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公开(公告)号：CN111690759B
公开(公告)日：2023-10-17
申请号：CN202010772043.7
申请日：2020-08-04
Applicant: 西南大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/64
Abstract: 本发明公开了一种柑橘溃疡病菌RPA检测的特异引物，序列为：上游引物：5’‑GTTGGTGTCGTCGCTTGTATGGACTATAGT‑3’，下游引物：5’‑GCCGCGCACGGGTGCAAAAAATCTTCAACTTC‑3’。还公开了含有该特异引物的柑橘溃疡病菌RPA检测试剂盒，及一种柑橘溃疡病菌RPA检测的方法：1)提取待测样品基因组DNA；2)利用提取的样品基因组DNA进行RPA反应，所用特异引物为权利要求1中所述的特异引物；3)RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法具强特异性和高灵敏等特点，不需要PCR仪等热循环设备，操作简单。
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公开(公告)号：CN112725225A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202011587109.1
申请日：2020-12-29
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种柑橘黄龙病病原菌的试管培养方法。所述培养方法，包括：柑橘黄龙病病原菌培养方法，其特征在于，包括：(1)柑橘黄龙病毒源准备；(2)毒源材料表面消毒处理；(3)试管砧木准备和嫁接接种；(4)增殖培养；所述增殖培养包括以下步骤：MS液体培养基配制，向培养基中添加多菌灵，分装到带滤纸桥的试管中，灭菌；随后采用试管嫁接法接种黄龙病病原菌，切取经消毒处理的毒源材料的腋芽，嫁接于柑橘试管砧木上；然后将嫁接苗放入滤纸桥中；再于24‑28℃暗室培养14～21d，待试管嫁接带菌芽的萌芽长至0.5‑1.0cm时，转入12‑16h的光周期下培养。本发明的方法重现性好；可使柑橘黄龙病病原菌短时间内增殖到高浓度水平。
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公开(公告)号：CN110741854A
公开(公告)日：2020-02-04
申请号：CN201911102294.8
申请日：2019-11-12
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一种降低患柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法。应用碳量子点纳米颗粒制备碳量子点纳米土霉素，并树干注射于黄龙病罹病柑橘植株。所述碳量子点纳米土霉素的制备在于碳量子点纳米颗粒制备和碳量子点纳米土霉素制备。所述碳量子点纳米土霉素具有尺寸小的优点，小于筛管的孔径，而病原菌寄生于植物的筛管中，因此具有较好的杀菌效果；且相应的溶液性质稳定，均一，符合注射要求。所提供的降低患柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法对于柑橘黄龙病的防治具有重要意义，可在农业中具有大规模应用的潜力。
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公开(公告)号：CN108559759A
公开(公告)日：2018-09-21
申请号：CN201810367775.0
申请日：2018-04-23
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种三元穿梭载体pCY，其核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示。还公开了一种构建CLBV侵染性克隆的方法：(1)提取感染CLBV植株总RNA，反转录后采用pCY-CLBV1F、CLBV1R与CLBV2F、pCY-CLBV2R分别进行PCR扩增，得到覆盖CLBV基因组全长的特异片段CLBV1、CLBV2；(2)用Stu I、Sma I酶切pCY；(3)TAR克隆：采用醋酸锂法将CLBV1、CLBV2和线性化pCY共转化酵母菌YPH501，通过同源重组获得CLBV全长cDNA克隆pCY-CLBV；(4)pCY-CLBV质粒转化农杆菌，接种柑桔或本生烟，鉴定获得CLBV侵染性克隆。
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公开(公告)号：CN106480193A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201610914813.0
申请日：2016-10-20
Applicant: 西南大学
Abstract: 一种柑橘轮斑病菌分子检测的引物及其检测方法，利用RAPD技术筛选出柑橘轮斑病菌中的2条特异性的基因组DNA序列，通过NCBI数据库的Blast比对分析，未获得同源序列信息，表明所获得的基因组DNA序列特异性较高；然后根据序列测定结果进行特异引物设计，并利用SCAR-PCR技术成功建立了包括2对特异引物Cc-SP1和Cc-SP2的分子检测体系。本发明建立了柑橘轮斑病菌的PCR检测体系，该方法快速、准确、灵敏度高，可应用于柑橘轮斑病的鉴定和早期预测预报。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104073572B
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201410322816.6
