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公开(公告)号：CN104328220B
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201410620927.5
申请日：2014-11-06
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明涉及一种柑桔黄脉病毒的RT-LAMP引物组、检测方法及试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔黄脉病毒RT-LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总RNA为模板，应用上述的内外引物对在60～63℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应70～100min，扩增完成后80℃再反应5～10min，然后利用琼脂糖凝胶电泳或荧光染料染色，鉴定植株样品是否感染柑桔黄脉病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对RNA的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高，适合田间样品的大规模测定和茎尖嫁接脱毒苗的快速评价。
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公开(公告)号：CN104073572B
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201410322816.6
申请日：2014-07-08
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明提供了一种同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物以及PCR反应试剂，所述特异性引物序列为：上游引物：5’-CCGCTTAAGAGTGGCATTAGGT-3’；下游引物：5’-TCCTGGATCGGAAAGGGAAGAG-3’。本发明还提供了同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，所述方法包括：(1)提取柑桔待测样品总RNA；(2)样品总RNA经反转录获得其cDNA；(3)以样品cDNA为模板，加入特异性引物和PCR反应试剂，进行实时荧光RT-PCR检测。该方法检测特异性强，灵敏度高，稳定性好。
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公开(公告)号：CN118355900A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410362289.5
申请日：2024-03-28
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘种子无菌保存方法，包括步骤：S1.种子容器、实验器具消毒；S2.种子取出与清洗；S3.种子消毒：去除柑橘种子表面的水分，先用70～80％酒精浸泡30～60秒，再放入消毒液A中浸泡20～25分钟；消毒液A为质量体积比10～12％二氯异腈脲酸钠+体积比0.1～0.2％吐温20溶液；S4.冷藏保存：消毒后的柑橘种子用无菌水清洗干净，捞出清洗后的种子装入S1中灭菌后的种子容器中，盖上盖子后放入4～6℃环境中保存。采用本发明方法无菌保存柑橘种子，种子保存长达一年后培育无菌黄化苗仍然出苗率高、污染率低，方法操作简单，成本较低，在无病毒苗和转基因苗培育中应用前景广。
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公开(公告)号：CN105483284B
公开(公告)日：2018-07-06
申请号：CN201510906257.8
申请日：2015-12-08
Applicant: 西南大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851
Abstract: 本发明公开了一种同步检测CYVCV、CTV和CTLV的实时荧光定量RT‑qRT试剂盒，包括如下3对病毒特异性RT‑qPCR引物：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6。本发明通过一步RT‑qPCR反应可以实现CYVCV、CTV、CTLV的同步检测及病毒定量。本发明方法与常规RT‑PCR检测方法相比，提升了CYVCV、CTLV和CTV检测灵敏度100倍以上，检测时间节省3倍以上，污染几率降低30％以上，在诊断病害发生和监控病害流行及维护柑橘产业安全等方面具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN101956023B
公开(公告)日：2012-10-31
申请号：CN201010282983.4
申请日：2010-09-16
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种检测十种主要柑桔病害病原的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的特异性寡核苷酸探针，其特征在于：固定在所述固相载体上的特异性寡核苷酸探针具有SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示的寡核苷酸序列或者与SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示的寡核苷酸序列互补的DNA或RNA。本发明方法设计合理，能够提高检测柑桔主要病害病原的敏感性、特异性及准确性；高通量，一次检测即能检出十种柑桔病害，十种病毒基本概括了柑桔主要病害病原；能够发现各种柑桔病原物的混合感染。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101956023A
公开(公告)日：2011-01-26
申请号：CN201010282983.4
申请日：2010-09-16
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种检测十种主要柑桔病害病原的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的特异性寡核苷酸探针，其特征在于：固定在所述固相载体上的特异性寡核苷酸探针具有SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示的寡核苷酸序列或者与SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示的寡核苷酸序列互补的DNA或RNA。本发明方法设计合理，能够提高检测柑桔主要病害病原的敏感性、特异性及准确性；高通量，一次检测即能检出十种柑桔病害，十种病毒基本概括了柑桔主要病害病原；能够发现各种柑桔病原物的混合感染。
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公开(公告)号：CN104862426B
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201510330728.5
申请日：2015-06-15
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明公开了一种柑桔褪绿矮化相关病毒的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔褪绿矮化相关病毒LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总DNA为模板，应用上述的内外引物对在63～65℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应60～80min，扩增完成后78～82℃反应5～10min中止反应，然后根据浑浊度或利用荧光染料染色通过颜色变化或电泳条带进行可视化判断，鉴定植株样品是否感染柑桔褪绿矮化相关病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对样品的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高。
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公开(公告)号：CN104862426A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510330728.5
申请日：2015-06-15
Applicant: 西南大学柑桔研究所
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119
Abstract: 本发明公开了一种柑桔褪绿矮化相关病毒的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔褪绿矮化相关病毒LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总DNA为模板，应用上述的内外引物对在63～65℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应60～80min，扩增完成后78～82℃反应5～10min中止反应，然后根据浑浊度或利用荧光染料染色通过颜色变化或电泳条带进行可视化判断，鉴定植株样品是否感染柑桔褪绿矮化相关病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对样品的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高。
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公开(公告)号：CN104328220A
公开(公告)日：2015-02-04
申请号：CN201410620927.5
申请日：2014-11-06
Applicant: 西南大学柑桔研究所
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2561/101
Abstract: 本发明涉及一种柑桔黄脉病毒的RT-LAMP引物组、检测方法及试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔黄脉病毒RT-LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总RNA为模板，应用上述的内外引物对在60～63℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应70～100min，扩增完成后80℃再反应5～10min，然后利用琼脂糖凝胶电泳或荧光染料染色，鉴定植株样品是否感染柑桔黄脉病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对RNA的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高，适合田间样品的大规模测定和茎尖嫁接脱毒苗的快速评价。
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公开(公告)号：CN101914633A
公开(公告)日：2010-12-15
申请号：CN201010281556.4
申请日：2010-09-15
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种检测柑桔碎叶病毒的巢式RT-PCR检测方法和试剂盒，属于生物技术领域。本方法通过提取核酸，应用柑桔碎叶病毒特异性上游外部引物、下游外部引物对待测样品进行第一轮RT-PCR扩增，再以柑桔碎叶病毒特异性上游内部引物、下游内部引物进行第二轮PCR扩增，最后电泳判断检测样品中是否存在柑桔碎叶病毒：电泳图谱中如出现256bp特征性条带，表明该样品中存在柑桔碎叶病毒，如果没有出现256bp特征性条带，表明该样品中不存在柑桔碎叶病毒。本发明还相应地建立了检测试剂盒，可特异、灵敏、高效地检测柑桔碎叶病毒，适用于田间样品检测、CTLV流行监控、脱毒苗木鉴定等多种用途。
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