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公开(公告)号：CN111690777B
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202010680187.X
申请日：2020-07-15
Applicant: 西南大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测的特异引物，上游引物：5’‑ATGAACACTCACGGCGATGAAATTCCCACA‑3’，下游引物：5’‑GGATCCCCCATTAAATTCCATAAGCCAGTC‑3’。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测试剂盒，含有前述的特异引物。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测的方法：1)提取待测样品RNA；2)利用提取的样品RNA进行RT‑RPA反应，所用特异引物为前述的特异引物；3)RT‑RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法特异性强、灵敏度和RT‑PCR相当，操作简单便捷，检测时间很短。
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公开(公告)号：CN107014999A
公开(公告)日：2017-08-04
申请号：CN201710333029.5
申请日：2017-05-12
Applicant: 西南大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/558
CPC classification number: G01N33/577 , G01N33/558 , G01N33/56983 , G01N2333/08
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒免疫胶体金试纸条，金标垫为玻璃纤维素膜附着胶体金标记的CYVCV鼠源单克隆抗体1E1；检测线包被抗体1E1，质控线包被羊抗鼠IgG。还公开了制备方法：(1)制备胶体金；(2)制备金标抗体：利用胶体金和抗体1E1制备得到胶体金标记抗体1E1复合物；(3)将胶体金标记抗体1E1复合物喷铺于玻璃纤维素膜上，干燥，得金标垫；(4)吸取抗体1E1在硝酸纤维素膜上喷画成检测线；吸取羊抗鼠IgG在硝酸纤维素膜上喷画成质控线；(5)将样品垫、金标垫、有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在支持板上。该试纸条特异性强、灵敏度高、快速简便、成本低，检测不需要依赖于特殊仪器。
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公开(公告)号：CN111690759B
公开(公告)日：2023-10-17
申请号：CN202010772043.7
申请日：2020-08-04
Applicant: 西南大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/64
Abstract: 本发明公开了一种柑橘溃疡病菌RPA检测的特异引物，序列为：上游引物：5’‑GTTGGTGTCGTCGCTTGTATGGACTATAGT‑3’，下游引物：5’‑GCCGCGCACGGGTGCAAAAAATCTTCAACTTC‑3’。还公开了含有该特异引物的柑橘溃疡病菌RPA检测试剂盒，及一种柑橘溃疡病菌RPA检测的方法：1)提取待测样品基因组DNA；2)利用提取的样品基因组DNA进行RPA反应，所用特异引物为权利要求1中所述的特异引物；3)RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法具强特异性和高灵敏等特点，不需要PCR仪等热循环设备，操作简单。
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公开(公告)号：CN108559759A
公开(公告)日：2018-09-21
申请号：CN201810367775.0
申请日：2018-04-23
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种三元穿梭载体pCY，其核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示。还公开了一种构建CLBV侵染性克隆的方法：(1)提取感染CLBV植株总RNA，反转录后采用pCY-CLBV1F、CLBV1R与CLBV2F、pCY-CLBV2R分别进行PCR扩增，得到覆盖CLBV基因组全长的特异片段CLBV1、CLBV2；(2)用Stu I、Sma I酶切pCY；(3)TAR克隆：采用醋酸锂法将CLBV1、CLBV2和线性化pCY共转化酵母菌YPH501，通过同源重组获得CLBV全长cDNA克隆pCY-CLBV；(4)pCY-CLBV质粒转化农杆菌，接种柑桔或本生烟，鉴定获得CLBV侵染性克隆。
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公开(公告)号：CN110616202B
公开(公告)日：2022-10-04
申请号：CN201910940545.3
申请日：2019-09-30
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株，该弱毒株相对于强毒株产生的基因突变点是：TGB区域的T5306→C，A5482→G，T5792→C，A6058→G，C6096→T，以及位于CP基因上的T6817→C。还公开了该弱毒分离株在防治柑橘黄化脉明病毒强毒株系侵染方面的应用。本发明获得了柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株AY001，AY001可有效保护植株免受CYVCV强毒株系的侵染。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110628725A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910939750.8