申请日：2014-07-08
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明提供了一种同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物以及PCR反应试剂，所述特异性引物序列为：上游引物：5’-CCGCTTAAGAGTGGCATTAGGT-3’；下游引物：5’-TCCTGGATCGGAAAGGGAAGAG-3’。本发明还提供了同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，所述方法包括：(1)提取柑桔待测样品总RNA；(2)样品总RNA经反转录获得其cDNA；(3)以样品cDNA为模板，加入特异性引物和PCR反应试剂，进行实时荧光RT-PCR检测。该方法检测特异性强，灵敏度高，稳定性好。
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公开(公告)号：CN117821505A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202410019844.4
申请日：2024-01-06
Applicant: 西南大学
IPC: C12N15/84 , C12N15/65 , C12N15/113 , A01H5/00 , A01H6/20
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，提供了一种柑橘芳樟醇合酶基因的启动子及其在柑橘等植物对细菌性病原体抗性中的应用，细菌病原体为柑橘溃疡病原菌黄单胞杆菌和丁香假单胞菌。合酶基因启动子是通过将柑橘芳樟醇合酶基因STS4的启动子与GUS报告基因融合形成，并在拟南芥中表达。本发明通过对东方红桔和长寿沙田柚芳樟醇合酶基因STS4的启动子进行克隆和报告基因载体构建，通过农杆菌转化拟南芥，筛选阳性植株，鉴定其转录激活活性，发现该启动子决定了柑橘种间芳樟醇含量和对柑橘溃疡病抗性的差异，并揭示出该启动子不仅具有组成型活性和柑橘种间差异，还能对病原侵染、机械损伤等环境压力做出应激上调，本发明为柑橘类抗性品种的育种提供了技术途径。
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公开(公告)号：CN110616202B
公开(公告)日：2022-10-04
申请号：CN201910940545.3
申请日：2019-09-30
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株，该弱毒株相对于强毒株产生的基因突变点是：TGB区域的T5306→C，A5482→G，T5792→C，A6058→G，C6096→T，以及位于CP基因上的T6817→C。还公开了该弱毒分离株在防治柑橘黄化脉明病毒强毒株系侵染方面的应用。本发明获得了柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株AY001，AY001可有效保护植株免受CYVCV强毒株系的侵染。
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公开(公告)号：CN110628725A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910939750.8
申请日：2019-09-30
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒突变体，是在CYVCV的外壳蛋白基因上进行定点突变或者基因插入/缺失获得，定点突变是指将外壳蛋白基因上的第6817位碱基T突变为C得到，基因插入/缺失是指外壳蛋白基因上C6245至A6730共486个碱基片段被绿色荧光蛋白基因mgfp5序列替换。该突变体的构建方法：(1)质粒酶切：pCY-CYVCV-mcp(T→C)突变体构建的酶切反应采用限制性内切酶SalI和Rsrl，pCY-CYVCV-△cp-gfp突变体构建的酶切反应采用Bgl II；(2)PCR扩增突变体构建所需序列片段；(3)PCR产物与质粒酶切产物重组连接构建突变体质粒，测序验证。
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公开(公告)号：CN104328220B
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201410620927.5
申请日：2014-11-06
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明涉及一种柑桔黄脉病毒的RT-LAMP引物组、检测方法及试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔黄脉病毒RT-LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总RNA为模板，应用上述的内外引物对在60～63℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应70～100min，扩增完成后80℃再反应5～10min，然后利用琼脂糖凝胶电泳或荧光染料染色，鉴定植株样品是否感染柑桔黄脉病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对RNA的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高，适合田间样品的大规模测定和茎尖嫁接脱毒苗的快速评价。
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