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公开(公告)号：CN105861747B
公开(公告)日：2019-03-22
申请号：CN201610246323.8
申请日：2016-04-20
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明提供一种快速鉴定柑橘脉突病毒侵染植株的方法，包括如下步骤：（1）取待测植株根部，提取总RNA；（2）以提取的总RNA为模板，利用柑橘脉突病毒的特异性下游引物EVqR4进行逆转录反应，获得cDNA；（3）以步骤（2）制得的cDNA为模板，利用特异性引物EVqF4、EVqR4进行实时荧光定量RT‑PCR检测，并制作标准曲线；（4）根据上述步骤（3）的检测结果判断植株的带病情况，对带病植株的病毒进行定量计算。本发明对柑橘脉突病毒侵染植株的鉴定具有速度快、准确度高及重复性强的特点，并可对植株内的CEVE病毒进行定量分析。
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公开(公告)号：CN108624587A
公开(公告)日：2018-10-09
申请号：CN201810425892.8
申请日：2018-05-07
Applicant: 西南大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种高效快速获取植物RNA病毒末端序列的RACE方法，步骤：1)感染目标病毒的植物的总RNA抽提；2)对提取的总RNA加Poly(A)尾；3)对加Poly(A)尾的RNA进行提纯；4)一步法RT-PCR：将加Poly(A)尾提纯后的总核酸作为模板，上游通用引物为M4Tm，设计目标病毒的特异性下游引物GSP1，利用引物M4Tm和GSP1进行扩增；对RT-PCR的扩增产物进行纯化、连接、转化和克隆验证。本发明直接在正负义链的3’序列末端加上Poly(A)尾巴，通过常规一步法RT-PCR或者进一步的巢式PCR即可获得末端序列，5’和3’末端无区别操作，步骤简单。
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公开(公告)号：CN108588113A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810368251.3
申请日：2018-04-23
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种三元穿梭载体pTY，其序列如SEQ ID NO:11所示。还公开了一种利用pTY构建柑桔黄化脉明病毒(CYVCV)侵染性克隆的方法，包括如下步骤：(1)制备CYVCV全长cDNA；(2)采用限制性内切酶Stu I、Sma I酶切如SEQ ID NO:11所示三元穿梭载体pTY，得到pTY线性化的载体；(3)酵母转化伴随的同源重组：采用醋酸锂法将线性化载体pTY与CYVCV全长cDNA共转化酵母菌YPH501；(4)侵染性克隆鉴定：同源重组质粒转化农杆菌C58C1，筛选获得CYVCV侵染性克隆。本发明有效克服了病毒全长cDNA片段在大肠杆菌中产生毒性或不稳定导致克隆失败的现象。
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公开(公告)号：CN107287193A
公开(公告)日：2017-10-24
申请号：CN201710624692.0
申请日：2017-07-27
Applicant: 西南大学
CPC classification number: C12N15/1096 , C12N15/63
Abstract: 本发明公开了一种柑橘类病毒cDNA二聚体的快速制备新方法，包括如下步骤：(1)提取柑橘类病毒的总RNA；(2)利用一步法RT-PCR对提取的总RNA进行扩增，PCR反应体系包括：PrimeScript 1step Enzyme Mix、MgCl2、类病毒全长扩增引物、总RNA、无RNA酶的水；扩增完毕即得柑橘类病毒cDNA二聚体。还公开了一种柑橘类病毒侵染性克隆的快速制备新方法，先利用前述方法制备得到柑橘类病毒cDNA二聚体，然后将该二聚体克隆进T载体，获得包含该二聚体的连接产物，即得侵染性克隆。本发明方法快速、高效、稳定，方法独特，是一种全新的制备柑橘类病毒cDNA二聚体的方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105483284A
公开(公告)日：2016-04-13
申请号：CN201510906257.8
申请日：2015-12-08
Applicant: 西南大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6851 , C12Q2600/16 , C12Q2537/143 , C12Q2545/113
