体，GmSGT2可以转移1分子半乳糖到3‑O‑葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)和3‑O‑葡萄糖基甘草次酸(GLMG)，高效合成Gal‑GAMG和Gal‑GLMG。进一步克隆来自植物大豆的蔗糖合酶基因GmSusy和来自大肠杆菌的UDP‑葡萄糖‑4‑差向异构酶基因GalE，并在大肠杆菌中异源表达蔗糖合酶GmSusy和UDP‑葡萄糖‑4‑差向异构酶GalE。以GmSGT2偶联GmSusy和GalE构建含有UDP循环的多酶体系，在pH 7.0、温度40℃条件下，以尿苷二磷酸及蔗糖为底物，可以转移1分子半乳糖到GAMG和GLMG，实现高效、低成本合成Gal‑GAMG和Gal‑GLMG。

公开(公告)号：CN110358754B

公开(公告)日：2021-07-09

申请号：CN201910023085.8

申请日：2019-01-10

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 冯旭东 ,  李春 ,  王旭东 ,  吕波

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/81 ,  C12N15/62 ,  C12P33/00

Abstract: 本发明涉及一种提高毕赤酵母表面展示β‑葡萄糖醛酸苷酶活性的方法。该方法包括：(1)将来自于酿酒酵母基因组的Agα1蛋白的编码基因与来源于米曲霉β‑葡萄糖醛酸酶(PGUS)的编码基因融合，导入到毕赤酵母细胞中，得到通过Agα1表面展示PGUS的重组酵母细胞；(2)将来自于酿酒酵母基因组的Pir1蛋白的编码基因与PGUS的编码基因融合，导入(1)获得的重组毕赤酵母细胞中，得到Agα1与Pir1两种锚定蛋白共同展示PGUS的重组酵母菌株。实验证明，这种方法能够显著增加毕赤酵母表面展示PGUS蛋白的量，且大幅提高了PGUS的稳定性。该方法解决了通过酶解法转化甘草酸为甘草次酸过程中存在的GUS不稳定与低效率的问题，同时对优化酵母表面展示效率的研究提供了方法指导。

公开(公告)号：CN109735518B

公开(公告)日：2020-08-25

申请号：CN201910148077.6

申请日：2019-02-28

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 李春 ,  李巧峰 ,  冯旭东 ,  刘蕊

IPC: C12N9/24 ,  C12P33/00 ,  C12P33/20

Abstract: 本发明公开了一种最适反应pH提高的β‑葡萄糖醛酸苷酶突变体及其转化甘草酸工艺，属于生物工程领域。将来源于米曲霉Aspergillus oryzae Li‑3的β‑葡萄糖醛酸苷酶进行定点突变，将其编码的第79位谷氨酸、124位谷氨酸、135位谷氨酸及150位谷氨酸和200位天冬氨酸均突变为精氨酸，将突变基因的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达，得到最适反应pH提高的β‑葡萄糖醛酸苷酶突变体。本发明所述的β‑葡萄糖醛酸苷酶突变体的最适反应pH从4.5提高到6.5，调高2个pH单位，使得底物甘草酸的溶解度提高3倍。本发明所得到的β‑葡萄糖醛酸苷酶突变体具有广阔的工业化应用前景。

公开(公告)号：CN110106222A

公开(公告)日：2019-08-09

申请号：CN201811310750.3

申请日：2018-11-06

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 李春 ,  赵雨佳 ,  冯旭东 ,  朱明 ,  刘啸尘 ,  樊婧婧 ,  王晨 ,  周晓宏

IPC: C12P33/20 ,  C12N9/10 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶，可以催化甘草次酸糖基化合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸和甘草酸，属于生物技术领域。该糖基转移酶可用于体外酶法合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸和甘草酸。并且，该糖基转移酶可以用于微生物体内全合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸和甘草酸。

公开(公告)号：CN108410839A

公开(公告)日：2018-08-17

申请号：CN201810071464.X

申请日：2018-01-24

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 李春 ,  贾锦彤 ,  冯旭东 ,  吕波

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/20

CPC classification number: C12N9/2402 ,  C12P33/20 ,  C12Y302/01031

Abstract: 本发明公开了一株热稳定性提高的β-葡萄糖醛酸苷酶突变体，属于生物工程领域。将来源于嗜松篮状菌Talaromyces pinophilum Li-93(保藏号:CGMCC No.11765)的β-葡萄糖醛酸苷酶进行定点突变，将其编码的第212位缬氨酸、220位苏氨酸、238位半胱氨酸及348位缬氨酸均突变为精氨酸，并对该酶N端23个氨基酸进行截除，将突变基因的重组质粒转入毕赤酵母GS115中进行表达，得到热稳定性提高的β-葡萄糖醛酸苷酶突变体。本发明所述的β-葡萄糖醛酸苷酶突变体在55℃和70℃条件下的半衰期较野生型延长81min和25min，为野生型的3倍和2.3倍。并利用该突变体建立了高温转化GL的工艺。本发明所得到的β-葡萄糖醛酸苷酶突变体具有广阔的工业化应用前景。

公开(公告)号：CN105002188B

公开(公告)日：2018-02-27

申请号：CN201510069358.4

申请日：2015-02-10

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 李春 ,  贾海洋 ,  孙欢 ,  孙翔英 ,  冯旭东

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/113 ,  C12N15/09 ,  C12R1/19

Abstract: 发酵过程中，微生物的生长和生产经常遭受热胁迫的限制。以构建耐热大肠杆菌底盘宿主为目的，本专利利用合成生物学方法创建了一种微生物智能梯级耐热调控方法，能在细胞和菌群两个层面上提高微生物的耐热性，其主要包括梯级耐热系统和数量调控系统。梯级耐热系统包括热激蛋白(HSPs)、泛素和转录因子等耐热功能元件，以人工设计的RNA温敏开关与启动子组合为调控元件，可以实现微生物的梯级耐热。微生物数量调控系统则利用群体感应系统和RNA温敏开关组合为与门开关，动态地开启利他性程序死亡系统，有效地控制代谢热，在菌群层面上提高微生物适应热胁迫的能力。通过两个系统的协同作用，提高了微生物对特定高温以及高温波动的适应性与鲁棒性。

公开(公告)号：CN106978407A

公开(公告)日：2017-07-25

申请号：CN201610953058.7

申请日：2016-11-02

Applicant: 北京理工大学 ,  南京精微生物科技有限公司

Inventor： 李春 ,  徐赢华 ,  吕波 ,  冯旭东

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P19/56

Abstract: 本发明公开了一种β‑葡萄糖醛酸苷酶及其基因、表达载体和转化体及在制备单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)中的应用。该β‑葡萄糖醛酸苷酶的基因序列如SEQ ID No.1所示。将该基因与表达载体连接后，转化进毕赤酵母中，获得毕赤酵母工程菌。将该工程菌表达的β‑葡萄糖醛酸苷酶重组酶用于GAMG的生产时，发现该酶具有底物特异性高，无副产物甘草次酸的生成，GAMG的产率为95％左右，显示了该β‑葡萄糖醛酸苷酶及其基因在生产GAMG中的良好应用前景。