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公开(公告)号：CN108559759A
公开(公告)日：2018-09-21
申请号：CN201810367775.0
申请日：2018-04-23
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种三元穿梭载体pCY，其核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示。还公开了一种构建CLBV侵染性克隆的方法：(1)提取感染CLBV植株总RNA，反转录后采用pCY-CLBV1F、CLBV1R与CLBV2F、pCY-CLBV2R分别进行PCR扩增，得到覆盖CLBV基因组全长的特异片段CLBV1、CLBV2；(2)用Stu I、Sma I酶切pCY；(3)TAR克隆：采用醋酸锂法将CLBV1、CLBV2和线性化pCY共转化酵母菌YPH501，通过同源重组获得CLBV全长cDNA克隆pCY-CLBV；(4)pCY-CLBV质粒转化农杆菌，接种柑桔或本生烟，鉴定获得CLBV侵染性克隆。
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公开(公告)号：CN104073572B
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201410322816.6
申请日：2014-07-08
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明提供了一种同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物以及PCR反应试剂，所述特异性引物序列为：上游引物：5’-CCGCTTAAGAGTGGCATTAGGT-3’；下游引物：5’-TCCTGGATCGGAAAGGGAAGAG-3’。本发明还提供了同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，所述方法包括：(1)提取柑桔待测样品总RNA；(2)样品总RNA经反转录获得其cDNA；(3)以样品cDNA为模板，加入特异性引物和PCR反应试剂，进行实时荧光RT-PCR检测。该方法检测特异性强，灵敏度高，稳定性好。
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公开(公告)号：CN113557957B
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202110856412.5
申请日：2021-07-28
Applicant: 西南大学
Inventor： 李中安
Abstract: 本发明公开了一种蓝标型两系法杂交小麦系统的选育方法及应用。本发明创建了对隐性核不育基因ms1具有完全恢复能力且含表现剂量效应和胚乳质感的蓝粒基因Ba和外源恢复基因Rf的外源易位染色体【T4AgL(含Ba的片段)‑4BL(靠着丝点的片段).4thS和T4AgL(含Ba的片段)‑4BL(靠着丝点的片段).4thS(含Rf的片段)】以及外源易位端体【T4AgL(含Ba的片段)‑4thS(含Rf的片段).T4thS(含Rf的片段)‑4AgL(含Ba的片段).和T4thS(含Rf的片段)‑4AgL(含Ba的片段)‑4BL(靠着丝点的片段).】。完成了蓝标型两系法杂交小麦系统的改进。
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公开(公告)号：CN104328220B
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201410620927.5
申请日：2014-11-06
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明涉及一种柑桔黄脉病毒的RT-LAMP引物组、检测方法及试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔黄脉病毒RT-LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总RNA为模板，应用上述的内外引物对在60～63℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应70～100min，扩增完成后80℃再反应5～10min，然后利用琼脂糖凝胶电泳或荧光染料染色，鉴定植株样品是否感染柑桔黄脉病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对RNA的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高，适合田间样品的大规模测定和茎尖嫁接脱毒苗的快速评价。
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公开(公告)号：CN101948935A
公开(公告)日：2011-01-19
申请号：CN201010280823.6
申请日：2010-09-14
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种检测温州蜜柑萎缩病毒的RT-PCR检测方法和试剂盒，属于生物技术领域。本方法通过提取核酸、应用温州蜜柑萎缩病毒特异性引物进行RT-PCR扩增及电泳来判断检测样品中是否存在温州蜜柑萎缩病毒：电泳图谱中如出现251bp特征性条带，表明该样品中存在温州蜜柑萎缩病毒，如果没有出现251bp特征性条带，表明该样品中不存在温州蜜柑萎缩病毒。本发明还相应地建立了检测试剂盒，可特异、灵敏、高效地检测温州蜜柑萎缩病毒，适用于田间样品检测、温州蜜柑萎缩病毒流行监控、脱毒苗木鉴定等多种用途。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101914634A