Abstract: 本发明公开了一种同步检测CYVCV、CTV和CTLV的实时荧光定量RT-qRT试剂盒，包括如下3对病毒特异性RT-qPCR引物：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6。本发明通过一步RT-qPCR反应可以实现CYVCV、CTV、CTLV的同步检测及病毒定量。本发明方法与常规RT-PCR检测方法相比，提升了CYVCV、CTLV和CTV检测灵敏度100倍以上，检测时间节省3倍以上，污染几率降低30％以上，在诊断病害发生和监控病害流行及维护柑橘产业安全等方面具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN104152588A
公开(公告)日：2014-11-19
申请号：CN201410451332.1
申请日：2014-09-05
Applicant: 西南大学柑桔研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6848 , C12Q2531/113 , C12Q2549/119
Abstract: 本发明涉及一种柑桔黄脉病毒的巢式RT-PCR引物组、检测方法及试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔黄脉病毒的巢式RT-PCR外巢引物对CYVCV-1f、CYVCV-1r和内巢引物对CYVCV-2f、CYVCV-2r，利用外巢引物对进行第一轮RT-PCR扩增，再以第一轮RT-PCR扩增产物为模板用内巢引物对进行第二轮PCR扩增，检测第二轮PCR产物，获得469bp的PCR产物的待测样品即为受到柑桔黄脉病毒侵染的样品。本发明操作简便、重复性好、准确性高，其灵敏度是常规RT-PCR的100倍，对处于潜伏期的病毒也能及时检测到。
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公开(公告)号：CN104073572A
公开(公告)日：2014-10-01
申请号：CN201410322816.6
申请日：2014-07-08
Applicant: 西南大学柑桔研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明提供了一种同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物以及PCR反应试剂，所述特异性引物序列为：上游引物：5’-CCGCTTAAGAGTGGCATTAGGT-3’；下游引物：5’-TCCTGGATCGGAAAGGGAAGAG-3’。本发明还提供了同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，所述方法包括：(1)提取柑桔待测样品总RNA；(2)样品总RNA经反转录获得其cDNA；(3)以样品cDNA为模板，加入特异性引物和PCR反应试剂，进行实时荧光RT-PCR检测。该方法检测特异性强，灵敏度高，稳定性好。
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公开(公告)号：CN101560577A
公开(公告)日：2009-10-21
申请号：CN200910103937.0
申请日：2009-05-25
Applicant: 西南大学 , 中国农业科学院柑桔研究所
Abstract: 本发明涉及一种用于诊断柑桔碎叶病毒(CTLV)分子变异的快速检测方法。它包括设计特异性引物对CTLV基因组特定区域的核酸序列进行逆转录聚合酶链式反应扩增(RT－PCR)，并用Taq I、Mse I、Hinf I或其它限制性内切酶对其RT－PCR产物进行消化，然后依据电泳图谱诊断CTLV的分子变异。本发明的方法具有速度快、成本低、重复性好、稳定性高、操作性强等特点，适合大规模、高通量的样品分析，适用于田间样品检测、CTLV流行监控、脱毒苗木鉴定等多种用途。
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公开(公告)号：CN203958987U
公开(公告)日：2014-11-26
申请号：CN201420322778.X
申请日：2014-06-17
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本实用新型公开了一种可拆卸便携式昆虫标本采集存储器，包括收集箱和置于收集箱中的主体，主体包括至少一个存放盒、载物台、至少一个嵌套管，载物台由底盘、固定于底盘中部并位于底盘上方的圆柱形中空连接杆组成，嵌套管为中空圆柱形，嵌套管靠近顶端处设有两个同轴的圆孔，嵌套管依次串联后与载物台的连接杆连接构成中间柱，存放盒的中心有中空腔，环绕中空腔有多个独立的存放室，每个存放室配有一个顶盖，存放室上设有多个通气孔，存放盒通过中空腔从上往下套入中间柱重叠放置；收集箱上设置有供主体通过的过孔，过孔上设有密封盖，密封盖内侧设置有配备盖子的毒室用于存放化学药品。本实用新型具有灵活多变、空间利用率高、安全可靠等优点。
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