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公开(公告)号：CN106995487B
公开(公告)日：2019-12-03
申请号：CN201710248386.1
申请日：2017-04-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/01
Abstract: 本发明涉及一种源于鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)VP1‑aa 23‑43多肽作为高效细胞穿膜肽的应用。所述VP1‑aa 23‑43多肽序列如SEQ ID NO.2所示。该多肽可以携带FITC在30min内进入293T细胞、HCT‑116细胞、3T3细胞、MDCK细胞、MSB1细胞，而且穿膜效率与穿膜肽浓度呈正相关性，关键特点其可高效进入悬浮培养细胞。结合激光共聚焦显微镜和流式细胞术结果显示，鸡传染性贫血病毒VP1‑aa 23‑43多肽在10μM时具有比TAT短肽的穿膜效率高2倍多。
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公开(公告)号：CN109295010A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811178904.8
申请日：2018-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM-F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于-80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF-1细胞和BHK-21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。
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公开(公告)号：CN109096376A
公开(公告)日：2018-12-28
申请号：CN201811100656.5
申请日：2018-09-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一类流感病毒HA多肽及其应用。流感病毒HA多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1、3、5、7、9。流感病毒HA蛋白KLH偶联多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2、4、6、8、10。多克隆抗体的制备方法，以SEQ ID NO.2、4、6、8、10中的任意一个作为免疫原，通过免疫小鼠获得抗HA蛋白helix A的C端具有交叉反应的多克隆抗体。本发明可直接提供流感病毒HA蛋白KLH偶联多肽作为免疫原获得抗HA蛋白helix A的C端具有交叉反应的多克隆抗体。本发明将为进一步探究基于C端helix-A多肽能否作为有效抗原表位，刺激机体产生中和抗体，评价其广谱流感多肽疫苗打下基础，提供了材料。
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公开(公告)号：CN109055613A
公开(公告)日：2018-12-21
申请号：CN201810981234.7
申请日：2018-08-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明属于动物传染病学检测领域，本发明公开了鸡Ⅰ型星状病毒环介导等温扩增检测引物组，根据鸡Ⅰ型星状病毒基因组保守序列设计引物：外引物F3和B3，序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所列；内引物FIP和BIP，序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所列。本发明还公开了鸡Ⅰ型星状病毒检测试剂盒，包括鸡Ⅰ型星状病毒环介导等温扩增检测引物组。本发明又公开了鸡Ⅰ型星状病毒环介导等温扩增检测方法：根据所设计的引物建立一种检测鸡Ⅰ型星状病毒的环介导等温扩增方法。本发明的检测方法具有快速、高效、特异性强、准确性好、灵敏度高、无需昂贵仪器设备，便于基层现场使用，方便快速。
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公开(公告)号：CN108030917A
公开(公告)日：2018-05-15
申请号：CN201711360855.5
申请日：2017-12-18
Applicant: 扬州大学
IPC: A61K39/39 , A61K39/145 , A61P37/04 , A61P31/16
CPC classification number: A61K39/12 , A61K39/39 , A61K2039/5252 , A61K2039/55516 , A61K2039/57 , C12N2760/16034
Abstract: 一种多肽免疫佐剂及其应用，涉及佐剂技术领域，特别是一种多肽免疫佐剂及其疫苗的技术领域。多肽免疫佐剂的主要成分为重组鸡Toll样受体3配体结合域，可在疫苗佐剂、疫苗和在促进机体对抗原产生免疫应答产品中应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107603957A
公开(公告)日：2018-01-19
申请号：CN201710935163.2
申请日：2017-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种高效扩增J亚群禽白血病病毒的方法，本发明采用鸡肝细胞可高效扩增J亚群禽白血病病毒，利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，缩短J亚群禽白血病病毒分离检测时间，实现提早检测到病原，提高J亚群禽白血病病毒检测方法的敏感度。在J亚群禽白血病病毒感染MOI为0.001时，ELISA检测感染维持培养3天的鸡肝细胞的效果与感染维持培养7天的DF-1细胞相当。本发明建立发高效扩增方法的将加快J亚群禽白血病病毒的净化进程，节约时间、成本，本发明在J亚群禽白血病病毒净化检测中具有很好的应用价值。
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公开(公告)号：CN106565829A
公开(公告)日：2017-04-19
申请号：CN201610937115.2
申请日：2016-11-01
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C07K14/005 , C12N15/70 , C12N2750/10022 , C12N2800/101
Abstract: 本发明还提供了一种GyV9环形病毒VP3蛋白制备方法，该方法基于重组酶ExnaseTM II将线性化的pGEX‑6p‑1载体与GyV9病毒VP3基因片段PCR产物不经酶切连接反应，直接重组克隆技术；并转化到大肠杆菌，实现VP3蛋白表达；其中，PCR扩增所述的GyV9病毒VP3基因片段时所用引物的核苷酸序列如下：上游引物1：5’‑GTTCCAGGGGCCCATGGATGCGACGGGCAC‑3’；下游引物1：5’‑GTTTTCACCGTCATTACAATCTTGCGCCTT‑3’。该方法简化克隆过程，可快速构建GyV9病毒VP3基因的原核表达载体，实现VP3基因快速克隆表达。本发明获得的GyV9病毒VP3表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3蛋白作为GyV9诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展GyV9流行病学调查提供有效诊断试剂；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN105037503B
公开(公告)日：2016-12-21
申请号：CN201510357985.8
申请日：2015-06-25
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种AGV2型环形病毒VP3可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX-6p-1线性化载体以及AGV2病毒VP3基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP3，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP3可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP3功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN103995123B
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201410266781.9
申请日：2014-06-16
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/577
Abstract: 一种竞争ELISA试剂盒检测牛布氏杆菌病的方法，属于生物技术检测领域，将超声裂解处理的牛种布鲁氏菌A99包被ELISA酶标板；再将抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru?5C10和稀释的待检血清样品加入酶标板的板孔中；并同时分别将抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru?5C10分别和已知的阴、阳性血清加入酶标板的板孔中，水浴后用PBST洗涤，再向各板孔中分别加入抗小鼠IgG酶标抗体，孵育洗涤后，进行显色反应，测得各板孔的OD450值，计算各板孔的抑制率。本发明利用建立的cELISA方法对小肠结肠炎耶尔森菌O9和大肠杆菌O157高免阳性血清进行检测，PI值均低于30%，可以有效地排除假阳性结果的发生。
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公开(公告)号：CN105779649A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610186635.4
申请日：2016-03-29
Applicant: 扬州大学 , 国药集团扬州威克生物工程有限公司
CPC classification number: C12Q1/702 , C12Q1/6804 , C12Q2531/113 , C12Q2563/107 , C12Q2545/113
Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒。所述试剂盒包括：两个抗体寡核苷酸探针、连接反应液、DNA连接酶、蛋白酶、Fast Master混合液和Universal qPCR反应液。本发明利用生物素标记的抗禽白血病病毒特异性抗体以及商品化邻位连接试剂，通过免疫PCR检测样品中禽白血病病毒抗原。实现不用对样品进行繁琐的核酸提取过程，通过PCR方法对禽白血病病毒抗原进行快速高通量检测。这一检测禽白血病病毒免疫PCR试剂盒将应用于禽白血病病毒临床检测与净化中，将填补国内外相关技术空白。
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