公开(公告)日：2010-12-15
申请号：CN201010282065.1
申请日：2010-09-15
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种同时检测木质部难养菌和柑桔麻风病毒病多重RT-PCR检测方法及试剂盒，其关键在于：以木质部难养菌上游引物、木质部难养菌下游引物、柑桔麻风病毒上游引物、柑桔麻风病毒下游引物对待侧样品进行RT-PCR扩增，最后电泳鉴定。同时也提高了一种产品操作简便，适合大规模、高通量的样品分析的检测试剂盒。速度快，从样品制备到获取检测结果仅需6小时，特别适合口岸检疫；重复性好、稳定性高。同一样品的不同检测批次，不同人员操作，其结果一致性100％；试剂盒产品操作简便，适合大规模、高通量的样品分析。
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公开(公告)号：CN115380722A
公开(公告)日：2022-11-25
申请号：CN202211258876.7
申请日：2022-10-14
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明属于植物嫁接技术领域，具体涉及一种提高高温期柑桔带叶嫁接成活率的保湿方法，将老熟柑桔接穗嫁接至砧木苗上，接穗具有叶片，对接穗和砧木进行保湿处理，保湿处理的过程包括：使用保湿件完全包裹接芽叶片和接芽，再使用保湿袋罩住砧木和接穗并密封；用遮阳材料进行遮阳；将砧木和接穗置于日最高气温为35℃以上环境中培养，培养8～15天后解除保湿袋。本发明中，遮阳材料减少阳光热辐射，保湿件完全包裹接芽叶片和接芽，保湿件吸收热量后水分蒸发，降低接芽叶片温度，并且，保湿件能够将高温水蒸汽隔离在外，避免高温水蒸汽直接接触接芽叶片，有效降低高温对叶片造成热伤害，进而大幅度提高高温期柑桔带叶嫁接的成活率。
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公开(公告)号：CN105176934B
公开(公告)日：2018-09-18
申请号：CN201510678752.8
申请日：2015-10-16
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种柑桔黄化脉明病毒长期离体保存方法，在有活性的柑桔黄化脉明病毒提取液中加入等体积的保护剂，颠倒混合后迅速置于液氮中2～3min，然后转移至‑80℃超低温冰箱保存；所述保护剂为用PBS缓冲液配制的含13～17％葡萄糖，5～7％蛋白胨以及10～30％甘油的溶液；所述的PBS缓冲液为：将NaCl 6.8～8g，Na2HPO4·12H2O 2.2～2.9g，KH2PO40.1～0.2g，KCl 0.15～0.2g，NaN30.2～0.5g，吐温‑200.5～1.5mL，1000mL去离子水溶解灭菌备用。本方法离体保存的柑桔黄化脉明病毒在保存2年后仍能保持极高的侵染活性。
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公开(公告)号：CN108531502A
公开(公告)日：2018-09-14
申请号：CN201810367772.7
申请日：2018-04-23
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑桔衰退病毒侵染性克隆的构建方法，步骤：(1)三个覆盖CTV基因组全长特异片段CTV1、CTV2、CTV3的长链RT-PCR扩增；(2)三元穿梭载体pCY线性化；(3)TAR克隆：采用醋酸锂转化法将CTV1、CTV2、CTV3回收片段和线性化的三元穿梭载体pCY共转化酵母菌YPH501；(4)转化农杆菌；(5)农杆菌介导接种，从而鉴定获得CTV侵染性克隆。还公开了侵染性克隆的接种方法：(1)播种：柑桔种子剥去外种皮播于培养基，暗培养；2)离心收集携带CTV侵染性克隆与Hc-Pro或P19表达质粒的农杆菌细胞，用接种缓冲液悬浮；(3)真空浸润；(4)暗培养。
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公开(公告)号：CN108441582A
公开(公告)日：2018-08-24
申请号：CN201810596969.8
申请日：2018-06-11
Applicant: 西南大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种柑橘鳞皮病毒的RT-LAMP检测试剂盒，包括引物对F3-5/B3-5和FIP3-5/BIP3-5，序列为：F3-5:5’-CTTTGAGTCCATCAACTGTT-3’，B3-5:5’-TCACTCTGAAGCTGACAT-3’，FIP-5:5’-GGTGAAGGACCAACTAGGACGTTGCTGAAATCTGCCTC-3’,BIP-5:5’-GAAACCCCTTGTTCTTGTCGGGTGCTATAATTTACAGCCTCA-3’。还公开了柑橘鳞皮病毒的RT-LAMP检测方法，提取样品总RNA，利用前述试剂盒进行RT-LAMP扩增，58～68℃扩增40～80min。
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