公开(公告)号：CN119639816A

公开(公告)日：2025-03-18

申请号：CN202411879349.7

申请日：2024-12-19

Applicant: 扬州大学

Inventor： 钱琨 ,  贺文文 ,  秦爱建 ,  丁天 ,  邵红霞 ,  许默儒

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N15/34

Abstract: 本发明公开了具有免疫抑制作用非洲猪瘟病毒蛋白真核表达载体的构建方法及应用，涉及病毒编码蛋白表达及功能研究生物技术领域。本发明以非洲猪瘟病毒基因组作为模板,采用特异性引物进行PCR扩增，回收PCR片段后与pcDNA3.1载体连接，得到阳性的重组质粒，即具有抑制细胞对Poly(dT:dT)、Poly(I:C)、外源IFN‑β刺激免疫反应功能的真核表达载体。本发明构建方法简单、合理，真核表达载体转染细胞表达后，可应用于抑制Poly(dT:dT)、Poly(I:C)、外源IFN‑β刺激细胞免疫反应中，将有助于ASFV检测方法的建立以及作为候选靶点参与疫苗的开发。

公开(公告)号：CN118638218A

公开(公告)日：2024-09-13

申请号：CN202410651611.6

申请日：2024-05-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 邵红霞 ,  熊海凤 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  秦爱建

IPC: C07K16/10 ,  C12N5/20 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明涉及一种识别传染性法氏囊病毒新型变异毒株VP2蛋白第221位氨基酸的单克隆抗体制备，本发明提供了一种仅特异性识别IBDV新型变异株VP2蛋白的单克隆抗体VP2‑5B5，经鉴定重链亚型为IgG2b，其识别的构象抗原表位的关键氨基酸位于VP2第221位氨基酸K。与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：1）本发明以IBDV新型变异株VP2的高变区蛋白作为免疫原，该段序列抗原性和亲水性良好，制备的重组蛋白rVP2‑HVR以可溶性形式表达于上清中。2）本发明制备的单克隆抗体VP2‑5B5特异性良好，仅特异性识别IBDV新型变异株VP2蛋白，可用于IBDV新型变异株的鉴别诊断。3）本发明制备的单克隆抗体VP2‑5B5所识别的抗原表位为构象表位，其所识别的关键氨基酸位于VP2第221位氨基酸K。

公开(公告)号：CN118497134A

公开(公告)日：2024-08-16

申请号：CN202410694499.4

申请日：2024-05-31

Applicant: 扬州大学

Inventor： 邵红霞 ,  熊海凤 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  秦爱建

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C07K14/08 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种识别传染性法氏囊病毒VP2蛋白第343‑348位氨基酸的单克隆抗体制备，本发明提供了一种广谱的识别IBDV VP2高变区蛋白的单克隆抗体5G10，经鉴定重链亚型为IgG1，其识别的线性抗原表位位于343PGALRP348。与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：1）本发明以IBDV新型变异株VP2的高变区蛋白作为免疫原，该段序列抗原性和亲水性良好，制备的重组蛋白rVP2‑HVR以可溶性形式表达于上清中。2）本发明制备的单克隆抗体5G10与不同毒力IBDV毒株的VP2蛋白均有良好的反应性，可用于IBDV的检测。3）本发明制备的单克隆抗体5G10所识别的抗原表位为线性表位，其所识别的关键氨基酸位于VP2 343PGALRP348。

公开(公告)号：CN118006690A

公开(公告)日：2024-05-10

申请号：CN202410035165.6

申请日：2024-01-10

Applicant: 扬州大学

Inventor： 金文杰 ,  马陈淑 ,  周洪善 ,  朱亭帆 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  羊扬 ,  闫彩虹 ,  王倩倩 ,  刘金彪 ,  王建 ,  邓建中 ,  单玉平 ,  洪枫

IPC: C12N15/866 ,  A61K39/295 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明属于基因工程和疫苗开发技术领域，公开了三种猪致病性冠状病毒主要保护性蛋白串联表达载体的构建及应用，选取PEDV、PDCoV、TGEV的中和抗原表位基因，按一定顺序与pFastBacHTA昆虫表达载体连接，通过对不同位点的酶切及测序验证是否串联成功；而后通过重组杆状病毒真核表达系统对串联基因进行融合蛋白表达，以间接免疫荧光、Western Blot验证融合蛋白表达效果；将表达融合蛋白的重组病毒免疫小鼠并通过间接免疫荧光验证其免疫原性；并以串联重组病毒感染Sf9细胞后获得的病变细胞的破碎上清作为包被抗原，建立了针对三种冠状病毒主要保护性蛋白的ELISA检测方法。本发明为预防致猪腹泻的三种冠状病毒提供了一种行之有效的方法，为冠状病毒新型疫苗的开发提供了新思路。

公开(公告)号：CN117825704A

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202410020201.1

申请日：2024-01-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  林昀 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  谢泉 ,  王伟康 ,  邵红霞 ,  秦爱建

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58 ,  G01N33/535 ,  C07K14/075 ,  C12N15/70 ,  C12N5/20 ,  C12N15/34 ,  C07K16/08