申请日：2019-09-30
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒突变体，是在CYVCV的外壳蛋白基因上进行定点突变或者基因插入/缺失获得，定点突变是指将外壳蛋白基因上的第6817位碱基T突变为C得到，基因插入/缺失是指外壳蛋白基因上C6245至A6730共486个碱基片段被绿色荧光蛋白基因mgfp5序列替换。该突变体的构建方法：(1)质粒酶切：pCY-CYVCV-mcp(T→C)突变体构建的酶切反应采用限制性内切酶SalI和Rsrl，pCY-CYVCV-△cp-gfp突变体构建的酶切反应采用Bgl II；(2)PCR扩增突变体构建所需序列片段；(3)PCR产物与质粒酶切产物重组连接构建突变体质粒，测序验证。
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公开(公告)号：CN111690777A
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN202010680187.X
申请日：2020-07-15
Applicant: 西南大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测的特异引物，上游引物：5’-ATGAACACTCACGGCGATGAAATTCCCACA-3’，下游引物：5’-GGATCCCCCATTAAATTCCATAAGCCAGTC-3’。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测试剂盒，含有前述的特异引物。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测的方法：1)提取待测样品RNA；2)利用提取的样品RNA进行RT-RPA反应，所用特异引物为前述的特异引物；3)RT-RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法特异性强、灵敏度和RT-PCR相当，操作简单便捷，检测时间很短。
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公开(公告)号：CN108588113A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810368251.3
申请日：2018-04-23
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种三元穿梭载体pTY，其序列如SEQ ID NO:11所示。还公开了一种利用pTY构建柑桔黄化脉明病毒(CYVCV)侵染性克隆的方法，包括如下步骤：(1)制备CYVCV全长cDNA；(2)采用限制性内切酶Stu I、Sma I酶切如SEQ ID NO:11所示三元穿梭载体pTY，得到pTY线性化的载体；(3)酵母转化伴随的同源重组：采用醋酸锂法将线性化载体pTY与CYVCV全长cDNA共转化酵母菌YPH501；(4)侵染性克隆鉴定：同源重组质粒转化农杆菌C58C1，筛选获得CYVCV侵染性克隆。本发明有效克服了病毒全长cDNA片段在大肠杆菌中产生毒性或不稳定导致克隆失败的现象。
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公开(公告)号：CN110628725B
公开(公告)日：2022-11-18
申请号：CN201910939750.8
申请日：2019-09-30
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒突变体，是在CYVCV的外壳蛋白基因上进行定点突变或者基因插入/缺失获得，定点突变是指将外壳蛋白基因上的第6817位碱基T突变为C得到，基因插入/缺失是指外壳蛋白基因上C6245至A6730共486个碱基片段被绿色荧光蛋白基因mgfp5序列替换。该突变体的构建方法：(1)质粒酶切：pCY‑CYVCV‑mcp(T→C)突变体构建的酶切反应采用限制性内切酶SalI和Rsrl，pCY‑CYVCV‑△cp‑gfp突变体构建的酶切反应采用Bgl II；(2)PCR扩增突变体构建所需序列片段；(3)PCR产物与质粒酶切产物重组连接构建突变体质粒，测序验证。
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公开(公告)号：CN114317598A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202110957438.9
申请日：2021-08-18
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明提供一种病毒诱导的基因沉默载体及其应用和柑橘病害防控的方法。所述基因沉默载体是基于柑橘叶斑驳病毒的侵染性克隆质粒而构建的。所述基因沉默载体是通过将目的基因片段整合到CLBV侵染性克隆质粒pCLBV201构建得到的重组质粒载体，目的基因片段优选反向连接在所述质粒载体pCLBV201中CLBV基因组cp基因终止子与3’UTR之间。本发明提供的靶向柑橘lob基因的基因沉默载体阻断柑橘溃疡病菌与靶标基因结合，可以达到良好的溃疡病防控效果，并且成本低廉，环境友好。本发明构建的靶向CYVCV基因组不同ORF的基因沉默载体能够有效抑制CYVCV在植株内转录表达，进而实现对柑橘黄脉病的预防和控制。
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