Abstract: 本发明涉及一种基于Fiber‑2蛋白和抗Fiber‑2蛋白单克隆抗体的检测鸭3型腺病毒抗体的竞争ELISA方法，首次使用单克隆抗体进行鸭3型腺病毒抗体的检测，与间接ELISA技术相比，本发明的特异性高，能够有效提高检测的准确性，且不依赖于商品化的酶标二抗，可以应用于不同物种（鸡、鸭和鹅）血清中鸭3型腺病毒抗体检测，是一种简便、快速、稳定、特异的检测鸭3型腺病毒抗体的ELISA方法。使用本发明只需采集鸭群的血清，即可快速准确地检测血清中是否含有鸭3型腺病毒抗体，本发明适合应用于基层鸭群的大批量检测。本发明为鸭3型腺病毒的感染检测以及免疫效果监测提供了技术支持，具有一定的市场应用价值。

公开(公告)号：CN107365787B

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN201710763557.4

申请日：2017-08-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 钱琨 ,  孙舒 ,  秦爱建 ,  程晓薇 ,  孔正茹 ,  顾晨曦 ,  武宗仪

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/79

Abstract: 具有免疫抑制作用禽白血病病毒衣壳蛋白真核表达载体的构建方法及应用，涉及病毒编码蛋白表达及功能研究生物技术领域。本发明以pGEX‑6p‑1‑p27/BL21质粒作为模板，采用特异性引物进行PCR扩增，回收PCR片段后与pcDNA3.1载体链接，得到阳性的重组质粒，即具有抑制细胞对LPS和Poly(I:C)刺激免疫反应功能的真核表达载体。本发明构建方法简单、合理，真核表达载体转染细胞表达后，可应用于抑制LPS或Poly(I:C)刺激细胞免疫反应中，为抗禽白血病免疫抑制药物的研究与开发提供靶点。

公开(公告)号：CN113981137B

公开(公告)日：2023-09-22

申请号：CN202110084845.3

申请日：2021-01-21

Applicant: 扬州大学

Inventor： 秦爱建 ,  尹丹 ,  吕卉 ,  鲍春晖 ,  钱琨 ,  邵红霞 ,  叶建强 ,  缪发明 ,  扈荣良

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种检测非洲猪瘟病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用。所述荧光定量PCR试剂盒中含有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物，荧光定量PCR反应试剂，以及标准品和和对照品。本发明的荧光定量PCR试剂盒可以对非洲猪瘟病毒进行检测，该试剂盒的特异性强，只与非洲猪瘟病毒特异性结合,与其他猪源病毒没有交叉反应；而且检测的灵敏度高，在标准品为1×101～1×108拷贝范围内都有极好的线性关系，可以高效检测非洲猪瘟病毒病猪棉拭子以及无临床症状的病毒携带猪，提高了检测效率。

公开(公告)号：CN115927213A

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN202211207209.6

申请日：2022-09-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 钱琨 ,  申可 ,  石彬 ,  秦爱建 ,  邵红霞

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/45 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  A61K39/17 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明本发明属于基因工程疫苗技术领域，具体涉及表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒及其构建方法和应用。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，将含优化的新城疫基因VII型株的F基因与SV40融合表达盒插入HVT US2病毒非复制区。本发明获得的重组病毒rHVT‑Fopt株，在体外可以稳定表达NDV F基因。将重组病毒rHVT‑Fopt免疫1日龄SPF鸡，免疫后28天针对新城疫强毒株的攻击可以产生100％的免疫保护。

公开(公告)号：CN110483637B

公开(公告)日：2022-06-10

申请号：CN201910659588.4

申请日：2019-07-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 秦爱建 ,  王飞 ,  王亚娟 ,  林志娴 ,  万志敏 ,  钱琨 ,  邵红霞 ,  叶建强

IPC: C07K16/10 ,  C07K16/40 ,  C12N15/13 ,  A61K39/42 ,  A61P31/16 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体、编码基因及其应用，属于生物医学技术领域。抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体特异性地识别禽流感病毒神经氨酸酶蛋白N2，具有抑制神经氨酸酶活性和中和病毒能力。本发明还克隆了抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体的轻、重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认了基因序列和氨基酸序列的唯一性。本发明涉及的单克隆抗体、可变区基因及氨基酸序列可用于N2的禽流感病毒的诊断和治疗药物研发等，具有广泛的临床应用价值。

公开(公告)号：CN114134124A

公开(公告)日：2022-03-04

申请号：CN202111318523.7

申请日：2021-11-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 秦爱建 ,  宰栩生 ,  石彬 ,  钱琨 ,  邵红霞 ,  叶建强

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/45 ,  C12N15/44 ,  C12N15/40 ,  C12N15/869 ,  A61K39/12 ,  A61K39/145 ,  A61K39/17 ,  A61P31/14 ,  A61P31/16

Abstract: 本发明提供一种重组火鸡疱疹病毒及其制备方法和应用，具体提供了一种重组火鸡疱疹病毒，在火鸡疱疹病毒基因组的HVT005区和HVT006区之间的间隔区中插入外源基因，所述外源基因选自来自鸡新城疫病毒、禽流感病毒或禽传染性囊病病毒的基因；所述火鸡疱疹病毒基因组的HVT005区和HVT006区之间的间隔区为火鸡疱疹基因组的8867nt‑9319nt之间，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明首次发现HVT005‑HVT006间隔区可作HVT外源基因插入的位点。利用CRISPR/Cas9技术在HVT基因组HVT005‑HVT006间隔区插入外源基因，可作为鸡新城疫预防和禽流感预防的疫苗候选株。